312基因工程的基本操作程序(麗)-閱讀頁
2025-01-25 00:55本頁面
【正文】 與鑒定 —— 檢查是否成功 檢測 個體水平鑒定 — ① 檢測轉基因生物染色體的 DNA 上是否插入了目的基因 ② 檢測目的基因是否轉錄出了 mRNA ③ 檢測目的基因是否翻譯成蛋白質 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 方法 —— 方法 —— 方法 —— DNADNA分子雜交 DNARNA分子雜交 抗原 抗體雜交 小結 PCR技術 — 聚合酶鏈式反應 ? 原理： PCR擴增儀 DNA雙鏈復制的基本原理 ? 定義： PCR是一項在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術 ? 條件： 模板、引物、 4種脫氧核苷酸、 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶） 5/ 3/ G— G T— C 5/ 3/ 引物 Ⅱ G— G 變性 （ 9095℃ ） 復性 （ 5560℃ ） 延伸 （ 7075℃ ） DNA受熱變性，解鏈； ； DNA聚合酶作用下進行延伸。 c、 延伸（ 70℃ 75℃ ） ：在 Taq酶的作用下，從 引物的 5′ 端 → 3′ 端延伸，合成與模板互補 的 ________。 2）根據已知的核苷酸序列合成 DNA法 ： DNA合成儀 ： 將目的基因導入微生物細胞 ： 大腸桿菌 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對少 處理細胞 → 細胞→ 表達載體與感受態(tài)細胞混合 → _________細胞吸收 DNA分子。Ti質粒的 TDNA可轉移至受體細胞的染色體上 2.轉化 1. 檢測轉基因生物的染色體 DNA上是否插入了目的基因 提取受體生 物全部 DNA 適當限制 酶切割 DNA片段 用同位素標記的 目的基因片段雜交 顯 出 雜交帶 （表明目的基因已插入） DNA分子雜交技術 2. 檢測目的基因是否轉錄出了 mRNA 提取受體生 物的 mRNA 用同位素標記的 目的基因片段雜交 顯 出 雜交帶 （表明目的基因已轉錄出了 mRNA） 檢測 DNA利用的是 DNA與 DNA雜交，檢測 mRNA利用的是 DNA與 mR
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