熒光顯微鏡及激光掃描共聚焦顯微鏡使用-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 描共聚焦顯微鏡觀察。 2. PBS漂洗 2次，每次 3 min。光源和探測(cè)器前方都各有一個(gè)針孔，分別稱為照明針孔和探測(cè)針孔。 3. 暗視野顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。 熒光顯微鏡是一種較為常用的的光學(xué)顯微鏡，其基本原理是利用一定波長(zhǎng)的激發(fā)光對(duì)樣品進(jìn)行激發(fā)，使之產(chǎn)生一定波長(zhǎng)的熒光，從而用于對(duì)樣品結(jié)構(gòu)或其組分進(jìn)行定性、定位、定量觀察檢測(cè)。 熒光顯微鏡技術(shù)在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用 二、暗視野顯微鏡的成像原理 通過(guò)特殊的暗視野聚光器，使照明光線改變途徑，不直接進(jìn)入物鏡，而是傾斜地照射到樣品上，由樣品表面的繞射光線入射到物鏡內(nèi)，產(chǎn)生樣品的衍射圖象。但當(dāng)所觀察的熒光標(biāo)本稍厚時(shí)，普通熒光顯微鏡不僅接收焦平面上的光量，而且來(lái)自焦平面上方或下方的散射熒光也被物鏡接收，這些來(lái)自焦平面以外的熒光使觀察到的圖像反差和分辨率大大降低（即焦平面以外的熒光結(jié)構(gòu)模糊、發(fā)虛，原因是大多數(shù)生物學(xué)標(biāo)本是層次區(qū)別的重疊結(jié)構(gòu)）。由于焦點(diǎn)處的光強(qiáng)遠(yuǎn)大于非焦點(diǎn)處的光強(qiáng)，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統(tǒng)的景深近似為零，沿 Z軸方向的掃描可以實(shí)現(xiàn)光學(xué)斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學(xué)切片。 五、注意事項(xiàng) 注意染色時(shí)間 注意避光 六、作業(yè)與思考題： 試述激光掃描共聚焦顯微鏡成像基本原理，并描述實(shí)驗(yàn)中所觀察的現(xiàn)象 思考題：
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