牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)的研究概述畢業(yè)論文-文庫吧資料
2025-06-28 16:01本頁面
【正文】 [18]。黃守印和周仁超研究了不同基因型的牡丹成熟胚的胚培養(yǎng)，通過叢生芽和不定芽的產(chǎn)生，獲得了較高的增殖率。胚培養(yǎng)技術(shù)是指將植物的種胚接種在無菌的條件下進行培養(yǎng)，使之生長發(fā)育成幼苗的技術(shù)。但是，由花粉分化出器官，從而完成植株再生的過程在牡丹方面尚未有研究結(jié)果公布。在培養(yǎng)基MS+3%蔗糖+500mg/L水解酪蛋白+1mg/LKT+1mg/LIAA中培養(yǎng)3周后，觀察到多細(xì)胞和多核的花粉粒；6周后，2%3%的花粉形成了多細(xì)胞的胚狀體，但它們始終包被著花粉外壁，沒有完成器官分化?？梢?，牡丹組織培養(yǎng)中，由愈傷組織再生植株的途徑還需要深入研究。李玉龍等人誘導(dǎo)牡丹嫩葉和葉柄產(chǎn)生愈傷組織，并分化成不定芽，實現(xiàn)了少量的植株再生；他得出葉柄的愈傷誘導(dǎo)率及愈傷分化率都顯著高于嫩葉。陳怡平[16]等以紫斑牡丹土芽、葉柄、葉片、心皮、和雄蕊為材料進行愈傷組織培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)愈傷組織誘導(dǎo)中，NAA的作用大于BA的作用；NAA濃度稍高于BA濃度比較理想；土芽和頂芽的誘導(dǎo)率最高，適合做外植體。Margherit Beruto等經(jīng)過進一步研究表明，帶有展開葉片的芽比僅具有幼葉原基的芽更容易啟動組培過程。在鳳丹組培中，張子學(xué)等[15]采用種子、種胚以及由此產(chǎn)生的子葉、葉柄、葉片和愈傷組織等作為外植體進行芽的誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)采用胚培養(yǎng)可以打破胚軸休眠，縮短初代培養(yǎng)周期。Gildow和Mitchell用牡丹白化莖為外植體進行組培培養(yǎng)，比較了2SH和SHM兩種培養(yǎng)基（氮含量基本相同，前者為5000mg/L KNO3，后者為2500mg/L KNO3和1650mg/L NH4NO3）的效果，發(fā)現(xiàn)含有還愿態(tài)氮和氧化態(tài)氮SHM培養(yǎng)基更利于愈傷組織的快速生長[14]。3牡丹不同組培方法的研究在植物組織培養(yǎng)過程中，依據(jù)外植體來源不同，植物組織培養(yǎng)可以分為愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、花藥和花粉培養(yǎng)、胚培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)。生根苗移栽應(yīng)選擇涼爽的季節(jié)，以春季和秋季為好，此時溫度適宜，晝夜溫差較大，有利于移栽苗的生長。牡丹組培苗根長約34cm時，從培養(yǎng)室取出，置于4℃進行低溫處理，之后在散射光下封閉瓶口練苗，并逐漸去掉封口材料。因此，現(xiàn)在根誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，轉(zhuǎn)移到不含激素但含活性炭的根形成培養(yǎng)基上培養(yǎng)的兩步料續(xù)生根法對促進牡丹組培苗生根最為有效。另外，張桂花等以黑花魁等品種的頂芽或腋芽為材料進行實驗，結(jié)果表明：單一的生長激素?zé)o法促進生根。周仁超等人以紫斑牡丹胚為材料，在1/2MS+。IBA作為生根誘導(dǎo)劑，使用方法有三種：一步生根法，即將未生根的組培苗接種在含IBA的培養(yǎng)基中，進行長時間的培養(yǎng)；速蘸法，即將用于生根的組培苗的基部在一定濃度的IBA溶液中浸泡一段時間，然后接種在含有活性炭而不含有生長素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)生根；二步生根法，即先將未生根的組培苗接種在含一定濃度IBA的培養(yǎng)基中進行一段時間誘導(dǎo)，然后轉(zhuǎn)入含有活性炭而不含生長素的根形成培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 生根培養(yǎng)與移栽牡丹組培苗生根培養(yǎng)中常用到的培養(yǎng)基有MS、1/2MS。但在鳳丹組織培養(yǎng)中，葉俠清等發(fā)現(xiàn)在29℃、黑暗條件下培養(yǎng)可顯著提高牡丹根皮愈傷組織的增長倍數(shù)和丹皮酚含量[10]。通過變溫處理，加大晝夜溫差會使該現(xiàn)象小時。同時，在組培過程中，亦應(yīng)注意晝夜溫差的控制。此外，還有硫代硫酸鈉、維生素C，活性炭能夠清除培養(yǎng)材料在代謝過程中產(chǎn)生的毒副物質(zhì)、調(diào)劑激素供應(yīng)，因此也有利于褐化的抑制，%%。為此，一些抗氧化劑與吸附劑也被加入培養(yǎng)基中。在細(xì)胞分離素中，以6BA使用最頻繁，[7]。常用的生長素有萘乙酸(NAA )、吲哚乙酸（IAA ）、吲哚丁酸（IBA ），被采用的頻率依次遞減。在牡丹組織培養(yǎng)中，植物生長調(diào)節(jié)劑物質(zhì)用量雖少，但卻發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。但該培養(yǎng)基無機鹽濃度過高，可能引起酚類外溢物質(zhì)的大量產(chǎn)生而導(dǎo)致褐化，于是人們將MS培養(yǎng)基成分減半，形成1/2/MS培養(yǎng)基，被大量使用。其中，隨著消毒時間的延長，污染率呈由高到低的趨勢，而褐化率卻呈由低到高的趨勢，存活率則是先升高，再下降[5]。L1)3060中等較好低毒表1目前，比較成熟的滅菌技術(shù)主要包括以下幾步：①用自來水將外植體表面沖洗干凈；②用適量洗滌靈溶液浸泡20min，用毛刷輕輕洗去鱗片包裹的塵土，用流水沖洗10min；③接著在超凈工作臺上進行滅菌；④用無菌水35分鐘以清除殘余消毒劑；⑤剝?nèi)パ客獠堪镊[片即可接種。消毒劑的濃度和處理時間因品種、外植體類型、取材時期不同有一定的差異。牡丹芽體上或芽體內(nèi)的菌類物質(zhì)是外植體消毒困難的主要原因。不同取材時期對芽的培養(yǎng)也有影響，12月至次年2月份取材，外植體污染率低，成活率高，萌發(fā)時間早，生長迅速，植物健壯，培養(yǎng)效果最好[2]。常見的有洛陽紅、姚黃、鳳凰山牡丹、
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1