【正文】 同工酶 RA 特異性血清標(biāo)志分子 大樣本 RA患者中的驗證 基因芯片掃描 利用多種分子生物學(xué)技術(shù)研究新 RA易感基因的致病機制 EXONCAPTURE 高通量 Solexa 分析 國外報 道的RA相關(guān) SNP 新 RA相關(guān)SNP 鑒定得到的 CNP基因 全基因組 CGH芯片篩選 CNP基因 (已完成 ) 蛋白組學(xué)鑒定 臨床診斷靶標(biāo)的應(yīng)用研究 RA易感基因 高通量Solexa 分析 高通量Solexa 分析 RA 差異 miRNA 譜 11 （三）可行性分析： 1. 前期工作基礎(chǔ) ： 1）團隊內(nèi)前期取得了大量研究成果，本項目是對這些原創(chuàng)性研究的進一步深入和轉(zhuǎn)化，保證了項目預(yù)期目標(biāo)和研究方案的可行性。 2）團隊內(nèi)長期的廣泛合作為項目順利進行奠定堅實的基礎(chǔ)，可使各課題間的密切聯(lián)系得以實現(xiàn)。 2. 學(xué)術(shù)隊伍： 1）高水平的學(xué)術(shù)帶頭 人保證了項目研究方向的準(zhǔn)確性和研究方案的可行性。 2）團隊包括了多名長江學(xué)者、跨世紀(jì)優(yōu)秀人才、國家杰出青年、百人計劃、北京市科技新星等優(yōu)秀科研人才，長期從事 RA 臨床和基礎(chǔ)研究，并具備實施大型科研項目的能力。 3）結(jié)構(gòu)合理的優(yōu)秀科研團隊保證了研究方案的順利實施：優(yōu)秀的中青年學(xué)術(shù)骨干，具備良好的大型科研課題實施的工作能力，掌握實驗涉及的所有先進技術(shù)，保證了項目的實施和技術(shù)問題的解決。 3. 臨床特色： 本項目的實施需要大量臨床標(biāo)本，本項目具有豐富的臨床資源保證了項目的順利進行，國際一流的臨床學(xué)者參與，保證了研究 方向和解決的關(guān)鍵問題切實符合臨床需要，臨床應(yīng)用具有可行性。 4. 實驗平臺： 1）所在實驗室既有教育部創(chuàng)新團隊、教育部臨床免疫重點學(xué)科，又有衛(wèi)生部重點實驗室、 211 重點學(xué)科，實驗室裝備先進，技術(shù)力量雄厚，保證了實驗需要的所有技術(shù)平臺，實驗技術(shù)在國內(nèi)處于領(lǐng)先水平。 2）具備課題實施需要的所有大型儀器。 3）具備免疫干預(yù)方法評價的一系列特有的轉(zhuǎn)基因動物模型。 （四）創(chuàng)新點與特色： 1. 提出了新的科學(xué)問題： 本 項目圍繞 RA 自身免疫啟動、異常免疫應(yīng)答、炎癥和組織破壞及干預(yù)策略等發(fā)病和治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進行研究，研究方向 具有創(chuàng)新性和突破性研究，對 RA 新的分子機制及相關(guān)分子的探索具有重要意義。 12 2. 原創(chuàng)性研究基礎(chǔ)上的新層面的進一步研究： 6 個課題均在團隊大量前期研究基礎(chǔ)上進行，是針對團隊前期發(fā)現(xiàn)的 RA 新易感基因、新抗原和新型調(diào)控分子的作用及致病機制的系統(tǒng)研究，具有很強的原創(chuàng)性，能夠創(chuàng)造一系列具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新型臨床診斷和免疫干預(yù)新方法，具有重大的理論和臨床應(yīng)用價值。 3. 高起點的新的實驗平臺： 本項目利用我們獨有的一系列轉(zhuǎn)基因動物模型進行RA 新的調(diào)控分子在動物體內(nèi)的調(diào)控機制研究，實驗涉及本課題組建立的IL33 轉(zhuǎn)基因鼠、 FOXP3/IL10 報告轉(zhuǎn)基因鼠、 RA 易感 HLADRB1*0405 轉(zhuǎn)基因鼠等，這些動物模型均為本團隊自建或合作構(gòu)建，為本團隊獨有，利用這些實驗動物模型，將對闡述常規(guī)實驗無法進行研究的新機制具有重要作用。 4. 創(chuàng)新的研究方法和原創(chuàng)性結(jié)果： 本團隊成員在糖組學(xué)、抗原表位組學(xué)等前沿學(xué)科均有原創(chuàng)性研究，在抗原糖基化修飾方面建立了新的糖蛋白合成方法，在抗原表位功能研究方面創(chuàng)立了一系列新的表位預(yù)測和實驗檢測方法，這些先進方法與豐富的臨床資源相結(jié)合，保證了本項目應(yīng)用基礎(chǔ)研究的創(chuàng)新性研究成果。 （五）課題相互關(guān)系及設(shè)置： 各課題間相互關(guān) 系 本項目擬從 RA 發(fā)病機制各環(huán)節(jié)的關(guān)鍵問題 出發(fā)，以本研究團隊的大量前期工作為基礎(chǔ)，結(jié)合國外最新研究進展設(shè)置課題。從 RA 發(fā)病機制的主要環(huán)節(jié)，在RA 發(fā)生的遺傳背景、免疫機制以及臨床診斷和干預(yù)方法等多方面，展開系統(tǒng)的研究工作?；A(chǔ)與臨床有機結(jié)合，全面地闡述 RA 免疫致病機制，為 RA 早期診斷和免疫干預(yù)提供創(chuàng)新性靶向，使我國在 RA 研究領(lǐng)域的工作從總體上達(dá)到國際前沿。在 RA 的基礎(chǔ)研究向臨床轉(zhuǎn)化、創(chuàng)新性理論等方面達(dá)到國際一流水平。為此，本項目擬設(shè)置六個課題： 課題一、 RA 相關(guān)新型自身抗原鑒定及修飾特點研究；課題二、 RA 的自身 免疫應(yīng)答機制研究；課題三、 RA 相關(guān)炎癥及免疫損傷機制；課題四、 RA 細(xì)胞免疫負(fù)調(diào)控機理研究；課題五、 RA 易感基因及早期診斷靶標(biāo)研究；課題六、 RA 干預(yù)新策略的研究。 本項目的六個課題均是圍繞 RA 發(fā)病機制中免疫異常、炎癥和組織破壞以及13 干預(yù)策略的關(guān)鍵問題進行設(shè)置，各課題既有明確的研究方向，又有課題間的密切聯(lián)系。而且，課題組成員已在上述各領(lǐng)域進行了長期的研究，不少成員間有多年的合作研究基礎(chǔ)和成果。 課題一、二、三是針對 RA 發(fā)病的自身免疫啟動、異常免疫應(yīng)答、炎癥及組織破壞三個環(huán)節(jié)中 RA 免疫病理反應(yīng)發(fā)生發(fā)展的新機制的探討 ，對 RA 抗原特異性自身免疫活化通路中關(guān)鍵性調(diào)控分子進行了系統(tǒng)研究，課題四是對課題一至三闡述的 RA 自身應(yīng)答的負(fù)調(diào)控機制研究，包括新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞和小分子等抑制性細(xì)胞和分子。課題五是對新發(fā)現(xiàn)的 RA 易感基因以及前四個課題中鑒定的新型生物標(biāo)志分子進行臨床轉(zhuǎn)化研究，為這些 RA 特異性分子用于臨床診斷靶標(biāo)奠定基礎(chǔ)。課題一至五，共同為課題六提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)，而課題六是在其他課題研究的基礎(chǔ)上，研究成果服務(wù)于 RA 治療的必要途徑，為課題一至五提供臨床落腳點。 課題設(shè)置 課題 RA 相關(guān)新型自身抗原鑒定及 修飾特點研究 預(yù)期目標(biāo)： 1. 篩選和鑒定 出 多 個 RA 發(fā)病相關(guān)的新抗原。 2. 建立新抗原的化學(xué)和酶學(xué)修飾平臺，闡明翻譯后修飾在 RA 發(fā)病中的作用。 研究內(nèi)容： 利用課題組成熟的抗原結(jié)構(gòu)、 T 細(xì)胞和動物實驗平臺，對 RA 相關(guān)新型抗原進行一系列功能研究，包括：抗原表位鑒定、 RA 易感 HLADRB1 結(jié)合特性、自身抗體產(chǎn)生、 T 細(xì)胞活化功能、關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)能力以及翻譯后修飾對抗原功能的影響。從分子、細(xì)胞、動物模型及患者外周血四個層面系統(tǒng)闡述上述新抗原的致病機制等。 本課題的主要研究內(nèi)容如下： 1. 前期組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)的新 RA 自身抗原結(jié)構(gòu)和 功能研究 1）新型 RA 相關(guān)抗原的表位分析 。 2） 抗原肽與 RA 易感 HLADRB1 分子的結(jié)合能力研究。 3）抗原肽在 HLADRB1 特異性 T 細(xì)胞激活中的作用。 14 4）新的自身抗原在 HLADR4 遺傳背景下誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的實驗研究。 2. 抗原表位組學(xué)基礎(chǔ)上 RA 特異性自身抗原的鑒定 、免疫應(yīng)答及關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)能力的影響 1） HLADR4/DR1 分子對本研究組前期鑒定的抗原肽的識別及結(jié)合作用的研究。 2）修飾抗原在 HLADRB1 特異性 T 細(xì)胞激活中的作用。 3）修飾抗原在 HLADR4 遺傳背景下誘 發(fā)關(guān)節(jié)炎的實驗研究。 4）新型 RA 中 HLADR4/1 特異性 修飾 抗原的篩選及其抗原表位的鑒定。 4. RA 相關(guān)抗原的糖基化修飾研究 1) 糖基化抗原的合成。 2) 糖基化修飾對自身抗原誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的影響。 3) 糖芯片檢測。 經(jīng)費比例： 15% 承擔(dān)單位： 中國科學(xué)院北京基因組研究所、中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 課題負(fù)責(zé)人： 陳唯軍 學(xué)術(shù)骨干： 楊光、牟峰、張明誠、董潔、孫宏賀、 趙永岐 課題 RA 的自身免疫應(yīng)答機制研究 預(yù)期目標(biāo)： 通過系統(tǒng)研究 RA 患者自身抗原特異性 T 細(xì)胞表位和 T 細(xì)胞表面分子調(diào)控自身免疫應(yīng)答的方式，以及不同 T 細(xì) 胞亞群的調(diào)控機制，深入認(rèn)識 RA 自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞活化的致病機制，最終形成擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的免疫相關(guān)疾病診斷和治療的新產(chǎn)品，提供治療或者控制嚴(yán)重影響我國人民身體健康的自身免疫病的新策略。 研究內(nèi)容： 在 RA的自身免疫應(yīng)答機制中，抗原特異性 T細(xì)胞 活化居于中心環(huán)節(jié)，本課題將從 RA患者抗原特異性 T細(xì)胞特性 、 抗原表位誘導(dǎo)的 T細(xì)胞活化 、 新發(fā)現(xiàn)的 T細(xì)胞表面分子免疫應(yīng)答調(diào)控機制 以及 T細(xì)胞參與的調(diào)控機制 4個方面對 RA自身免疫應(yīng)答機制進行系統(tǒng)闡述。 本課題的主要研究內(nèi)容如下： 15 1. 特異性自身反應(yīng)性 T細(xì)胞免疫應(yīng)答的分子機制研究 1） RA自身反應(yīng)性 T細(xì)胞 免疫生物學(xué)特性 分析。 2）抗原 T表位誘導(dǎo)特異性應(yīng)答的功能研究。 3） T細(xì)胞表面糖表位譜系對免疫應(yīng)答功能的影響。 4）利用抗 T細(xì)胞抗體分析活化態(tài) T細(xì)胞表面參與免疫應(yīng)答調(diào)控的重要分子。 2. 固有免疫相關(guān) T 細(xì)胞亞群參與 RA 發(fā)病的分子機制研究 1) γδT 細(xì)胞二個主要亞群（ Vγ1/Vγ4）產(chǎn)生 IFNγ 和 IL4 的分子機制研究。 2) γδT 細(xì)胞二個主要亞群在 CIA 的作用：應(yīng)用抗 Vγ1 或 Vγ4 特異性抗體對相應(yīng)的 Vγ1 和 Vγ4 T 細(xì)胞進行體內(nèi)清除，觀察 Vγ1 或 Vγ4 γδT 細(xì)胞對關(guān)節(jié)炎的影響。 3) 分離純 化 Vγ1 和 Vγ4 γδ T 細(xì)胞，在體外擴增培養(yǎng)，轉(zhuǎn)移至關(guān)節(jié)炎小鼠，觀察不同亞群 γδ T 細(xì)胞對關(guān)節(jié)炎的調(diào)節(jié)作用。 4) T 細(xì)胞二個主要亞群在 RA 的作用：流式細(xì)胞術(shù)檢測 RA 患者外周血單個核細(xì)胞中 Vγ1 和 Vγ4 的數(shù)量和功能。 經(jīng)費比例： 15% 承擔(dān)單位： 北京大學(xué)、中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 高曉明 學(xué)術(shù)骨干： 吳玉章、徐曉軍、牟芝蓉、呂平、孫曉麟、劉霞 課題 RA 相關(guān)炎癥及免疫損傷機制 預(yù)期目標(biāo)： 系統(tǒng)闡明 RA 滑膜炎癥和骨破壞的發(fā)生機制和調(diào)控通路，為進一步發(fā)展臨床早期防治 RA 骨質(zhì)疏松和骨破壞的臨床新策略 提供理論與實驗依據(jù)。 研究內(nèi)容： 在 RA 的炎癥啟動、進展及骨破壞過程中， Th17 等免疫細(xì)胞與滑膜細(xì)胞間的相互作用及分子調(diào)控機制是目前研究的熱點。本課題將從分子、細(xì)胞及一系列基因敲除動物模型水平，利用抗體阻斷、 RNA 干擾和基因轉(zhuǎn)染等不同方法，系統(tǒng)闡述 Th17 等免疫細(xì)胞調(diào)控滑膜炎癥和骨破壞的分子通路。這些原創(chuàng)性研究必將使 RA 免疫調(diào)控的新分子機制得到認(rèn)識，為進一步的免疫干預(yù)提供新型介入靶點。 16 本課題的主要研究內(nèi)容如下 1. RA 關(guān)節(jié)滑液中炎癥細(xì)胞亞群及其炎癥因子在 RA 滑膜炎癥啟動時相的作用與調(diào)控機制。 2. RA 滑膜細(xì)胞活化的新的分子調(diào)控機制研究 1） Cyr61 在 RA 滑膜細(xì)胞活化中的作用研究。 2） Wnt/DKK1 通路在 RA 滑膜細(xì)胞活化中的作用研究。 3. RA 滑膜炎癥介導(dǎo)骨破壞的新機制 經(jīng)費比例： 15% 承擔(dān)單位： 北京大學(xué)、上海交通大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 張卓莉 學(xué)術(shù)骨干： 李寧麗、張學(xué)武、陳適、周煒、王世瑤、王利、 沈佰華、賈園、任立敏 課題 RA 細(xì)胞免疫負(fù)調(diào)控機理研究 預(yù)期目標(biāo)： 探討 Treg、間充質(zhì)干細(xì)胞和小分子參與 RA 免疫負(fù)調(diào)控的機制，為 RA 患者免疫干預(yù)治療提供新的靶向。 研究內(nèi)容： RA 自身免疫應(yīng)答過程除 了 MHC肽 TCR 誘導(dǎo)的 T 細(xì)胞活化反應(yīng)外，還受細(xì)胞因子、小分子及調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞等因素的負(fù)調(diào)控影響，本項目通過對調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞及小分子的免疫調(diào)控機制進行系統(tǒng)深入的研究，為 RA 免疫干預(yù)策略提供新的靶向。 本課題的主要研究內(nèi)容如下： 1. 調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞在 RA 免疫致病機制中的作用研究 1）不同 Treg 亞群對 CIA 自身免疫應(yīng)答的調(diào)控作用及其治療效應(yīng)。 2） RA 患者外周血 Treg 細(xì)胞的分布及致病作用研究。 2. 間充質(zhì)干細(xì)胞對 RA 自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞的調(diào)控機制研究 1） MSCs 對 RA 患者 T 細(xì)胞功能的影響。 2） MSCs 對 CIA 小鼠的抑制作用研究。 RA 免疫調(diào)控機制中的作用研究 17 1） RA 相關(guān)小分子在 RA 患者外周血各免疫細(xì)胞亞群中的表達(dá)及功能研究。 2）上述 RA 相關(guān)小分子調(diào)控免疫功能的機制研究。 3） RA 相關(guān)小分子對膠原性關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展的負(fù)調(diào)控作用研究。 經(jīng)費比例： 20% 承擔(dān)單位： 北京大學(xué)、南開大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 栗占國 學(xué)術(shù)骨干： 尹芝南、穆榮、洪章勇、何菁、葉華 課題 RA 易感基因及早期診斷靶標(biāo)研究 預(yù)期目標(biāo)： 鑒定 RA 新的易感基因、 miRNA 表達(dá)譜及新的血清蛋白標(biāo)志分子，尋找 RA新的生物靶標(biāo)用于臨 床早期診斷。 研究內(nèi)容： 遺傳是 RA 發(fā)病的重要因素之一，本團隊已經(jīng)建立了先進的 RA 遺傳易感性研究平臺，對 RA 免疫遺傳學(xué)機制的深入研究是發(fā)現(xiàn)新的基因靶標(biāo)用于臨床診斷和治療的重要途徑。除了易感基因可做為診斷靶標(biāo)外，本研究團隊前期工作發(fā)現(xiàn)的一系列血清蛋白或抗原，甚至 miRNA 等均可做為新型診斷靶標(biāo)用于 RA 臨床。本課題是在這一主旨上進行的臨床轉(zhuǎn)化研究。一方面進一步對已發(fā)現(xiàn)的新遺傳易感基因及其致病作用進行系統(tǒng)研究，另一方面為臨床早期診斷尋找新的特異性靶標(biāo)，既有理論意義，又有重要的臨床應(yīng)用價值。 本課題的主要研究內(nèi)容如 下： 1． RA 易感 SNP 的篩選和鑒定 1）在前期工作基礎(chǔ)之上，研究相關(guān) SNP 位點在 RA