通過單克隆抗體技術(shù)識別肉的種類以及加熱肉品終點(diǎn)溫度的確認(rèn)-文庫吧在線文庫
【正文】 的。對于肉種類的多克隆技術(shù)已用于可溶性粗蛋白的分析中或凈化肌肉 成分，例如肌鈣蛋白和肌紅蛋白。用 IEF方法， Jones和 Mortiner(1985)說明了 來自腎上腺和肌肉組織的 BE抗原蛋白具有熱穩(wěn)定性。熱穩(wěn)定性這一個詞在字典中被十分清晰的定義，大多情況下，它指經(jīng)過加熱處理的肉類浸提物中保持可溶性 和抗原性的完整蛋白或蛋白碎 片。在我們的實(shí)驗(yàn)室中， 遵 守由 Kohler 和 Milstern描述的一般程序，那便是在隨后 ? 的步驟中要進(jìn)行必要的修飾。 第一 組 四種單克隆抗體技術(shù)用于經(jīng)水或鹽水浸 提過的經(jīng)過加熱處理的肌肉蛋白，它 們 同 ? 特別的加熱肉提取物發(fā)生了強(qiáng)烈的反應(yīng)，但不同原料肉和加熱處理后的肉相作用。無論是使用間接非競爭還是競爭性 ELISA技術(shù)，都表示在肉不同的切 面整個浸提物蛋白濃度和豬肌肉組織得測定數(shù)量水平?jīng)]有不同。 現(xiàn)在確認(rèn)肉種類的商業(yè) ELISA方法一次只能對單一的種類進(jìn)行定量檢測。 4加熱終點(diǎn)溫度的確認(rèn) 非免疫方法 ? 美國農(nóng)業(yè)部使用基于減少蛋白溶解性或是酶活性的各種方法來驗(yàn)證肉制品是否加熱到所需的最低終點(diǎn)溫度。 免疫方法 乳酸脫氫酶的抗體 ? 禽類制品所需的加熱終點(diǎn)溫度 .火雞 胸脯肉足夠加熱過程的指標(biāo)建議是乳酸替代了檢測酶活性 ELISA 應(yīng)用單克隆和多克隆抗體檢測本源乳酸脫氫酶的方法已運(yùn)用到定量測定減少酶的濃度，進(jìn)而可以確定火雞和牛肉制品的終點(diǎn)加熱溫度，這個方法可以區(qū)分 1℃ 以下和 ℃以上加工的火雞胸脯肉的乳酸脫氫酶的濃度，這正是非干制脫氫酶，它最合理 ? 的濃度為 ㎎ /kg肉 .其結(jié)果不受鹽含量，產(chǎn)品包 裝尺寸，煙熏時間表或是加熱過程之 前肉經(jīng)過冷凍貯藏的影響。 當(dāng)加熱溫度從 60℃ 升到 66℃ 時 ELISA反應(yīng)只有 ? 輕 微的增強(qiáng)。 ? 單克隆抗體被認(rèn)為是在加熱變性過程中檢測蛋白質(zhì)信息微秒變化的十分有用的工具 (Collawn etal 1988)，通過使用特定變性卵清蛋白的單克隆抗體已經(jīng)確認(rèn)了卵清蛋白熱誘導(dǎo)抗原決定基的不 同，表明可以應(yīng)用單克隆抗體來決定加熱卵清蛋白的溫度。 單克隆抗體和熱變性可溶蛋白質(zhì)相作用可以應(yīng)用于更寬領(lǐng)域的加熱終點(diǎn)溫度的確認(rèn)中 。未來的研究應(yīng)該去探索和了解在加熱終點(diǎn)溫度下蛋白質(zhì)標(biāo)記的 特性，同時也應(yīng)找到在不同處理 ? 條件下對于各種肉類足夠加熱的均衡點(diǎn)。在加熱雞胸脯肉中也觀測到了單克隆抗體 5D2的相同對應(yīng)溫度但同之呈線性系的溫度范圍為 60－ 74℃ .同 一定酶或蛋白質(zhì)可溶性減少或活性削減典型測定相比這種方法有更好的應(yīng)用性，因?yàn)樗梢酝ㄟ^檢測隨著加熱溫度的增加一定肌肉蛋白質(zhì)的 反應(yīng) 活性增加來確定加熱處理的溫度 ， 從對照曲線中可以得到低于和高于必須為難度的終點(diǎn)加熱溫度 。 肌肉蛋白質(zhì)的單克隆抗體 ? 基于監(jiān)控平均分布的肌肉蛋白質(zhì)反應(yīng)的方法，可以更好的確定加熱終點(diǎn)溫度。許多技術(shù)，例如電泳法，色譜法，微分掃描測熱計(jì)以及近紅外線光譜法也在嘗試著應(yīng)用在加熱終點(diǎn)溫度確定過程中。對于包括特定種類抗體的肌肉蛋白的確認(rèn)可以為單種類單克隆抗體的有效產(chǎn)物提供有價值的信息。 ? 檢樣摻雜違規(guī)程度的判斷受限于分析方法所能達(dá)到的最低檢測水平，應(yīng)用傳統(tǒng)的瓊脂膠體檢測方法，它的最低檢測量通常在 5－ 10﹪ 。表 3說明了 5H9對于不同豬肉組織和食物蛋白的免疫反應(yīng)，也 ? 同時說明了 5D2的特性反應(yīng) .這些單克隆抗體對于特定骨骼肌而具有的特點(diǎn)不同于別的已報(bào)道的結(jié)果，別的報(bào)道講已觀 ? 察到這些抗體對器官，心肌，或平滑肌 ? 的交叉反應(yīng)。 單克隆抗體的特點(diǎn) ? 目前為止，五種免疫球蛋白單克隆抗體技術(shù)在實(shí)驗(yàn)中已用于摻雜肉種類的 檢測。對期望的特性應(yīng)用 MABS（單克隆抗體技術(shù)）檢測 ? 時應(yīng)選擇雜交克隆分泌物，而且必須要經(jīng)過仔細(xì)的鏡檢和亞克隆。這些方法在商業(yè)檢測中是十分有效的， 并且也應(yīng)用于 USDA對加熱肉品種類確認(rèn)的調(diào)查中。這些方法毫無疑 問的可以應(yīng)用于法律事件的檢測中，但 ? 不適用于常規(guī)檢驗(yàn)分析或產(chǎn)地檢驗(yàn)。采用單抗體的方法來對 ? 肉的種類進(jìn)行免疫分析時 ， 應(yīng)保證連續(xù)供應(yīng)統(tǒng)一的免疫試劑 ， 也應(yīng)減少標(biāo)準(zhǔn)分析程序 。傳統(tǒng)的來講，在 ELISA中應(yīng)用的 單抗體來自免疫動物的血清。 競爭 ELISA 技術(shù)是基于提取樣品中有限的抗 ? 體，而自由抗原和與固體相 結(jié)合的抗原與抗體競爭相結(jié)合。瓊脂膠體免疫擴(kuò)散，雙層免疫擴(kuò)散技術(shù)起源于 Ouchyeriony(1948)的描述，同時也涉及抗血清和抗原在半固體瓊脂 ? 膠體中的擴(kuò)散。 這些方法在用于煮制肉類品種 確認(rèn) 方面是獨(dú)特的并且十分有用 , 但是在確認(rèn)聯(lián)系密切肉類 時效果不好下一步準(zhǔn)備顯示牛， 綿羊，山羊 ? 基因組 D
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