基因工程藥物之干擾素的制備流程課件(已改無錯(cuò)字)
2023-01-21 20:30:58 本頁面
【正文】 10 ku超濾系統(tǒng)，百級層流下收集。冷卻至 2℃ ～ 10℃ 。 ? 檢查 : 緩沖液的 pH值和電導(dǎo)值。 ? 溶解： 2℃ ～ 10℃ ，勻漿，完全溶解。 (2) 沉淀與疏水層析 ? 等電點(diǎn)沉淀（ 1）：磷酸調(diào)節(jié)至 ，沉淀雜蛋白，離心收集上清液。 ? 疏水層析：干擾素吸附在疏水層析柱中 除非疏水性蛋白 洗脫與收集： （ ） ? 等電點(diǎn)沉淀（ 2）：磷酸調(diào)節(jié) ，調(diào)節(jié)電導(dǎo)值 40 ms/cm， 2℃ ～ 10℃ ，靜置過夜 ? 超濾： 1000 ku超濾膜過濾，除去大蛋白。 ? 透析除鹽：調(diào)整溶液 pH ，電導(dǎo)值， 10 ku超濾膜， M緩沖液。 (3)無菌過濾分裝 μm濾膜過濾干擾素溶液 ? 分裝 ? － 20℃ 以下的冰箱中保存。 (4)檢測項(xiàng)目 ? 干擾素鑒別試驗(yàn) ? 干擾素效價(jià)測定 ? 蛋白質(zhì)含量，純度測定，分子量 ? 宿主殘余蛋白、殘余 DNA ? 干擾素結(jié)構(gòu)鑒定：紫外光譜，肽譜， N端序列 ? 其他：熱原，內(nèi)毒素，殘留抗生素 半成品檢定 ? （ 1） 效價(jià)測定 用細(xì)胞病變抑制法，以 Wish細(xì)胞、 VSV病毒為基本檢測系統(tǒng)，測定中必須用國家或國際參考品校準(zhǔn)為國際單位。 ? （ 2） 蛋白質(zhì)含量測定 ? 福林 酚法，以中國藥品生物制品檢定所提供的標(biāo)準(zhǔn)蛋白為標(biāo)準(zhǔn)。 ? （ 3） 比活性 ? 效價(jià)的國際單位與蛋白質(zhì)含量的毫克數(shù)之比。 ? （ 4） 純度 ? 電泳純度用非還原型 SDSPAGE法，銀染顯色應(yīng)為單一區(qū)帶，經(jīng)掃描儀測定純度應(yīng)在 95%以上。 ? （ 5）相對分子量測定 ? 還原型 SDSPAGE，加樣量不地域微克，同時(shí)用已知相對分子量的蛋白標(biāo)準(zhǔn)系列做對照，以遷移率為橫坐標(biāo)，相對分子量的對數(shù)為縱坐標(biāo)作圖，計(jì)算相對分子量。與理論值比較，誤差不得高于 10%。 ? （ 6）殘余外源性 DNA含量測定 ? 用放射性核素或生物素探針法測定，每劑量中殘余外源性 DNA應(yīng)低于 100pg。 ? （ 7）殘余血清 IgG含量測定 ? 在應(yīng)用抗體親和層析法作為純化方法時(shí)必須進(jìn)行此項(xiàng)檢定。 ? （ 8）殘余抗生素活性測定 ? 半成品中不應(yīng)有抗
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