sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳（page）測定蛋白質(zhì)分子量-文庫吧
2025-07-02 17:03 本頁面
【正文】 決于分子大小 。 當(dāng)分子量在 15KD到 200KD之間時(shí) ，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系 ， 符合下式：logMW=KbX， 式中： MW為分子量 ， X為遷移率 ， k、 b均為常數(shù) ， 若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖 ， 可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳 ， 根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量 。 二 . 實(shí)驗(yàn)原理 ? SDS電泳的成功關(guān)鍵之一是電泳過程中，待別是樣品制備過程中蛋白質(zhì)與 SDS的結(jié)合程度。影響它們結(jié)合的因素主要有三個(gè)： 1) 溶液中 SDS單體的濃度，當(dāng)單體濃度大于1mmol/L時(shí)大多數(shù)蛋白質(zhì)與 SDS結(jié)合的重量比為 1:，如果單休濃度降到 mmol/L以下時(shí)，兩者的結(jié)合比僅為 1: 白質(zhì)原有的電荷差別，為保證蛋白質(zhì)與 SDS的充分結(jié)合，它們的重量比應(yīng)該為 1:4或 1:3 2) 樣品緩沖液的離子強(qiáng)度。 SDS電泳的樣品緩沖液離子強(qiáng)度較低，通常是 10～ 100mmol/L 3) 二硫鍵是否完全被還原 二 . 實(shí)驗(yàn)原理 ? 采用 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測蛋白質(zhì)分子量時(shí) ， 只有完全打開二硫鍵 ， 蛋白質(zhì)分子才能被解聚 ， SDS才能定量地結(jié)合到亞基上而給出相對遷移率和分子量對數(shù)的線性關(guān)系 。 因此在用 SDS處理樣品同時(shí)往往用巰基乙醇處理 ，巰基乙醇是一種強(qiáng)還原劑 ， 它使被還原的二硫鍵不易再氧化 ， 從而使很多不溶性蛋白質(zhì)溶解而與 SDS定量結(jié)合 。 ? 有許多蛋白質(zhì)是由亞基 （ 如血紅蛋白 ） 或兩條以上肽鏈（ 如胰凝乳蛋白酶 ） 組成的 ， 它們在 SDS和巰基乙醇作用下 ， 解離成亞基或單條肽鏈 ， 因此這一類蛋白質(zhì) ， 測定時(shí)只是它們的亞基或單條肽鏈的 MW。 ? 已發(fā)現(xiàn)有些蛋白質(zhì)不能用 SDSPAGE測定分子量 。 如電荷異?；驑?gòu)象異常的蛋白質(zhì) ， 帶有較大輔基的蛋白質(zhì) （ 某些糖蛋白 ） 以及一些結(jié)構(gòu)蛋白 ， 如膠原蛋白等 。 二 . 實(shí)驗(yàn)原理 ? 采用 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測蛋白質(zhì)分子量時(shí) ，往往采取 2種以上測定方法結(jié)合使用 。 目前其他常用測定相對分子量的方法有： ? 聚丙烯酰胺梯度凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子量（ 有濃縮樣品特點(diǎn) ， 可分次加樣；不需解離亞基 ， 適宜測定球蛋白 ， 而對纖維
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