基因工程的基本工具和基本操作程序-閱讀頁
2025-01-17 17:53本頁面
【正文】 (1)在采用常規(guī) PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中 ,使 用的 DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的 DNA聚合酶 , 其最主要的特點(diǎn)是 。 表 1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對 引物序列 ,圖 2為引物對與模板結(jié)合示意圖 。 限制酶 Alu I Eco R I Pst I Sma I 切割 位點(diǎn) AG↓CT TC↑GA G↓AATTC CTTAA↑G CTGCA↓GG↑ACGTC CCC↓GGGGGG↑CCC (3)圖 1步驟 ③ 所用的 DNA連接酶對所連接的 DNA兩 端的堿基序列是否有專一性要求 ？ 。 (5)對符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒 T進(jìn)行酶切 。 ①采用 EcoR I和 Pst I酶切 ,得到 種 DNA片斷。 解析 (1)PCR技術(shù)中需通過高溫使 DNA解旋 ,故所 用 DNA聚合酶的耐熱性必須要好 。 含有 (G+C)多的引物 ,可采 用相對較高的退火溫度 。 (4)農(nóng)桿菌的細(xì)胞中有一段 TDNA,農(nóng)桿 菌通過侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后 ,可將 TDNA插入 到植物基因中 ,因此 ,農(nóng)桿菌是一種天然的植物遺 傳轉(zhuǎn)化體系 ,常用作植物轉(zhuǎn)基因工程中的載體 。 EcoRI仍能切開 M處 ,SmaI則不能識別 N和 Y重新結(jié)合 形成的連接點(diǎn) ,只能得到 1個(gè) DNA片段。 已知限制酶 Ⅰ 的識別序列和切 點(diǎn)是 — G↓ GATCC— ,限制酶 Ⅱ 的識別序列和切點(diǎn) 是 — ↓ GATC— 。 ② 將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處 ,還要 加入適量的 。 (2)不同生物的基因可以拼接的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是 ?；? 因工程中常選用酵母菌作為受體細(xì)胞 ,請從細(xì)胞結(jié) 構(gòu)等方面分析用酵母菌作受體細(xì)胞能克服上述不 足的理由： 。 ②繁殖速度 快 ,能很快得到大量的目的基因 。④容易培養(yǎng) ,卡那霉素抗性基因 (kanr)常作為標(biāo)記基因 ,只有含卡那霉素抗性基因 的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長 。 請據(jù)圖回答： (1)A過程需要的酶有 。 (3)C過程的培養(yǎng)基除含有必要營養(yǎng)物質(zhì) 、 瓊脂和 激素外 ,還必須加入 。 (5)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株的卡那霉素抗性基因的 傳遞符合孟德爾遺傳規(guī)律。 ② 若該轉(zhuǎn)基因植株自交 ,則其后代中抗卡那霉素型 與卡那霉素敏感型的數(shù)量比為 。 解析 重組質(zhì)粒的獲得需要限制酶和 DNA連接酶 。二是具有多個(gè)限制酶切 點(diǎn) ,以便與外源基因連接 。 B過程體現(xiàn)出了其中的一 、 三兩 條 。如果自交 ,則后代比例應(yīng)為 3∶ 1。 答案 (1)限制酶和 DNA連接酶 (2)具有標(biāo)記基因 。 (2)加熱至 94℃ 的目的是使 DNA中的 鍵 斷裂 ,這一過程在細(xì)胞內(nèi)是通過 的 作用來完成的。 (4)目的基因?qū)刖d羊受體細(xì)胞常用 技術(shù) 。 解析 (1)A→B 為體外 DNA復(fù)制即 PCR技術(shù) ,與體內(nèi) DNA復(fù)制原理相同 ,解旋方式不同 ,PCR技術(shù)是用高 溫變性使其解旋。(3)PCR技術(shù)與 DNA復(fù)制過程原理是相同的 ,即堿基 互補(bǔ)配對 ,原料均為 4 (4)轉(zhuǎn)基因動物培育中目的基因的導(dǎo)入常用顯微注 射技術(shù)。在個(gè)體水平上鑒定 ,即通過生物 體所體現(xiàn)的性狀來判斷 ,抗蟲棉應(yīng)具有的性狀為害 蟲吞食后使其死亡。 目的基因如果插入某抗性基因中 ,將 使該基因失活 ,而不再具有相應(yīng)的抗性 。 得到 如圖 b的結(jié)果 (黑點(diǎn)表示菌落 )。 據(jù)此分析 并回答： (1)pBR322質(zhì)粒的基本組成單位是 。 (2)與圖 c空圈相對應(yīng)的圖 b中的菌落表現(xiàn)型是 ,由此說明目的基因插入 了 中。 (4)若用 pBR322質(zhì)粒作為載體 ,通過基因工程生產(chǎn) 的食品 ,存在著食品安全性問題 ,試說明理由。 解析 質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌擬核 DNA之外 ,一種裸露 的 、 結(jié)構(gòu)簡單并能自我復(fù)制的雙鏈環(huán)狀 DNA分子 , 其基本組成單位是 4種脫氧核苷酸 。 圖 b培養(yǎng)基上的大腸桿菌能抗氨芐青霉素 ,平移到圖 c 培養(yǎng)基上 ,能長出菌落 ,說明還能抗四環(huán)素 ,長不出 菌落 ,說明不能抗四環(huán)素 ,即 Tetr基因被破壞。 答案 (1)脫氧核苷核 標(biāo)記 (2)能抗氨芐青霉 素 ,但不能抗四環(huán)素 Tetr (3)啟動子和終止子 (4)Ampr、 Tetr控制合成的物質(zhì)在人體內(nèi)發(fā)揮作用 , 使人體內(nèi)的細(xì)菌抗藥性增強(qiáng) ,服用的藥物藥效減弱 7.(2023 (1)目的基因的獲取方法通常包括 和 。 與正常人相比 ,患者在該區(qū)域的堿基 發(fā)生了改變 ,在上圖中用方框圈出發(fā)生改變的堿基 對 。 (3)已知限制酶 E的識別序列為 CCGG,若用限制酶 E 分別完全切割正常人和患者的 p53基因部分區(qū)域 (見上圖 ),那么正常人的會被切成 個(gè) 片段 。 (4)如果某人的 p53基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶 E完全切 割后 ,共出現(xiàn) 170、 2 290和 460對堿基的四種片 段 ,那么該人的基因型是 (P+表示正?；? 因 ,P表示異常基因 )。 (2)基因內(nèi)部個(gè)別堿基對的替換為 基因突變。 (4)由正常人被限制酶 E切出來的具體片 段可知 ,該人的基因型是
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