【正文】 ，其在免疫調(diào)節(jié)、抗炎、祛痰、保肝、降血脂等方面的藥理正在引起國(guó)內(nèi)外研究學(xué)者的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)利用桔梗生理活性以及藥用價(jià)值開發(fā)人群日常消費(fèi)的飲料產(chǎn)品，具有營(yíng)養(yǎng)、保健、天然的特點(diǎn)。新的開發(fā)方向打開了桔梗的新利用形式。同時(shí)也為桔梗新產(chǎn)品的開發(fā)提供了有力的理論依據(jù)。 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 8 第二章 材料與方法 實(shí)驗(yàn)材料及器材 實(shí)驗(yàn)材料 桔梗 由遼寧省寬甸滿族自治縣光大藥材有限公司提供 試劑 95%乙醇 分析純 大連市華中試劑廠 無水乙醇 分析純 北京化工廠 丙酮 分析純 沈陽市試劑一廠 苯酚 分析純 遵義市第二化工廠 濃硫酸 分析純 公主嶺市化學(xué)試劑廠 葡萄糖 分析純 東北制藥總廠一分廠 氫氧化鈉 分析純 北京五洲世紀(jì)紅星化工有限責(zé)任公司 硝酸鋁 分析純 天津是大茂化學(xué)試劑廠 亞硝酸鈉 分析純 大連遼南化學(xué)品廠 檸檬酸 白砂糖 硅藻土 分析純 天津天辰化學(xué)試劑廠 實(shí)驗(yàn)器材 DGG9070A 型 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 DKS26 電熱恒溫水浴鍋 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司 HWS26 電熱恒溫水浴鍋 上海恒一科技有限公司 AL104 電子天平 梅特勒 托利多儀器（上海）有限公司 GB303 電子天平 梅特勒 托利多儀器（上海）有限公司 NJL075 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 南京杰全微波設(shè)備有限公司 SC3610 低速離心機(jī) 科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 9 722 可見分光光度計(jì) 上海精密儀器有限公司 SHZD 循環(huán)水式真空泵 鞏義市英峪予華儀器廠 BG160 海爾電冰箱 青島海爾股份有限公司 實(shí)驗(yàn)方法 . 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 的繪制 濃硫酸：分析純， 95%～ 98% 6%苯酚溶液：準(zhǔn)確稱取 6g 苯酚，加少量水使之溶解后定容于 100ml 容量瓶，放于棕色瓶中于冰箱避光保存。 1g/L 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取干燥恒重的分析葡萄糖 1g,定容于 1L 容量瓶。 吸取 1g/L 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 10ml，定容于 100ml 容量瓶，搖勻。分別吸取溶液 ,,。各自補(bǔ)水至 2ml。每管加入 6％苯酚溶液1 ml，迅速滴加濃硫酸 5ml，立即搖勻，放置 20 min，以空白參照，于 490nm處測(cè)吸光度。以吸光度值 (y)對(duì)葡 萄糖質(zhì)量濃度 (x)作回歸處理，得回歸方程A=0． +， r=0． 。 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 60%乙醇溶液： 600ml 無水乙醇定容于 1000ml 容量瓶，搖勻，備用。 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 50mg，加少量 60%乙醇溶液使之溶解，后以 60%乙醇溶液定容于 100ml 容量瓶，搖勻，備用。 4%亞硝酸鈉： 4g 亞硝酸鈉定容于 100ml 容量瓶，搖勻，備用。 10%硝酸鋁： 10g 硝酸鋁定容于 100ml 容量瓶，搖勻，備用。 4%氫氧化鈉： 4g 氫氧化鈉容于 100ml 容量瓶，搖勻，備用。 取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液 2,4,6,8,10ml 于 25ml 具塞試管，依次加入 4%亞硝酸鈉 1ml，靜置 6min。 10%硝酸鋁 ，靜置 6min， 4%NaOH 溶液 4ml，用60%乙醇定容與 25ml，靜置 12min。以 0ml 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液為空白，于 510nm下測(cè)吸光度。 以吸光度 (y)對(duì)葡萄糖質(zhì)量濃度 (x)作回歸處理，得回歸方程大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 10 y=0． ， r=0． 。 水浸提桔梗汁 水 浸提單因素優(yōu)化 分別稱取 2g 桔梗粉 5 份，小心轉(zhuǎn)移至 250ml 燒杯中，分別以料液比 1:1: 1: 1: 1:50 進(jìn)行單因素優(yōu)化，于 80℃、水浴保溫 1h 進(jìn)行 浸提。4000 r/min 離心 10min 得到的桔梗汁 以確定的料液比， 分別在 50℃、 60℃ 、 70℃ 、 80℃ 、 90℃ 溫度下水浴保溫 60min 進(jìn)行 浸提，確定浸提最佳溫度。 依照之前優(yōu)化的料液比和溫度的單因素條件，于 30min， 60min， 90min，120min， 150min 浸提，確定浸提最佳時(shí)間。 多糖、黃酮含量測(cè)定 多糖的含量測(cè)定采用苯酚 硫酸法， 桔 梗汁 與 95%乙醇按 1:3 比例混合，醇沉過夜，過濾，用無水乙醇洗滌沉淀，每次 25ml,把沉淀轉(zhuǎn)移至干燥的蒸發(fā)皿中，放入 60℃的電熱鼓風(fēng)干燥箱中干燥，待充分干燥后，加水復(fù)溶，定容于 100ml 容量瓶 。取 1ml 樣液定容至 25ml 容量瓶，后吸取 補(bǔ)水至 2ml，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定。 黃酮含量測(cè)定采用硝酸鋁分光光度計(jì)法，分別取經(jīng) 4000 r/min 離心 10min得到的桔梗汁 5ml 于 25ml 具塞試管 ,依照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定。 正交試驗(yàn)分析 以單因素優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，作三因素水平。 超聲波輔助 水提 桔梗汁 超聲波輔助 水提 單因素優(yōu)化 分別稱取 桔梗粉 5 份，以料液比 1:40 加入去離子水， 分別 于超聲波發(fā)生器中分別以功率 100w,200w,300w,400w,500w 條件下超聲 20min， 4000 r/min 離心 10min 得到的桔梗汁。 以 上一實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的 功率 條件 ， 在料液比 1:40， 分別于 5min， 10min， 20min，30min， 40min 條件下，進(jìn)行時(shí)間條件優(yōu)化。 依照兩組優(yōu)化的條件，于料液比 1: 1: 1: 1: 1:50 進(jìn)行條件大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 11 優(yōu)化。 正交試驗(yàn)分析 以單因素優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，作三因素三因素水平。 飲料 配制 桔梗原料清洗 →烘干 →打粉 →浸 提 → 浸 出液 →過濾 →配料 →裝瓶 →殺菌→成品 一、 倍水的桔梗飲料 桔梗汁配比 倍白開水，配制過程同上 二、 1 倍水的桔梗飲料的配制結(jié)果 桔梗汁配比 1 倍白開水，配置過程同上 三、 倍水的桔梗飲料的配制結(jié)果 桔梗汁配比 倍白開水，配置過程同上 四、 2 倍水的桔梗飲料的配制結(jié)果 桔梗汁配比 2 倍白開水，配置過程同上 感官評(píng)定 及理化指標(biāo) 對(duì)配制的桔梗飲料 以 Q/DXL 001 S2020 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 為標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行感官評(píng)定。 表 1 感官要求 項(xiàng)目 要求 色澤 呈 本品應(yīng)有色澤 香氣與滋味 具有 果汁飲料應(yīng)有 香氣和滋味、甜 酸 適口、無異味 組織形態(tài) 液體狀， 允許有少許 果肉 沉淀 雜質(zhì) 無肉眼可見雜質(zhì) 理化指標(biāo)： 阿貝折光儀測(cè)定 可溶性固形物、 酸堿滴定法測(cè)定 酸度。 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 12 第 三 章 結(jié)果與討論 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 根據(jù)測(cè)得的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液中糖含量的測(cè)定， OD 值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下： 圖 31 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 由圖 31 可得回歸方程為 y=（ R2=）， X 為葡萄糖濃度， Y 為溶液吸光值。 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 根據(jù)測(cè)得的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液中糖含量的測(cè)定， OD 值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下 ： 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 13 圖 黃酮含量標(biāo)準(zhǔn)曲線 由圖 32 可得回歸方程為 y=（ R2=）， X 為葡萄糖濃度， Y 為溶液吸光值。 水 浸 提取 以多糖為指標(biāo)浸提條件優(yōu)化 浸提溫度 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 14 圖 33 提取溫度對(duì)多糖 含量 的影響 由圖 33 可以看出，在 70℃之前，隨著溫度的升高，多糖 含量 也增大；70℃時(shí)， 含量 達(dá)到峰值； 70℃之后，隨 著溫度的升高，多糖的 含量 開始降低。溫度升高，有利于多糖的浸出，當(dāng)溫度過高時(shí)，一部分多糖會(huì)發(fā)生降解，使得多糖的提取率降低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇 70℃作為桔梗多糖提取的條件。 浸提料液比 圖 34 料液比對(duì)多糖 含量 的影響 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 15 由圖可以看出 , 在 1:40 時(shí)，多糖的 含量 最高，隨著溶劑的增多，多糖的 含量 反而降低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇 1:40 作為多糖提取的條件。 浸提時(shí)間 圖 35浸提 時(shí)間對(duì)多糖 含量 的影響 由圖 35 可以看出，在 3 小時(shí)之前，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，多糖的 含量 不斷的增加， 3 小時(shí)達(dá)到最大值，但隨著時(shí)間的繼續(xù)延長(zhǎng)， 多糖 含量 未持續(xù)上升，幾乎不再變化?？紤]到桔梗 汁浸提 應(yīng)用到實(shí)踐生產(chǎn)上，時(shí)間過長(zhǎng)，效率過低。所以，本實(shí)驗(yàn)選擇 2 小時(shí)作為桔梗 汁浸提 的 時(shí)間 條件。 表 桔梗多糖正交實(shí)驗(yàn)因素水平表 序號(hào) 料液比 時(shí)間 溫度 1 1:35 90min 65℃ 2 1:40 120min 70℃ 3 1:45 150min 75℃ 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 16 表 以多糖為指標(biāo) 水提取 桔梗汁 正交實(shí)驗(yàn)表 因素 A 水提 溫度 B 料液比 C 水提時(shí)間 桔梗 浸提液 多糖 含量 1 1 1 1 2 1 2 2 3 1 3 3 4 2 1 3 5 2 2 1 6 2 3 2 7 3 1 2 8 3 2 3 9 3 3 1 k1 k2 k3 極差 主次順序 C A B 由 表 可見，水浸提法 浸 取 桔梗 汁 時(shí)，物料比、水提 時(shí)間對(duì) 桔梗多糖含量 的影響比較大，影響力相同，溫度次之 。 各因素的最佳組合為 A1B2C2，正交試驗(yàn)的最佳結(jié)果為 A1B2C3。為了進(jìn)一步確定最佳的因素組合，對(duì)最佳因素的組合 A1B2C2 進(jìn)行驗(yàn)證，并與正交試驗(yàn)中的最佳結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果見表 ： 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 17 表 多糖 驗(yàn)證試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)組 A 水提 溫度 B 料液比 C 浸提 時(shí)間 桔梗 浸提液 多糖 含量 % A1B2C2 65℃ 1:40 120min A1B2C3 65℃ 1:40 150min 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，所選的最優(yōu)組合是有效的。 結(jié)論： 以多糖為指標(biāo)水浸提 桔梗 汁 提取最佳條件為： 65℃， 2h， 1:40. 以 黃 酮 為指標(biāo) 水 浸提條件優(yōu)化 浸提溫度 圖 36浸提 溫度對(duì)黃酮 含量 的影響 由圖 26 可以看出，在 80℃之前，隨著溫度的升高，黃酮 含量 也增大， 80℃之后，隨著溫度的升高，黃酮的 含量 開始降低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇 80℃作為 以黃酮為指標(biāo)水浸提法的溫度 條件。 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 18 浸提時(shí)間 圖 37 浸提 時(shí)間對(duì)黃酮 含量 的影響 由圖 37 可以看出，在 1 小時(shí)之前，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，黃酮 含量 率不多的增加， 1 小時(shí)達(dá)到最大值，但隨著時(shí)間的繼續(xù)延長(zhǎng)，黃酮 含量 開始呈下降并穩(wěn)定持平。所以，本實(shí)驗(yàn)選擇 1 小時(shí)作為 以黃酮為指標(biāo)水浸提法的時(shí)間條件 。 浸提 料液比 圖 38 料液比對(duì)黃酮 含量 的影響 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 19 由圖 38 可以看出 ,隨著溶劑的增多，溶質(zhì)的溶解能力增強(qiáng)， 在 1:40 時(shí)，黃酮的 含量 最高， 但溶劑的量增加到一定程度時(shí)， 黃 酮含量 不再上升。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇 1： 40 作為 以黃酮為指標(biāo)水浸提法的料液比條件 。 表 以 黃酮 為指標(biāo)水浸提 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表 序號(hào) 溫度 料液比 時(shí)間 1 65℃ 1:35 30min 2 70℃ 1:40 60min 3 75℃ 1:45 90min 表 水提取 法 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表 因素 A 水提 溫度 B 料液比 C 水 提時(shí)間 桔梗 浸提液 黃酮 含量 1 1 1 1 2 1 2 2 3 1 3 3 4 2 1 3 5 2 2 1 6 2 3 2 7 3 1 2 8 3 2 3 9 3 3 1 k1 k2 k3 大連工業(yè)大學(xué) 2020屆本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 20 極差 主次順序 B A C 由 表 可見，水浸提法 浸 取 桔梗 汁 時(shí)，物料比 對(duì) 桔梗中黃酮 影響力較大，溫度次之，時(shí)間較低 。 各因素的最佳