【正文】 存6個(gè)月。 標(biāo)準(zhǔn)品：曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松龍、甲睪酮、睪酮、孕酮、醋酸去氧皮質(zhì)酮，純度均大于97 %，物質(zhì)英文名稱及CAS號(hào)見(jiàn)附錄A。 %甲酸水溶液：準(zhǔn)確量取1 mL甲酸加水稀釋至1000 mL。 乙酸銨溶液（ mol/L）： g乙酸銨，加入1000 mL水溶解。 b葡萄糖醛苷酶/芳香基硫酸酯酶（bglucuronidase/arylsufastase）：含有b葡萄糖醛苷酶134600 U/mL，芳基硫酸酯酶5200 U/mL。 乙酸銨。 甲酸：色譜純。 乙腈：色譜純。 GB/T 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理 試樣經(jīng)酶解，用乙腈提取目標(biāo)化合物后，經(jīng)固相萃取富集凈化，液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜂蜜中糖皮質(zhì)激素（曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松）、雄性激素（甲睪酮、睪酮）、孕激素（孕酮）、腎上腺皮質(zhì)激素（羥基醋酸去皮質(zhì)酮）16種激素殘留定性和定量測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)屬首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局負(fù)責(zé)起草。 DBS61陜西省食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)DBS61/0012—2016食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)蜂蜜中16種激素殘留的測(cè)定液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜法 陜西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布20160701實(shí)施20160601發(fā)布DBS61/0012—2016前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局提出。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張璐，李瑩，何強(qiáng)，王菡，孔祥虹，鄒陽(yáng)，付騁宇。13食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)蜂蜜中16種激素殘留的測(cè)定 液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜂蜜中16種激素殘留的液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜（LCMS/MS）的檢測(cè)方法。2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。4 試劑與材料除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。 甲醇：色譜純。 二氯甲烷。 乙酸。 無(wú)水硫酸鈉：650 ℃灼燒4 h，在干燥器中冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。 二氯甲烷甲醇（6+4，體積比）：60 mL二氯己烷和40 mL甲醇混合。 乙腈水溶液（1+9，體積比）：10 mL乙腈和90 mL水混合。 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 mg/mL）： mg各標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，搖勻，18 ℃避光保存，可保存12個(gè)月。 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：根據(jù)需要，臨時(shí)吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（）用水稀釋，配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液0 ℃～4 ℃避光保存，可保存6個(gè)月。 氨基固相萃取柱（60 mg，3 mL）：使用前用6 mL二氯甲烷甲醇（）活化。 分析天平： mg。 振蕩器 渦旋混勻器 高速離心機(jī) 固相萃取裝置 氮吹儀 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 離心管：50 mL。 6 試樣制備與保存對(duì)無(wú)結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品，將其攪拌均勻。7 測(cè)定步驟 提取準(zhǔn)確稱取試樣5 g（ g），于50 mL離心管中，加入20 mL mol/L乙酸銨溶液（），渦旋混合，再加入b葡萄糖醛苷酶/芳香基硫酸酯酶100 mL，于37 ℃177。取出冷卻至室溫，加入20 mL乙腈震蕩提取15 min，4500 r/min下離心5 min，取乙腈層過(guò)無(wú)水硫酸鈉漏斗。合并乙腈層， 40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用10 mL mol/L乙酸銨溶液（）溶解，待凈化。將小柱減壓抽干。用8 mL二氯甲烷甲醇（）洗脫并收集洗脫液，取下HLB小柱，再用2 mL二氯甲烷甲醇（）洗氨基柱，合并洗脫液，于40℃氮?dú)獯蹈?，? mL乙腈水（）溶解殘?jiān)瑴u旋混勻，濾膜（）過(guò)濾，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。 流動(dòng)相： %甲酸水，梯度洗脫，洗脫條件參見(jiàn)附錄B； 糖皮質(zhì)激素質(zhì)譜條件a）電離源：電噴霧離子源；b）離子化方式：負(fù)離子模式；c）檢測(cè)模式：選擇離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)；d）噴霧電壓：2500 V；e）氣化溫度：300 ℃；f）鞘氣（N2）： L/min；g）輔助氣（N2）: L/min；h）離子傳輸管溫度：300 ℃；i）去簇電壓： V；j）碰撞氣（Ar）： Mpa。 雄性激素、孕激素、腎上腺皮質(zhì)激素質(zhì)譜條件a）電離源：電噴霧離子源；b）離子化方式：正離子模式；c）檢測(cè)模式：選擇離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)；d）噴霧電壓：3300 V；e）氣化溫度：300 ℃；f）鞘氣（N2）： L/min；g）輔助氣（N2）: L/min；h）離子傳輸管溫度：300 ℃；i）去簇電壓： V；j）碰撞氣（Ar）： Mpak）特征離子參數(shù)見(jiàn)附錄C. 2。表1 試樣溶液中離子相對(duì)豐度的允許偏差范圍相對(duì)豐度（%）＞50＞ 20～50＞10～20≤10允許偏差（%）177。25177。50 定量測(cè)定根據(jù)試樣中被測(cè)樣液的含量情況，按外標(biāo)法，以峰面積定量。在上述條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液中各目標(biāo)化合物的特征離子流色譜圖見(jiàn)附錄D。 空白試驗(yàn)除不稱取試樣外。注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。 回收率蜂蜜中各種激素的回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)附錄E，~ mg/ %~ %。附 錄 A（規(guī)范性附錄）16種激素物質(zhì)的CAS號(hào)、分子式、分子量及英文名稱 16種激素物質(zhì)的CAS號(hào)、分子式、分子量及英文名稱。醋酸地塞米松Dexamethasone Acetate55812903C24H31FO7地塞米松Dexamethasone50022C22H29FO5曲安西龍Triamcinolone124947C21H27FO6氟米松Flumethasone2135173C22H28F2O5氟氫可的松Fludrocortisone127311C24H30F2O6睪酮Testosterone58220C19H28O2甲睪酮Methyltestosterone58184C20H30O2孕酮Progesterone57830C21H30O2醋酸去氧皮質(zhì)酮21Hydroxyprogesterone21acetate56473C23H32O4附 錄 B（資料性附錄）參考液相色譜條件 16種激素的參考液相色譜條件。表 化合物保留時(shí)間(min)母離子 (m/z)子離子(m/z)SLens電壓 (V)碰撞電壓(eV)醋酸潑尼松龍892316醋酸可的松8923 a16潑尼松龍6339 a21氫化可的松6632 a20甲基潑尼松龍6934 a20醋酸地塞米松9521 a21地塞米松6934 a21曲安西龍5125 a21氟米松7538 a21氟氫可的松6535 a15曲安奈德8026 a24醋酸氟氫松10534 a23注：對(duì)不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。1）非商業(yè)性聲明：附錄D中所列參考質(zhì)譜條件是在Thermo TSQ Vantage質(zhì)譜儀上完成的，此處列出試驗(yàn)用儀器型號(hào)僅為提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同廠家及型號(hào)的儀器。a 為定量離子。 化合物添加水平/(mg/kg)回收率/ %RSD/ %醋酸潑尼松 醋酸可的松 潑尼松龍 氫化可的松 甲基潑尼松龍 醋酸地塞米松 地塞米松 曲安西龍 氟米松 氟氫可的松 曲安奈德 醋酸氟氫松 睪酮 甲睪酮 孕酮 羥基醋酸去皮質(zhì)酮 _______________________________