【正文】 ；或近期內(nèi)本地區(qū)或鄰近地區(qū)上呼吸道感染病人明顯增多；或醫(yī)院門診呼吸道感染病人明顯增多；或挨家挨戶上呼吸道感染患者明顯增多。 3． 2 臨床癥狀 3． 2． 1 出現(xiàn)急起畏寒、高熱、頭痛、頭暈、渾身酸痛、乏力等中毒癥狀。 3． 2． 2 可伴有咽痛、干咳、流鼻涕等癥狀。 3． 2． 3 少數(shù)病例有食欲減退、伴有腹痛，腹脹、嘔吐和腹瀉等消化道癥狀。 3． 3 實驗室診斷 3． 3． 1 從病人鼻咽分泌物中可分離到流感病毒（見附錄 A）。 3． 3． 2 患者恢復(fù)期血清中抗流感病毒抗體滴度比急性期高 4 倍或以上（見附錄B）。 3． 3． 3 在患者呼吸道上皮細胞查到流感病毒顆粒特異的蛋白成份或特異的核酸（見附錄 F）。 3． 3． 4 采集標本經(jīng)敏感細胞將病毒增殖一代后，查到流感病毒粒特異的蛋白或 中國最大的管理資源中心 11 特異的核酸（見附錄 F）。 3． 4 病例分類 3． 4． 1 疑似病例（流感樣病例） 具備腋下體溫 ≥ 38℃，加上其他臨床癥狀兩項或以上，或加 1 及胃腸道癥狀兩項或以上。 3． 4． 2 確診病例 疑似病例加 或 或 或 。 4. 處理原則 早期隔離病人 ,服抗流感病毒藥物 ,對癥治療和防并發(fā)癥 . 早期發(fā)現(xiàn)病人 ,早期隔離 (因地制宜 ,就地適當(dāng)隔離 )病人是重要的措施 .對病人治療一般采用對癥療法 ,發(fā)病早期 (48 小時內(nèi) )可服用抗流感病毒藥物 ,嚴重患者如嚴重肺炎 ,呼吸極度困難 ,高熱不退等需住院治療 .防治并發(fā)癥主要應(yīng)防止流感病毒性肺炎和細菌性肺炎 ,尤其對年邁體衰者或伴有心血管 ,糖尿病 ,慢性呼吸道疾病者或嬰幼兒等流感高危人群因他們由于流感本身或其它合并癥可造成死亡 ,故應(yīng)特別注意加強治療護理 . 4． 2 預(yù)防措施 一般采用綜合性措施，講究衛(wèi)生，注意體格鍛煉和營養(yǎng)，保持室內(nèi)空氣流通；對易感人群應(yīng)采取相對隔離措施，如避免接觸病人，不去公共場所等；對年邁和健康狀態(tài)差，尤其帶有慢性病的人必要時可采用滅活疫苗接種，對疫苗過敏者或可能已被感染（如密切接觸病人）者應(yīng)及時服用抗流感病毒藥物。 附錄 A （規(guī)范附錄） 病原學(xué)診斷方法 A1 病毒分離 從疑似流感病人呼吸道采集標本分離病原體． A2 標本的采集 病毒分離成功與否很大程度上取決于采集標 本的質(zhì)量，時間（應(yīng)于發(fā)病的頭3 天，越早越好），及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)。 標本主要取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物，有時也采用肺活檢材料等。 常用的采樣液為：普通肉湯， pH 的 Hanks 氏液或 Eagle 氏液或水解乳蛋白液。在采樣液中需加入抗菌素，以往多用青、鏈霉素，近來發(fā)現(xiàn)不少種類 中國最大的管理資源中心 12 細菌對它們具有耐藥性，故近來多用慶大霉素（其終濃度為每 ml 采樣液中加入 ml 的 10mg/ ml）和抗真菌素（終濃度為每 ml 采樣液中加入 ml 的 250ug/ ml）。 A2． 1 標本采集方法 A 2． 2． 1 鼻拭子 將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入 45 ml 采樣液的管中，尾部棄去。然后，塞緊或蓋好管蓋。 A2． 2． 2 咽拭子 用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，同樣將棉簽頭浸入 45 ml 采樣液的管中，尾部棄去，塞緊或蓋好管蓋。 注： 亦可將鼻、咽拭子收集于同一采樣管中，以便提高分離率，減少工作 量。 A2． 2． 3 鼻咽抽取物或抽取氣管和支氣管分泌物 用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從 氣管抽取氣管和支氣管分泌物。 先將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。 收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器 3 次。近來國內(nèi)有用小孩導(dǎo)尿管接在50 ml 注射器上來替代收集器。 A2． 2． 4 漱口液 用 10 ml 采樣液漱口。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)噢聲，讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動。然后，用平皿或燒杯收集漱液。 注： 取漱口液時，需預(yù)先了解患者是否對抗菌素有過敏史，如有，含漱液中不應(yīng)含抗菌素。 A2． 2． 5 肺活檢材料 肺活檢組織在無菌條件下，用滅菌過的乳缽磨碎，用生理鹽水配成 20%懸液，2020rpm離心 10min，取上清加入上述提到的抗菌素。 A3 標本運送 標本應(yīng) 在≤ 4℃條件下，盡快送至實驗室。標本至實驗室后，病毒分離標本應(yīng)盡快進行接種分離， 48h 內(nèi)能進行接種可置 4℃保存，如未能接種應(yīng)置≤ 70℃下保存。 A4 標本處理 標本至實驗室后，含棉拭子的標本，先將棉拭子在管壁反復(fù)擠壓后取出。然后用干凈滅過菌的毛細吸管反復(fù)吹打收集的溶液，以便打碎粘液。置 4℃待其自然沉淀 510min。 注： 如采樣液中尚未加抗菌素應(yīng)補加之，所加的量同前，加完并混勻，置 4℃ 12h 后方可用于接種。 A5 接種與 培養(yǎng) 最常用的為細胞接種和雞胚接種法，有條件的應(yīng)兩法并用。近來由于“ O”相毒株的出現(xiàn)， MDCK（ Madin Dardy Canine Kidney）等一些細胞對“ O”相毒株 中國最大的管理資源中心 13 的敏感性大大超出雞胚的敏感性。同時“ O”相毒株幾乎不凝集雞紅細胞，故近來在紅細胞凝集和凝集抑制試驗中常用豚鼠或人的“ O”型紅細胞，而不用雞的紅細胞。 A5． 1 MDCK 細胞接種和收獲 成片的 MDCK 細胞棄生長液，用 Hanks 氏液 洗兩遍，將殘余的牛血清洗凈，每瓶加入接種標本 ml，（接種量要根據(jù)瓶的大?。?，一般 2 瓶 /標本，輕晃細胞瓶，使標本完全覆蓋細胞，置 35℃吸附 12h；倒掉感染液，再用 Hanks氏 液洗 12遍，每瓶加入 3 ml（隨瓶的大小而異）維持液（不含小牛血清，而含終濃度為 2ug/ml 胰酶的 Eagle 氏溶液），置 35℃培養(yǎng)；次日起每天觀察有無細胞病理變化（ CPE）；當(dāng) CPE 出現(xiàn) +++ ～ ++++號時，即 75%100%細胞出現(xiàn)病變時進行收獲，收獲之前可將細胞凍融 12 次以提高收獲標本的病毒滴度。由于 CPE不能證實就是流感病毒所造成。最后還需檢查維持液中是否有紅細胞凝集活性（ HA），用毛細吸管取細胞維持液 34 滴，放入血凝板孔中，而后加入等容量的1%豚鼠或人紅細胞，輕搖混勻，置室溫或 4℃， 1h后觀察結(jié)果。出現(xiàn)紅細胞凝集的為陽性標本，收獲所有的維持液進行病毒鑒定。 如收獲的維持液 HA 滴度不高或量不夠用于鑒定，需在 MDCK 細胞中傳代，把HA滴度提高或量增加后，方可進行病毒鑒定。 如 HA 陰性，應(yīng)在 MDCK 細胞上盲傳一代，如 HA 仍陰性，可認為是陰性標本，棄之。 注： CPE 出現(xiàn)時間隨感染病毒的型別，甚至毒株的差異以及感染量的大小而異。一般標本接種后 710 天還不出 CPE，維持液中又查不出 HA 活性，基本上可認為陰性標本，棄之。同時要注意 MDCK 細胞的代數(shù)，因隨 MDCK 細胞代數(shù)增加，其對流感病毒的敏感性下降。 A5． 2雞胚接種和收獲 取 911日胚齡雞胚，經(jīng)羊膜腔和尿囊腔接種標本 ml， 每份標本接種 34只胚， 置 3335℃培養(yǎng) 72h。然后將雞胚置 4℃過夜（或置 20℃冰箱 1h 再置 4℃數(shù)小時），分別收獲尿囊液和羊水并檢查 HA 活性（ 用毛細吸管分別取 34 滴尿囊液和羊水，分別 置大孔塑料板不同孔內(nèi)，再加入 34 滴 1 %豚鼠或人紅細胞，搖勻后置室溫或 4℃ 1h 后觀察結(jié)果。如 HA 為 +++ ～ ++++時，再按系列 倍比稀釋測定 HA 滴度，如具有一定的 HA 滴度即可進行病毒鑒定。如 HA 陰性，可盲傳一代，如 HA仍為陰性則棄之。 A6病毒鑒定 至今對流感病毒鑒定最常用的方法為紅細胞凝集抑制（ HI）測定，因該法簡便易行，結(jié)果可信（具體方法見附錄 C）。其次為神經(jīng)氨酸酶活性抑制（ NI）測定（具體方法見附錄 D）。進行型鑒定時常用對流免疫電泳（具體方法見附錄 E）。 附錄 B （規(guī)范附錄） 血清學(xué)診斷方法 中國最大的管理資源中心 14 B1 血清標本采集 血清標本應(yīng)包括急性期和恢復(fù)期雙份血清。急性期血樣應(yīng)盡早采集，一般不晚于發(fā)病后 7 天。恢復(fù)期血樣則在 發(fā)病后 24 周采集。單份血清一般不能用作診斷。血液標本 20202500rpm離心 15min。收集血清，棄血凝塊。 B2 血清 標本運送和保存 血清標本在 4℃下運送，置≤ 20℃下長期保存。 B3 抗體測定 測定用抗原一般為當(dāng)前人群中流行的 H3N2 和 H1N1 亞型及乙型流感病毒。測定方法為 HI 法（見附錄 C）。 B4 結(jié)果判斷 凡恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期增高≥ 4倍為陽性結(jié)果，其余的均為陰性結(jié)果。 附錄 C （資料附錄） 紅細胞凝集抑制試驗 C1 原理 流感病毒粒表面的血凝素（ HA）蛋白，含有識別和結(jié)合宿主細胞表面受體的結(jié)構(gòu)，能夠與一些哺乳類動物和禽的紅細胞發(fā)生凝集，這就是紅細胞凝集現(xiàn)象。 雖然多種哺乳動物和禽類的紅細胞均能被流感病毒凝集，但目前應(yīng)用最廣的是豚鼠、雞和人“ O”型的紅細胞。 “ O”相毒株是指只能在雞胚羊膜腔或敏感細胞中生長，感染的羊水或細胞維持液只凝集人或豚鼠的紅細胞，而幾乎不凝集雞的紅細胞的流感毒株。這種毒株在雞胚尿囊腔適應(yīng)傳代后，獲得了在雞胚尿囊腔復(fù)制的能力，同時還獲得了對雞紅細胞凝集能力與人及豚鼠的一樣好，這種生物學(xué)特性發(fā)生改變的病毒為“ D”相毒株。 流感病毒能 從凝集的紅細胞表面釋放下來，釋放下來的病毒還能凝集新的紅細胞，而被凝集和釋放后的紅細胞不能再被相同的病毒顆粒所凝集。 于病毒懸液中加入特異性的抗流感病毒 HA 蛋白的抗血清，能抑制紅細胞凝集現(xiàn)象出現(xiàn)，即為紅細胞凝集抑制實驗。 目前，紅細胞凝集和凝集抑制實驗為流感各方面工作中應(yīng)用最廣泛的一種 中國最大的管理資源中心 15 技術(shù)。 C2 實驗器材 C2． 1 大孔或小孔塑料板 C2． 2 10ml 或 1ml 或 1000ul 和 200ul 或多排吸管 C2． 3 200ul 和 1000ul 吸頭 C3 試劑 C3． 1 % 無菌生理鹽水 C3． 2 Alsever 氏液 葡萄糖 檸檬酸鈉 g 檸檬酸 g NaCl 0 .42g 加蒸餾水至 100ml 8 磅 20 分鐘高壓滅菌，置 4℃ 備用。 C3． 3 1% 紅細胞懸液 以雞紅細胞為例：于 10 或 20ml 注射器中先吸入約 3 ml 阿氏液（ Alsever39。s Solution） ，然后從雞翅靜脈或心臟采集，用生理鹽水洗滌 3 次，前 2 次 1500r/ min離心 5min，最后 1 次同速度離心 10min， 棄上清，用無菌生理鹽水配成 1%懸液，置 4℃ 待用。一般置 4℃能保存 7 天左右，一旦發(fā)生溶血應(yīng)棄掉。 C3． 4受體破壞酶（ RDE） C3． 5 免疫血清或測定血清 C4紅細胞凝集實驗 C4． 1 操作步驟 C4． 1． 1 取一干凈的大孔塑料板，標記所要測定的標本名稱 C4． 1． 2 于第一孔加入 （ 1： 2 開始稀釋）或 （ 1： 5 開始稀釋），從第二孔開始一律各加 %生理鹽水。 C4． 1． 3 如 1： 2開始稀釋，于第一孔中加入 病毒懸液；如 1： 5開始稀釋，于第一孔中加入 病毒懸液。用吸管吹打，使充分混勻，吸出 至第二孔，依次類推作倍比稀釋，直至最后一孔，吹打后吸出 棄掉。 C4． 1． 4 于每孔中加入 生理鹽水，然后再加入 1% 紅細胞懸液。相混后置室溫或 4℃ 3060min，而后觀察結(jié)果。 注 ：如采用微量法，應(yīng)用小孔塑料板和稀釋槍，總量為 75ul（病毒 25ul，25ul 生理鹽水和紅細胞懸液 25ul） ，其余同常量法。 C4． 2 觀察結(jié)果 結(jié)果以 ++++、 +++、 ++、 +、177。和 — 表示之。 一層紅細胞均勻地鋪于孔上者為 ++++。 基本同上，但邊緣不整齊，鋪的面積稍小些者為 +++。 中國最大的管理資源中心 16 紅細胞形成一個環(huán)狀，四周有小凝集塊者為 ++。 紅細