藥物分析課件第十三章a生化藥物和基因工程藥物分析(已改無錯(cuò)字)
2022-11-18 19:52:43 本頁面
【正文】 電化學(xué)分析法 藥物膜電極 生物組織膜電極 藥物電極 微生物電極 離子選擇性電極法 免疫電極 免疫場(chǎng)效應(yīng)管 酶電極 第三節(jié) 常用定量分析方法及其應(yīng)用 2. HPLC法 1） RPHPLC：柱前衍生化自動(dòng)測(cè)定氨基酸 柱： RP— 18， 柱溫： 48℃ 流動(dòng)相： % TFA； B乙腈 異丙醇（ 4： 1） 梯度洗脫 熒光檢測(cè)器： ?ex=280nm～ 340nm,?em=430nm 測(cè)定 ： 樣品 肽 樣品水解： ， %苯酚、通 N2， 110℃ ， 20h ～ 24h。 樣品干燥：真空 樣品的衍生化：丹酰氯 水解剩余的衍生化試劑： 進(jìn)樣測(cè)定 N ( C H 3 ) 2S O 2 C lR N H 2S O 2 N H RN ( C H 3 ) 2+ 2） HPIEC 測(cè)定對(duì)象：蛋白質(zhì)，多肽 柱：離子交換鍵合相 流動(dòng)相： ～ 。 梯度洗脫：鹽的濃度增大。盡量避免使用鹵 素類鹽 特點(diǎn)： 可回收活性蛋白 。 3） HPGFC 應(yīng)用：蛋白質(zhì)、多肽的分離及分子量測(cè)定。 示例：重組人腫瘤壞死因子衍生物的分子量 的測(cè)定 柱： Beckman Ultraspherogel SEC 3000 流動(dòng)相： : （ 1:1） %疊氮化鈉 標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量曲線的制備 ： 醛縮酶 血清白蛋白 右旋糖苷藍(lán) 碳酸酐酶 抑蛋白酶肽 酪氨酸 T0 完全排阻 完全進(jìn)入填料空隙 Tt 標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量曲線： Kd lg . 樣品測(cè)定： K d =T T 0T t T 0測(cè) 定 樣 品 的 T查 出K d計(jì) 算l g M . W . 計(jì) 算 M . W .應(yīng)用示例 ： ChP（ 2021）重組人胰島素的質(zhì)量控制 1）鑒別： 法 1：在效價(jià)測(cè)定項(xiàng)下，供試品主峰的保留時(shí)間 應(yīng)與對(duì)照品的一致。
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