熒光顯微鏡及激光掃描共聚焦顯微鏡使用(已改無(wú)錯(cuò)字)
2023-05-31 20:46:15 本頁(yè)面
【正文】 點(diǎn)光源照射標(biāo)本，在焦平面上形成一個(gè)輪廓分明的小的光點(diǎn)，該點(diǎn)被照射后發(fā)出的熒光被物鏡收集，并沿原照射光路回送到由雙向色鏡構(gòu)成的分光器。分光器將熒光直接送到探測(cè)器。光源和探測(cè)器前方都各有一個(gè)針孔，分別稱為照明針孔和探測(cè)針孔。兩者的幾何尺寸一致，約 100200nm； 相對(duì)于焦平面上的光點(diǎn)，兩者是共軛的，即光點(diǎn)通過(guò)一系列的透鏡，最終可同時(shí)聚焦于照明針孔和探測(cè)針孔。 這樣，來(lái)自焦平面的光，可以會(huì)聚在探測(cè)孔范圍之內(nèi)，而來(lái)自焦平面上方或下方的散射光都被擋在探測(cè)孔之外而不能成像。以激光逐點(diǎn)掃描樣品，探測(cè)針孔后的光電倍增管也逐點(diǎn)獲得對(duì)應(yīng)光點(diǎn)的共聚焦圖像，轉(zhuǎn)為數(shù)字信號(hào)傳輸至計(jì)算機(jī)，最終在屏幕上聚合成清晰的整個(gè)焦平面的共聚焦圖像。 Confocal Principle 每一幅焦平面圖像實(shí)際上是標(biāo)本的光學(xué)橫切面，這個(gè)光學(xué)橫短面總是有一定厚度的，又稱為光學(xué)薄片。由于焦點(diǎn)處的光強(qiáng)遠(yuǎn)大于非焦點(diǎn)處的光強(qiáng)，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統(tǒng)的景深近似為零，沿 Z軸方向的掃描可以實(shí)現(xiàn)光學(xué)斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學(xué)切片。把 XY平面（焦平面）掃描與 Z軸（光軸）掃描相結(jié)合，通過(guò)累加連續(xù)層次的二維圖像，經(jīng)過(guò)專門的計(jì)算機(jī)軟件處理，可以獲得樣品的三維圖像。 ?觀察方式：以熒光為主 ?光源：激光（紫外、可見(jiàn)光、近紅外） ?照明方式：點(diǎn)照明、逐點(diǎn)掃描 ?成像
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