基因工程藥物之干擾素的制備流程課件(存儲版)
【正文】 到含有四環(huán)素、氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒中，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，重組的載體 DNA 分子在一定條件下轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，形成攜帶質(zhì)粒的菌株。同時進(jìn)行發(fā)酵液雜菌檢查，當(dāng) OD值達(dá) 177。 ? 破碎菌體： 2厘米以下的碎塊 ? 攪拌：加裂解緩沖液， 2℃ ～ 10℃ ， 2hr ? 凍融 : 細(xì)胞完全破裂，釋放干擾素。 ? 檢查 : 緩沖液的 pH值和電導(dǎo)值。 ? （ 3） 比活性 ? 效價的國際單位與蛋白質(zhì)含量的毫克數(shù)之比。 2納米。 ? （ 5） 熱原質(zhì)試驗 ? 同半成品檢定。 （ 3）醫(yī)藥市場競爭無序，行業(yè)不正之風(fēng)嚴(yán)重。 存在的問題： （ 1）同種產(chǎn)品生產(chǎn)廠家過多，造成市場惡性競爭， 嚴(yán)重影響產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。 ? （ 3） 水分測定 ? 用卡氏法，應(yīng)低于 3%。 ? （ 8）殘余抗生素活性測定 ? 半成品中不應(yīng)有抗生素活性存在。 (4)檢測項目 ? 干擾素鑒別試驗 ? 干擾素效價測定 ? 蛋白質(zhì)含量，純度測定，分子量 ? 宿主殘余蛋白、殘余 DNA ? 干擾素結(jié)構(gòu)鑒定：紫外光譜，肽譜， N端序列 ? 其他：熱原，內(nèi)毒素，殘留抗生素 半成品檢定 ? （ 1） 效價測定 用細(xì)胞病變抑制法，以 Wish細(xì)胞、 VSV病毒為基本檢測系統(tǒng)，測定中必須用國家或國際參考品校準(zhǔn)為國際單位。 3. 干擾素純化工藝過程 ? 溶解粗干擾素 ? 沉淀與疏水層析 陰離子交換層析與濃縮 陽離子交換層析與濃縮 凝膠過濾層析 ? 無菌過濾分裝 (1) 溶解粗干擾素 ? 配制純化緩沖液： 超純水， ， μm濾器和 10 ku超濾系統(tǒng)，百級層流下收集。每保存 3個月，檢查一次活性。級聯(lián)調(diào)節(jié)通氣量和攪拌轉(zhuǎn)速，控制溶解氧 30%，培養(yǎng) 4小時。 ? 免疫調(diào)節(jié)活性 —— 治療慢性肉芽腫瘤（ rhuIFNγ） ? 多發(fā)性硬化癥 rhuIFNβ 2 基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝 干擾素生產(chǎn)工藝路線 上市產(chǎn)品：重組人干擾素 rhuIFN 1986， rhuIFNα2a， rhuIFNα2b； 1990， rhuIFNγ1b； 1993， rhuIFNβ1b； 2023－ 2023： PEG化 IFN， PEGIntron, Pegasys 表達(dá)產(chǎn)物：無糖基化，
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