通過單克隆抗體技術(shù)識別肉的種類以及加熱肉品終點溫度的確認-免費閱讀
【正文】 十分希望采用新出現(xiàn)的生物技術(shù) ，如 CDNA資料庫和抗體連接技術(shù) ， 有效的應(yīng)用到單克隆抗體中使 結(jié)果更準確并 ? 可以得到期望的特性 。 可以確認在不同加熱條件下特定肉樣的足夠加熱溫度 。我們應(yīng)用 ? ELISA技術(shù)分別使用單克隆抗體 2f8和單克隆抗體 5d2來研究不同內(nèi)部加熱溫度的牛肉和雞肉 。 Callins等認為乳酸脫氫酶 在豬肉和牛肉加熱終點溫度確定中可作為分析檢測指標，因為酶的活性同加熱中終點溫度和攙雜肉的加熱終點溫度呈反比例的關(guān)系。對于恢復(fù)多種類的抗原有很多影響因素，例如 PH值，鹽含量，加熱方法，而且為了獲得準確的定量結(jié)果也應(yīng)對基質(zhì)進行仔細的研究。 采用了我們的分析程序，這些分析方法對于摻雜 種類含量的檢測能力在 － 1 ﹪ 之間 ,可以同大多的已報道的用于肉種 類確認的 ELISA方法相比。對于定量分析來講抗原均勻的分布在不同動物的半天肌肉組織中是十分 ? 重要的，所以抗原的量決定于同樣品中一定目標肌肉組織的分析反應(yīng)，而不用考慮肌肉切面的位置。 3E12同禽肉 反應(yīng)，5D2主要用于雞和火雞的鑒別中。 ? 2）瘦肉混于 ，沸水加熱并且離心 .上層液 121℃ 30分鐘高溫滅菌過濾，用 90﹪ 乙醇進行萃取，沉淀，干燥物溶于鹽溶液中備用。用于加熱處理肉類蛋白鑒別的單克隆抗體技術(shù)也可用于原料肉的鑒 別 中，因為在準備檢測樣品時這些原料肉可以十分容易的被加熱處理。 對于加熱的肉類的確認也應(yīng)用熱穩(wěn)定蛋白。因為血清蛋白的存在可能是必須的，肌肉組織中殘余的血漿成分會發(fā)生變化，那么便意味著肌肉組織的存在，進而可以得出結(jié)論：用這些多克隆技術(shù)來定量的估計攙雜物的量是不可靠的。因此可以十分容易的觀測到血清和相關(guān)種類抗原的交叉反應(yīng)。夾 心 ELISA使 用 固體相上 的抗體作為結(jié)合抗體。 USDAFSIS肉類檢查員對這種技術(shù)做了一定的修繕，使用標定的試劑紙片和提前準備的瓊脂平板使此種 ? 技術(shù)在檢測原料肉的種類時更加便利 .由于瓊脂凝膠免疫擴散實驗靈敏性易變化，培養(yǎng)的時間長，并且非肉的成分干擾大，所以限制了它在完整鮮肉分析中的應(yīng)用。綿羊和山羊 肉類的區(qū)分是使用直接連續(xù)技術(shù)來對比 核苷酸的次序而實現(xiàn)的， 同時也分析了限制核苷酸內(nèi)切酶聚合酶鏈反應(yīng)的產(chǎn)物， 由于費用高和操作的復(fù)雜性，這些基于 DNA 水平的技術(shù)未被常規(guī)分析方法所采納。 等 吸附技術(shù)基于蛋白質(zhì)不同的等電點可以把 蛋白質(zhì)依據(jù)不同種類而分開， 這種技術(shù)被廣泛用于確認 ? 魚肉的種類，也可以用于區(qū)分不同種類的原料肉。 最理想的方法具有特定， 反 應(yīng) 靈敏，快速，經(jīng) 濟性，高 檢測率的特點，并 且能夠提供量性的結(jié)果。 肉類應(yīng)被煮制足夠的時間 ， 有 利于人類的消化吸收 ， 也可以確保消滅其中的病原微生物 。聯(lián)邦法律要 求肉制品必須貼上標簽以證明包含肉的種類。在作用于加熱處理過的肌肉蛋白質(zhì)的過程中， 單抗體技術(shù)已經(jīng)得到發(fā)展 .隨著加熱終點溫度的增 ELISA反應(yīng)的程度也隨之增加，可以用 MABS ? (單克隆抗體技術(shù) ) 來檢測肉品中特定的肉種類。美國農(nóng)業(yè)部食品安全和檢測服務(wù)局（ USDFAFSIS）的管理條例中對使用機械分割肉做了如下的規(guī)定：只要求使用一類肉的肉制品中不要包含任何別的種類的機械分割肉。 鮮豬肉加熱時內(nèi)部溫度應(yīng)達到℃ ， 而且殺死旋毛蟲溫度應(yīng)至 少 比 此溫 度再高 17℃ 。在全部加熱處理過的肉品混合物中 MABS可以對目標品 種的含量就行定量檢測， 而且可以決定預(yù)煮肉的最大中心加熱溫度。 DNA 雜交技術(shù)已被用于多中肉類品種的 確認 ,下一步準備也進行基因組 DNA或克 隆 DNA同目標DNA的雜交，同時用顏色或自行 x射線照相技術(shù)進行檢測工作。血凝抑制實驗是基于阻止抗原血 清 和 它的同類抗原之間積極的反應(yīng)，而此同種類抗原被同種外來羊的紅血細胞所包裹。間 接ELISA,先把抗原吸入一個微量平板上，之后相反動物的抗體與抗原結(jié)合吸附在固體層上，通過二者與隨后加入的反免疫球蛋白的結(jié)合，通過外來添加酶而形成的顏色 .它可以檢測到抗原與抗體的結(jié)合物 。 抗體的來源 ? 在使用酶免疫測定來確認肉的種類成功的發(fā)展的過程中，最重要的是特定種類的抗體，不同種動物需要不同的免疫試劑。經(jīng)過仔細的鏡檢和亞克隆后，可以挑選出穩(wěn)定的雜交細胞鏈，它可以分泌出針對某一特定抗原的抗體，而且產(chǎn)生抗體十分頻繁。然而不溶性蛋白的 提取需要特殊的步驟。這些抗體已應(yīng)用于夾心 ELISA中用于鑒別加熱和罐裝肉類食物中 。在加熱之后，純的肉類蛋白質(zhì)顯著減少，這樣在提取物中只有熱穩(wěn)定性或熱抗性的部分蛋白質(zhì)仍保持可溶性。 SDSPAGE和 免疫點技術(shù)用于確 認 每種單克 隆肉類浸提物種抗原的成分。 ? 所有的單克隆抗體也發(fā)展成對骨骼肌具有特定的反應(yīng)。 表 6所展示的是使用間接和競爭 ELISA應(yīng)用單克隆抗體 5D2來定量檢測豬肉中雞肉含量的藥劑反
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