通過單克隆抗體技術(shù)識別肉的種類以及加熱肉品終點溫度的確認(rèn)-閱讀頁
2025-03-10 15:10本頁面
【正文】 2F8 IgG2b 牛肉，豬肉，羊肉，馬肉，鹿肉 － 3E12 IgG1 雞肉，火雞肉，鴨肉 22－ 34 5D2 IgG1 雞肉，火雞肉 22－ 35 9C6 IgG1 雞肉 120， 5H9 IgG1 豬肉 24 ? 如表 5所示 ， 間接 ELISA反應(yīng)的吸光度或者競爭性 ELISA反應(yīng)所表達的抑制百分率和牛肉中豬肉的百分量對數(shù)之間存在線形關(guān)系 。 ? 檢樣摻雜違規(guī)程度的判斷受限于分析方法所能達到的最低檢測水平，應(yīng)用傳統(tǒng)的瓊脂膠體檢測方法，它的最低檢測量通常在 5－ 10﹪ 。 采用了我們的分析程序，這些分析方法對于摻雜 種類含量的檢測能力在 － 1 ﹪ 之間 ,可以同大多的已報道的用于肉種 類確認(rèn)的 ELISA方法相比。 現(xiàn)在確認(rèn)肉種類的商業(yè) ELISA方法一次只能對單一的種類進行定量檢測。例如應(yīng)用單克隆抗體 2F8來檢測加熱家禽肉制品中普通的哺乳動物肉 的種類，應(yīng)用單克隆抗體 3E12對加熱的牛肉或豬肉中的禽肉進行單一檢測，為 了進一步的確認(rèn)，從最初的檢測中得到 ? 的明確的樣品，接下來可以用單種類的分析方法進行來確認(rèn)存在的特定種類。對于包括特定種類抗體的肌肉蛋白的確認(rèn)可以為單種類單克隆抗體的有效產(chǎn)物提供有價值的信息。對于恢復(fù)多種類的抗原有很多影響因素，例如 PH值，鹽含量，加熱方法，而且為了獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果也應(yīng)對基質(zhì)進行仔細的研究。 4加熱終點溫度的確認(rèn) 非免疫方法 ? 美國農(nóng)業(yè)部使用基于減少蛋白溶解性或是酶活性的各種方法來驗證肉制品是否加熱到所需的最低終點溫度?，F(xiàn)行的方法包括凝結(jié)實驗，作用于加熱溫度低于 65℃ 的牛肉和豬肉產(chǎn)品，酸性磷酸鹽反應(yīng)方法作用于灌裝漢堡，后蝤肉和午餐肉 .牛過氧化氫酶實驗作用于數(shù)量十分少的烘烤和加熱牛肉 ? ，但這些方法自身由于其經(jīng)驗主義和主觀主義而受到批評。許多技術(shù)，例如電泳法，色譜法，微分掃描測熱計以及近紅外線光譜法也在嘗試著應(yīng)用在加熱終點溫度確定過程中。 Callins等認(rèn)為乳酸脫氫酶 在豬肉和牛肉加熱終點溫度確定中可作為分析檢測指標(biāo)，因為酶的活性同加熱中終點溫度和攙雜肉的加熱終點溫度呈反比例的關(guān)系。 免疫方法 乳酸脫氫酶的抗體 ? 禽類制品所需的加熱終點溫度 .火雞 胸脯肉足夠加熱過程的指標(biāo)建議是乳酸替代了檢測酶活性 ELISA 應(yīng)用單克隆和多克隆抗體檢測本源乳酸脫氫酶的方法已運用到定量測定減少酶的濃度，進而可以確定火雞和牛肉制品的終點加熱溫度，這個方法可以區(qū)分 1℃ 以下和 ℃以上加工的火雞胸脯肉的乳酸脫氫酶的濃度，這正是非干制脫氫酶，它最合理 ? 的濃度為 ㎎ /kg肉 .其結(jié)果不受鹽含量，產(chǎn)品包 裝尺寸，煙熏時間表或是加熱過程之 前肉經(jīng)過冷凍貯藏的影響。因為在雞胸脯和大腿肉中存在的酶有不同的熱穩(wěn)定性。 肌肉蛋白質(zhì)的單克隆抗體 ? 基于監(jiān)控平均分布的肌肉蛋白質(zhì)反應(yīng)的方法，可以更好的確定加熱終點溫度。我們應(yīng)用 ? ELISA技術(shù)分別使用單克隆抗體 2f8和單克隆抗體 5d2來研究不同內(nèi)部加熱溫度的牛肉和雞肉 。 當(dāng)加熱溫度從 60℃ 升到 66℃ 時 ELISA反應(yīng)只有 ? 輕 微的增強。在 60－ 66℃ 范圍內(nèi) ELISA反應(yīng)和加熱樣品溫度是線形 關(guān)系，從而這種方法可以預(yù)測加熱牛肉的加熱終點溫度并且在 樣品中有95﹪ 的可信度，誤差為177。在加熱雞胸脯肉中也觀測到了單克隆抗體 5D2的相同對應(yīng)溫度但同之呈線性系的溫度范圍為 60－ 74℃ .同 一定酶或蛋白質(zhì)可溶性減少或活性削減典型測定相比這種方法有更好的應(yīng)用性，因為它可以通過檢測隨著加熱溫度的增加一定肌肉蛋白質(zhì)的 反應(yīng) 活性增加來確定加熱處理的溫度 ， 從對照曲線中可以得到低于和高于必須為難度的終點加熱溫度 。 可以確認(rèn)在不同加熱條件下特定肉樣的足夠加熱溫度 。 ? 單克隆抗體被認(rèn)為是在加熱變性過程中檢測蛋白質(zhì)信息微秒變化的十分有用的工具 (Collawn etal 1988)，通過使用特定變性卵清蛋白的單克隆抗體已經(jīng)確認(rèn)了卵清蛋白熱誘導(dǎo)抗原決定基的不 同，表明可以應(yīng)用單克隆抗體來決定加熱卵清蛋白的溫度。我們正在對使用單克隆抗體監(jiān)測的加熱終點溫度的機制進行研究。未來的研究應(yīng)該去探索和了解在加熱終點溫度下蛋白質(zhì)標(biāo)記的 特性，同時也應(yīng)找到在不同處理 ? 條件下對于各種肉類足夠加熱的均衡點。 十分希望采用新出現(xiàn)的生物技術(shù) ，如 CDNA資料庫和抗體連接技術(shù) ， 有效的應(yīng)用到單克隆抗體中使 結(jié)果更準(zhǔn)確并 ? 可以得到期望的特性 。 單克隆抗體和熱變性可溶蛋白質(zhì)相作用可以應(yīng)用于更寬領(lǐng)域的加熱終點溫度的確認(rèn)中 。 謝謝收看！ 演講完畢，謝謝觀看！
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