牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)的研究概述畢業(yè)論文-閱讀頁(yè)
2025-07-07 16:01本頁(yè)面
【正文】 封口材料有利于培養(yǎng)材料的光合干物質(zhì)積累，降低濕度，減少玻璃化苗的發(fā)生。IBA有較好的促進(jìn)植物生根的作用，此外也有使用NAA或IAA誘導(dǎo)生根的報(bào)道。實(shí)驗(yàn)表明，兩步生根法效果最好[11]。曹小勇等使用相類似的材料進(jìn)行研究時(shí)卻發(fā)現(xiàn)，紫斑牡丹胚的上下胚軸及胚根均可正常生長(zhǎng)，有些還可形成完整的幼苗。從生根培養(yǎng)的流程來(lái)看，一般認(rèn)為，當(dāng)生長(zhǎng)素完成誘導(dǎo)作用后會(huì)對(duì)新根的生成有抑制作用[12]。相對(duì)而言，一步生根法難以消除培養(yǎng)后期生長(zhǎng)素的抑制作用，而速蘸法的缺點(diǎn)在于難以充分發(fā)揮生長(zhǎng)素的誘導(dǎo)作用。練苗時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)生根苗移栽成活率有很大影響，適當(dāng)延長(zhǎng)練苗時(shí)間，可以提高移栽成活率[13]?？紫樯?jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)得出，在腐殖土上的移栽成活率為48%，而蛭石作基時(shí)的移栽成活率為33%，相比之下，腐殖土較好。1965年P(guān)artanen，1969年Demoise和Partanen分別以牡丹種子的合子胚為材料，誘導(dǎo)出了愈傷組織，得到二倍體和四陪體的混合細(xì)胞團(tuán)，但沒(méi)有器官發(fā)生活任何形態(tài)發(fā)生的報(bào)道。Wang and van Staden報(bào)道，2，4D能促進(jìn)鳳丹白種胚的子葉兩端形成愈傷組織。葉俠清等在牡丹愈傷組織誘導(dǎo)方面得出，在胚、上胚軸、腋芽、頂芽、土芽、葉片、葉柄、心皮、花藥等外植體中，以土芽的誘導(dǎo)率最高。分析認(rèn)為土芽的組織分化程度最低，最容易脫分化產(chǎn)生愈傷組織，是最理想的外植體材料。牡丹組培中，誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織比較容易，而由愈傷組織分化不定芽卻比較困難，不定芽分化率一般比較低。%。芍藥屬植物具有多核或多細(xì)胞花粉的現(xiàn)象，表明其具有較明顯的體胚發(fā)生潛能，為進(jìn)行體胚發(fā)生研究創(chuàng)造了條件[17]。Roberts和Sunderland在不添加碳和瓊脂的MS液體培養(yǎng)基中。為了改變牡丹種子休眠的習(xí)性，國(guó)外學(xué)著進(jìn)行了胚培養(yǎng)的研究。1976年Zillis和Meyer報(bào)道，胚的離體培養(yǎng)可以將萌發(fā)時(shí)間由8個(gè)月縮至1214周,大大加快了育種進(jìn)程。周仁超將叢生芽切成分成單芽，誘導(dǎo)生根，生根率達(dá)90%以上，大大提高了成苗率，何桂梅等對(duì)幾種日本牡丹的幼胚（65天）進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)培養(yǎng)基、基因型與胚的發(fā)育時(shí)期是影響幼胚立體生長(zhǎng)的重要因素；但幼胚培養(yǎng)成苗率低，只有10%左右。說(shuō)明幼胚不是牡丹胚培養(yǎng)的理想材料；發(fā)育后期的材料適合用作胚培養(yǎng)。近年來(lái)，分子生物技術(shù)的迅猛發(fā)展和廣泛應(yīng)用，使體細(xì)胞胚發(fā)生的研究進(jìn)入一個(gè)嶄新的階段。該項(xiàng)研究填補(bǔ)了牡丹體胚發(fā)生方面的空白，為牡丹的分子育種奠定了一些基礎(chǔ)。組織培養(yǎng)及生物技術(shù)的發(fā)展將作為牡丹育種和繁殖提供重要的技術(shù)基礎(chǔ)。 玻璃化現(xiàn)象在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，葉片和嫩梢呈透明或半透明水浸狀的培養(yǎng)物，稱為玻璃化苗。整體植物與受凍害植物極其相似，從外部葉片壞死并逐漸發(fā)展到整株壞死，給牡丹組培帶來(lái)極大的浪費(fèi)。在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)：NAA、6BA等單獨(dú)或相互作用，均不會(huì)有玻璃化的發(fā)生；溫度的高低與玻璃苗的產(chǎn)生有很大的關(guān)系，在26℃以下沒(méi)有玻璃苗的產(chǎn)生，當(dāng)溫度在2630℃范圍內(nèi)，組培苗則會(huì)發(fā)生玻璃化現(xiàn)象，且隨著溫度的升高，玻璃化的發(fā)生頻率也隨之升高。眾多問(wèn)題中，褐化就是其中最主要的瓶頸之一，因此對(duì)褐化的防止不容忽視。結(jié)果表明，這三種抗氧化劑與吸附劑對(duì)褐化的抑制作用依次增強(qiáng)，其中以10001500mg/L PVP效果最好。結(jié)果表明：褐化集中發(fā)生在接種后四天內(nèi)。所以活性炭的添加量不宜過(guò)高，%%。有的學(xué)著從防止褐化的角度進(jìn)行研究，得出幼莖在組培過(guò)程中褐化的可能性最小，最適宜作為外植體，另外，接種或轉(zhuǎn)接初期進(jìn)行57d的暗培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)入正常培養(yǎng)環(huán)境中，可以減輕組培苗的褐化程度，而不影響組培苗的生長(zhǎng)和增殖。一是生根率不高，甚至一些品種尚未獲得生根苗；二是生根質(zhì)量不高，部分不定根愈傷組織產(chǎn)生，根與莖中間形成離層，缺乏疏導(dǎo)組織的聯(lián)系，且不定根易脫落，影響了下一步的移栽工作。只有提高不定根的質(zhì)量并采取適當(dāng)?shù)姆椒ù蚱蒲康男菝?，提高組培苗適應(yīng)環(huán)境的能力，才能切實(shí)提高移栽成活率。芍藥屬體胚誘導(dǎo)率很低，畸形體胚多，導(dǎo)致植株再生困難。5 總結(jié)及展望正如我們看到的，牡丹的組織培養(yǎng)技術(shù)仍存在許多需要研究和解決的問(wèn)題，并且這些問(wèn)題的解決可能需要很長(zhǎng)一段時(shí)間才能實(shí)現(xiàn)，但該技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐、服務(wù)于生產(chǎn)實(shí)踐已經(jīng)成為今后的必然趨勢(shì)[22]。胚珠和胚培養(yǎng)技術(shù)用于輔助育種，可以縮短育種年限，挽救雜種胚，提高育種效率。因此，牡丹組織培養(yǎng)的研究，道路雖然艱辛曲折，但一定會(huì)成功。此外，需要提出的一點(diǎn)是，為了加速牡丹產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展，中國(guó)洛陽(yáng)牡丹園于2004年6月開(kāi)始投入運(yùn)行牡丹植株組培工作[20]。第一個(gè)階段是培養(yǎng)物的建立，即選擇適合的外植體。第二個(gè)階段是莖芽的增殖方法。第三個(gè)階段是離體植株的生根。第四個(gè)階段是生根苗的轉(zhuǎn)載。牡丹試管苗的生根和移栽是一項(xiàng)非常艱巨的工作，也是影響牡丹組織培養(yǎng)的
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