12基因工程的基本操作程序zl-閱讀頁
2025-03-18 12:18本頁面
【正文】 得 C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D、人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶 A ada(腺苷酸脫氨酶基因 )通過質(zhì)粒 pET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下圖為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的示意圖，試回答下列問題： (1)一般情況下農(nóng)桿菌不能感染的植物是 ____，利用農(nóng)桿菌能在自然條件下感染植物的特點(diǎn)，能實(shí)現(xiàn) __________。 (2)根據(jù) TDNA這一轉(zhuǎn)移特點(diǎn)，猜測該 DNA片段上可能含有控制 _____________________ (酶 )合成的基因。 (4)植物基因工程中將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法除了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可采取 ________________。 ，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。當(dāng)它的成分異常時，動物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。 （ 2）將 cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個表達(dá)載體。如果表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中，大腸桿菌會不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則表明 β 珠蛋白基因已進(jìn)入其中。 結(jié)構(gòu)基因 外顯子 內(nèi)含子 轉(zhuǎn)錄、加工修飾 mRNA 詳細(xì)過程 一、獲取目的基因（ 指編碼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因 ） 鳥槍法 供體 DNA DNA片段 目的基因 逆轉(zhuǎn)錄法 信使 RNA 目的基因 化學(xué)合成法 肽鏈氨基酸序列 信使 RNA序列 基因 DNA序列 目的基因 合成 推測 逆轉(zhuǎn)錄合成 直接提取法（原核生物） 人工合成法（真核生物） ? 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR） ?變性、退火、延伸三步曲 ?變性 ： 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火 ： 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對和結(jié)合 ?延伸 ： 以目的基因為模板，合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ) ? PCR技術(shù)的發(fā)明 ?PCR的發(fā)明是 DNA操作技術(shù)的革命 ? 美國 Mullis教授 開汽車時的聯(lián)想 逶迤崎嶇的山路 —— DNA雙螺旋 行駛的汽車 —— 一小段 DNA引物 …… 1988年發(fā)明了 PCR技術(shù) 1993年獲得諾貝爾獎 ①檢測是否插入目的基因， 利用 DNA分子雜交技術(shù) ，目的基因DNA一條鏈（作探針）與受體細(xì)胞中提取的 DNA雜交，看是否有雜交帶。 ③ 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。 ④ 還可以進(jìn)行個體水平的鑒定，根據(jù)其性狀。 不可以。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是： （ 1） 生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用 受體生物自身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達(dá)； （ 2） 通過 cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄； （ 3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記； （ 4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等； （ 5） 有時需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基
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