【正文】 排列，從而產(chǎn)生撕裂和相互摩擦引起發(fā)熱，同時(shí)保證能量的快速傳遞和充分利用。高 岐 [16]利用微波加熱溶出代替常規(guī)回流提取方法 ， 對(duì)紅皮洋蔥樣品中類黃酮化合物進(jìn)行了微波溶出 —分光光度法測(cè)定 ， 與常規(guī)方法做了對(duì)照 ， 并討論了微波功率、微波時(shí)間、浸提劑濃度、料液比等因素對(duì)溶出結(jié)果的影響 ， 通過(guò)正交試驗(yàn) ，確定了最佳工藝條件為：微波功率 900W， 微波提取時(shí)間 5min， 提取溶劑 80 %乙醇 ，料液比為 1:10。結(jié)果表明：影響洋蔥類黃酮化合物得率的主次因素順序?yàn)槲⒉ㄝ腿r(shí)間＞微波功率＞乙醇體積分?jǐn)?shù)＞料液比。在此條件下，類黃酮化合物的得率為%。 洋蔥類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)分析及藥理活性 結(jié)構(gòu)分析 類黃酮化合物廣泛存在于植物中，具有多種生物活性，是一類重要的天然產(chǎn)物。目前 Lytn等人 [19]從洋蔥中分離出 9濱州學(xué)院本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 4 種類黃酮化合物。王大力等 [21]利用高效液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) (HPLCMS)鑒定洋蔥樣品中類黃酮化合物，結(jié)果表明為槲皮素糖苷。黃酮醇類有山奈酚、槲皮素及它們與葡萄糖組成的單糖苷和二糖苷至多糖苷 [23]?；ㄉ仡愔饕怯苫ㄇ嗨?、花魁素與葡萄糖組成的葡萄糖苷 [24]。 圖 1 洋蔥類黃酮化合物的基本結(jié)構(gòu)式 藥理活性 類黃酮化合物是廣泛存在于植物中的具有多種生物活性的天然產(chǎn)物，越來(lái)越多的研究趨向于天然中草藥物的提取，以治愈疑難病癥，促進(jìn)醫(yī)藥的進(jìn)步。近年來(lái)，對(duì)洋蔥類黃酮化合物藥理活性研究的報(bào)道主要集中于抗氧化活性和OOOOO HOO黃 酮 類 黃 酮 醇 類雙 氫 黃 酮OOO H雙 氫 黃 酮 醇OOOO異 雙 氫 黃 酮 異 黃 酮OO HOO HOC HO花 色 素 類 黃 烷 3 醇 類 黃 烷 3 , 4 二 醇 類濱州學(xué)院本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 5 抗癌活性方面，至于其它方面的藥理活性研究報(bào)道相對(duì)較少。 Sachiko H等 [20]認(rèn)為洋蔥的抗氧化作用是由于黃酮化合物能抑制超氧陰 離子的產(chǎn)生，同時(shí)認(rèn)為槲皮素中的 2,3位雙鍵和 4位羥基以及 3,5位羥基對(duì)洋蔥的抗氧化作用有十分重要的貢獻(xiàn)。張強(qiáng)等 [8]通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出 30ug/ml的洋蔥類黃酮化合物對(duì)超氧陰離子的清除能力與等濃度的 BHT相當(dāng)，同時(shí)，洋蔥黃酮化合物對(duì)羥基自由基有較好的清除能力，并呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系，但清除效果低于等濃度的 BHT；測(cè)定洋蔥類黃酮化合物還原力時(shí)發(fā)現(xiàn)，洋蔥 類黃酮化合物抗氧化能力優(yōu)于 BHT。 抗腫瘤活性 因癌癥是難治之癥，醫(yī)學(xué)工作者對(duì)抗癌藥物的研究態(tài)度積極，醫(yī)學(xué)研究證明類黃酮的抗癌作用主要指能夠減小甚至消除一些化學(xué)物質(zhì)的毒性，關(guān)于類黃酮的抗癌作用機(jī)理， Wattenberg[28]認(rèn)為它起到一種阻斷劑的作用，因?yàn)樗械幕瘜W(xué)致癌物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)后，要在體內(nèi)一種依賴于細(xì)胞色素的 P450 的沒(méi)的作用下活化為可隨意與DNA 反應(yīng)的中間物采有致癌活性的中間物，或誘導(dǎo)某些酶的活性，是致癌物脫毒，也可能與那些有致癌活性的中間體結(jié)合，從而避免它們與 DNA 結(jié)合或反應(yīng)。 Walle 等 [29]認(rèn)為洋蔥中的槲皮素糖苷具有預(yù)防冠心病和癌癥的作用。陳鳳秀等 [31]通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究洋蔥類黃酮化合物對(duì) HCT116 細(xì)胞的增值均有抑制作用，呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性， HCT116 細(xì)胞和免疫細(xì)胞化學(xué)染色體和 HUNEL 在一定的藥物濃度作用后，細(xì)胞均出現(xiàn)凋亡，證明了洋蔥黃酮對(duì)人結(jié)腸癌 HCTL116 細(xì)胞有明顯的增值抑制和凋亡誘導(dǎo)作用。同時(shí)， 探索酶解溫度、乙醇濃度等因素對(duì)提取率的影響。 擬解決關(guān)鍵問(wèn)題 1)酶解溫度 、 pH 值 、 時(shí)間及酶用量的最適值的探討。 3實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)材料 紅皮洋蔥、粉碎機(jī)、 Agilent8451 紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、槲皮素（分析純）、纖維素酶、去離子水。 2)準(zhǔn)確吸取 ， ， ， ， 和 此溶液于 10ml 容量瓶中。 4)分別加入 10% Al(NO3 )3 ,搖勻 ， 靜置 6min。 6)用紫外分光光度計(jì)測(cè)吸光度 ， 用 Origin軟件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 如圖 2。 A 樣品置于燒杯中 ，加水 13ml， 然后加入 5mg 纖維素酶 ， 控制溫度在 45℃ ， 用 HCl 溶液調(diào)節(jié) pH 值在~ 之間 ， 酶解時(shí)間 60min。 2)用索氏提取器同時(shí)加熱提取 A、 B 樣品 2h（從第一滴乙醇蒸汽冷卻下滴開(kāi)始）。 4)用 70%的乙醇定容至 100ml， 準(zhǔn)確吸取 5ml 提取液 ， 用 70%乙醇溶液定容至10ml。 單因素實(shí)驗(yàn) 酶解 pH 對(duì)黃酮類化合物提取的影響：稱取 5 份分別置于 5 個(gè)試管中 ， 各加入纖維素酶 ， 再分別加入 pH 為 4~ 5~ 6~ 7~ 8~9 的水溶液 13ml， 在 45℃ 的水中酶解 60min， 后轉(zhuǎn)入索氏提取器 ， 加入 95％的乙醇 37ml，浸提 90min。 酶解溫度對(duì)黃酮類化合物提取的影響：稱取 5 份分別置于 5 個(gè)試管中 ， 各加入纖維素酶 13ml 水 ， 分別置于溫度為 35℃ 、 40℃ 、 45℃ 、 50℃ 、55℃ 水浴中 ， 酶解 60min， 后轉(zhuǎn)入索氏提取器 ， 加入 95％的乙醇 37ml， 浸提 90min。 濱州學(xué)院本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 8 酶解時(shí)間對(duì)黃酮類化合物提取的影響：稱取 5 份分別置于 5 個(gè)試管中 ， 各加入纖維素酶 13ml 水 ， 在 45℃ 的水中酶解 ， 分別酶解 20min、 40min、60min、 80min、 100min， 后轉(zhuǎn)入索氏提取器 ， 加入 95％的乙醇 37ml， 浸提 90min。 酶用量對(duì)黃酮類化合物提取的影響：稱取 5 份分別置于 5 個(gè)試管中 ，分別加入纖維素酶 、 、 、 3， 5mg、 、 ， 再分別 加入 13ml水 ， 在 45℃ 的水中酶解 60min， 后轉(zhuǎn)入索氏提取器 ， 加入 95％的乙醇 37ml， 浸提90min。 乙醇浸提時(shí)間對(duì)黃酮類化合物提取的影響：稱取 5 份分別置于 5 個(gè)試管中，各加入纖維素酶 13ml 水，在 45℃ 的水中酶解 60 分鐘，后轉(zhuǎn)入索氏提取器，加入 95％的乙醇 37ml，分別浸提 30min、 60min、 90min、 120min。 乙醇濃度對(duì)黃酮類化合物提取的 影響：稱取 5 份分別置于 5 個(gè)試管中，各加入纖維素酶 13ml 水，在 45℃ 的水中酶解 60 分鐘，后轉(zhuǎn)入索氏提取器，分別加入 50%、 60%、 70%、 80%、 90%的乙醇 37ml，浸提 90min。 優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)與分析結(jié)果，選擇單因素實(shí)驗(yàn)較好結(jié)果構(gòu)建正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，優(yōu)化出一套提取率高的提取方案。主要原因是黃酮類化合物主要存在于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，纖維素酶可以破壞細(xì)胞的細(xì)胞壁，使其更充分的溶解出來(lái)，從而提高了提取率。研究表明，酶解的最適 pH 值為 67，如圖 4 所示。 圖 5 吸光度與酶解溫度關(guān)系圖 酶解時(shí)間的影響 酶解時(shí)間與酶用量有較大關(guān)系，本研究的酶用量為 ，如圖 6 所示，黃酮的濃度隨酶解時(shí)間的增長(zhǎng)而增加，當(dāng)酶解時(shí)間為 60min 時(shí)，提取的黃酮濃度最高。 濱州學(xué)院本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 11 圖 6 吸光度與酶解時(shí)間關(guān)系圖 酶用量的影響 在其他因素不變的情況下，考查酶用量對(duì)黃酮提取率的影響，結(jié)果如圖 7 所示，提取率隨酶用量的增加而升高，當(dāng)酶用量達(dá)到 時(shí)，提取率達(dá)到最高點(diǎn)，繼續(xù)增加酶用量，提取率無(wú)明顯變化。 圖 7 吸光度與酶用量關(guān)系圖 浸提時(shí)間的影響 由圖 8 可以看出，在浸提時(shí)間 30min90min時(shí)，黃酮類化合物濃度隨時(shí)間的增大而增大，在浸提時(shí)間為 90min時(shí)達(dá)到最大峰值。濱州學(xué)院本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 12 90min后，兩體系傳質(zhì)推動(dòng)力下降，黃酮類物質(zhì)緩慢浸出。而后，乙醇濃度再增加，黃酮類化合物溶解度減小，一些醇溶性雜質(zhì)、色素等加入同乙醇 水分子結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)，從而導(dǎo)致黃酮類化合物含量的下降。 影 響 因 素 組 數(shù) 濱州學(xué)院本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 14 5結(jié)論 近年來(lái)，對(duì)洋蔥類黃酮化合物結(jié)構(gòu)的研究日漸增多，洋蔥粗加工的產(chǎn)業(yè)發(fā)展已經(jīng)具有 了一定的規(guī)模，但洋蔥類黃酮化合物的提取方法和工藝尚未成熟，對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究非常有限，大多都是對(duì)總黃酮化合物的提取，由于洋蔥中含有大量的類黃酮物質(zhì)，對(duì)洋蔥中類黃酮化合物的種類的分析工作還不完備，仍需進(jìn)一步探究。 本研究 通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)，確定洋蔥中黃酮類化合物的最佳提取方案：酶解時(shí)間 60min，酶解溫度 45℃ ，酶解 pH 值 67，酶用量 ‰ ，乙醇浸提時(shí)間 90min，乙醇濃度 75%，提取率為 。 （有語(yǔ)病）