【正文】 1:1。 或用至少 3h烘烤來消滅其中的微生物 。 以下介紹幾種常見的試管苗栽培基質(zhì) 。 粗砂即平常所說的河砂 ， 其顆粒直徑為 1— 2mm。河砂的特點(diǎn)是排水性強(qiáng) ， 但保水蓄肥能力較差 ， 一般不單獨(dú)用來直接栽種試管苗 。 ? (3)腐殖土 :腐殖土是由植物落葉經(jīng)腐爛所形成 。 第二年春季將其取出置于空氣中 ， 在經(jīng)常噴水保濕的條件下使其風(fēng)化 ， 然后過篩即可獲得 。 摻有腐殖土的栽培基質(zhì)有助于植株發(fā)根 。 移栽和幼苗的管理 ? 從試管中取出發(fā)根的小苗，用自來水洗掉根部粘著的培養(yǎng)基，要全部除去，以防殘留培養(yǎng)基滋生雜菌。栽植時(shí)用一個(gè)筷子粗的竹簽在基質(zhì)中插一小孔，然后將小苗插入，注意幼苗較嫩，防止弄傷，栽后把苗周圍基質(zhì)壓實(shí)，栽前基質(zhì)要澆透水。再將苗移入高濕度的環(huán)境中。 ? (1)保持小苗的水分供需平衡 。 保持小苗水分供需平衡首先營養(yǎng)缽的培養(yǎng)基質(zhì)要澆透水 ， 所放置的床面也要澆濕 ， 然后搭設(shè)小拱棚 ，以減少水分的蒸發(fā) ， 并且初期要常噴霧處理 ， 保持拱棚薄膜上有水珠出現(xiàn) 。約 15d以后揭去拱棚的薄膜 ， 并給予水分控制 ， 逐漸減少澆水 ， 促進(jìn)小苗長得粗壯 。由于試管苗原來的環(huán)境是無菌的，移出來以后難以保持完全無菌，因此，應(yīng)盡量不使菌類大量滋生，以利成活。可以適當(dāng)使用一定濃度的殺菌劑以便有效地保護(hù)幼苗，如多菌靈、托布津，濃度 800—1000倍，噴藥宜 7— l0d一次。噴水時(shí)可加入 %的尿素，或用 1／ 2MS大量元素的水溶液作追肥，可加快苗的生長與成活。 試管苗移栽以后要保持一定的溫光條件 ，適宜的生根溫度是 18— 200C， 冬春季地溫較低時(shí) ， 可用電熱線來加溫 。 溫度過高會(huì)使水分蒸發(fā) ， 從而使水分平衡受到破壞 ， 并會(huì)促使菌類滋生 。 當(dāng)小植株有了新的生長時(shí) ， 逐漸加強(qiáng)光照 ， 后期可直接利用自然光照 。 ? (4)保持基質(zhì)適當(dāng)?shù)耐庑?。 在管理過程中不要澆水過多 ， 過多的水應(yīng)迅速瀝除 ，以利根系呼吸 。 愈傷組織（ callus） 的形成和形態(tài)發(fā)生 ? 植物的脫分化形式有兩種，器官發(fā)生型和胚胎發(fā)生型，在有些情況下，再分化可以直接發(fā)生于脫分化的細(xì)胞中，無須經(jīng)歷愈傷組織階段，但大多數(shù)情況下，再分化過程是在愈傷組織細(xì)胞中發(fā)生的。 然而 ， 這些細(xì)胞若是一旦脫離了母體植株 ，擺脫了原來所受到的遺傳上的控制和生理上的制約 ， 在不定期下的培養(yǎng)條件下 ， 就會(huì)發(fā)生一種回復(fù)變化 ， 從而失去分化狀態(tài) ， 變?yōu)榉稚?xì)胞 ， 實(shí)現(xiàn)脫分化過程 。 ? 大量研究表明，幾乎所有高等植物的各種器官，如根、莖、葉和花等，以及各種組織，如皮層、莖髓和形成層等，離體后在適當(dāng)條件下，都能產(chǎn)生愈傷組織。當(dāng)然，外植體的類型和外植物體原來在植株上所處的位置（反映了內(nèi)源激素水平）對愈傷組織誘導(dǎo)的影響也不能忽視。 ? 誘導(dǎo)期 ：細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備期 ? 誘導(dǎo)期是細(xì)胞準(zhǔn)備進(jìn)行分裂的時(shí)期 。 ? 誘導(dǎo)期的長短 ， 因植物種類和外植體的生理狀況和外部因素而異 ， 如胡蘿卜的誘導(dǎo)期要好幾天 ， 新鮮的菊芋塊莖則只要 22h， 但菊芋塊莖經(jīng)過 5個(gè)月的貯藏后 ， 誘導(dǎo)期則須延長到 40h以上 。 外植體的細(xì)胞一旦經(jīng)過誘導(dǎo) ， 其外層細(xì)胞開始迅速分裂 ，使細(xì)胞脫分化 。 如胡蘿卜培養(yǎng) 7天后 ， 細(xì)胞數(shù)可增加10倍 。 這是由于細(xì)胞鮮重的增加不如細(xì)胞數(shù)目的增加快的緣故 。 ? 4． 細(xì)胞的核和核仁增大到最大 。 6. 隨著細(xì)胞不斷分裂和組織生長， 細(xì)胞的總干重、蛋白質(zhì)和 核酸含量大大增加，新細(xì)胞壁的合成極快 。 ? 形成期： 從愈傷組織到器官發(fā)生 ? 形成期是指外植體經(jīng)過誘導(dǎo)期和分裂期后形成了無序結(jié)構(gòu)的愈傷組織的時(shí)期。分生組織結(jié)節(jié)可以成為愈傷組織的生長中心，或者進(jìn)一步分化為維管組織結(jié)節(jié) —— 由分生組織結(jié)節(jié)外圍的細(xì)胞作平周分裂成為形成層狀細(xì)胞，并形成了部分維管組織如管胞、纖維細(xì)胞等，但不形成維管系統(tǒng)。 愈傷組織的繼代培養(yǎng) ? 脫分化細(xì)胞不斷進(jìn)行分裂，從而形成了愈傷組織，愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時(shí)間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。通過繼代培養(yǎng)，可使愈傷組織無限期地保持在不分的增殖狀態(tài)。 三 愈傷組織的生長 ? 一般來說 ， 愈傷組織的增殖生長只 發(fā)生 在不與瓊脂接觸的表面 ， 而與瓊脂接觸的一面極少細(xì)胞增殖 ， 只是細(xì)胞分化形成緊密的組織塊 。 ? 愈傷組織之間的 質(zhì)地 有顯著不同，有的很松脆，有的很堅(jiān)實(shí)，且這兩類愈傷組織可互相轉(zhuǎn)變。反之，減低或除去生長物質(zhì)，則松脆的愈傷組織可以轉(zhuǎn)變?yōu)閳?jiān)實(shí)。脆的愈傷組織是進(jìn)行懸浮培養(yǎng)最適合的材料，稍經(jīng)機(jī)械振蕩，即可使組織分散成單細(xì)胞或少數(shù)幾個(gè)細(xì)胞組成的小細(xì)胞團(tuán)。 ? 愈傷組織的質(zhì)地不同是由其內(nèi)部結(jié)構(gòu)上的差異所引起的 。 ? 生長旺盛的愈傷組織 一般呈奶黃色或白色，有光澤，也有淡綠色或綠色的；老化的愈傷組織多轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色甚至褐色。 ? 一個(gè)多細(xì)胞外植體通常包含著各種不同類型的細(xì)胞 ，因此 ， 由它所形成的愈傷組織也是異質(zhì)性的 ， 其中不同的組分細(xì)胞具有不同的形成完整植株或器官的能力 ，即不同的再分化能力 。另外，有一些研究者曾反復(fù)指出的，雖然細(xì)胞脫分化的結(jié)果在大多數(shù)情況下是形成愈傷組織，但這絕不意味著所有的細(xì)胞脫分化的結(jié)果都必然形成愈傷組織。 四 愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式 ? 愈傷組織分生細(xì)胞團(tuán)可進(jìn)行再分化，即進(jìn)行形態(tài)建成，可再產(chǎn)生完整的植株。 ? 在愈傷組織培養(yǎng)物中，細(xì)胞分裂常以無規(guī)則方式發(fā)生，并產(chǎn)生無明顯形態(tài)或極性的無序結(jié)構(gòu)組織塊，這時(shí)雖然在愈傷組織中發(fā)生了細(xì)胞分化，形成維管化組織和瘤狀結(jié)構(gòu)，但并無器官發(fā)生。 ? 在組織培養(yǎng)中 ， 從外植體形成器官或無性系的形態(tài)發(fā)生 ，有下面兩種方式： ? 1． 不定芽方式 （ unfixed bud） 指細(xì)胞或愈傷組織培養(yǎng)物 ， 通過形成不定芽再生成植株 ， 這是細(xì)胞和組織培養(yǎng)中常見的器官發(fā)生方式 。 這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成 ， 尤其對于單子葉植物；（ 4） 先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根 ， 然后兩者結(jié)合起來形成一株小植株 。（以后章節(jié)中介紹） 五． 愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控 ? 來源于不同植物或同一種植物不同部們的愈傷組織 ， 在顏色 、 結(jié)構(gòu)和生長習(xí)性上都可能存在差異 ， 其遺傳生理功能也可能或是具有胚性 ， 或是不具胚性 ， 在不同的實(shí)驗(yàn)中由于目的的不同 ， 對愈傷組織狀態(tài)的要求也不完全相同 ， 但優(yōu)良的愈傷組織通常必須具備以下 4個(gè)特性中的 23個(gè) 。 ? 2． 容易散碎 ， 以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系 ，并且在需要時(shí)能從中分離出全能性的原生質(zhì)體 。 ? 4． 經(jīng)過長期繼代保存而不喪失胚性 ， 有便有可能對它們進(jìn)行各種遺傳操作 。 （ 一 ） 材料本身 ? 1． 遺傳型 材料的基因型對愈傷組織的器官分化有決定性的影響 。 ? 2． 器官和部位 通常同一種植物的不同器官或組織所形成的愈傷組織 ， 無論在生理上或形態(tài)上 ， 其差別均不大 。 如油菜的花器官比葉 、 根易于分化成苗 ， 水稻和小麥幼穗的苗分化頻率也比其他器官為高 。如油菜植株的自下而上的莖段的培養(yǎng)結(jié)果表明，下部的器官形成頻率低，愈入上部，苗的分化頻率越高，苗分化頻率越低。 ? （ 二 ） 培養(yǎng)基 ? 培養(yǎng)基的各種成分和物理性質(zhì)，都對器官發(fā)生產(chǎn)生一定影響，但起決定作用的仍然是植物生長調(diào)節(jié)劑，特別是生長素和細(xì)胞分裂素的配比。 細(xì)胞分裂素 /生長素比例高時(shí)有利于芽形成；而這一比例低時(shí) ， 有利于根的形成 。 ? 但是，要注意的是不同的生長素和細(xì)胞分裂素，對生根和長芽的效果是不同的。 2， 4D往往對生根不利，特別是在較高濃度下。玉米素的作用范圍較窄，但對某些植物有特效。 ? 2． 無機(jī)營養(yǎng)元素 在植物組織培養(yǎng)中和整體植物一樣 ， 細(xì)胞的生長也要求滿足植物生長的必要元素 ， 若完全投入或過多或不足 ， 也會(huì)影響細(xì)胞生長和分化 。 但是各種類型的植物 ， 器官所需要的每種元素的量 ， 特別是大量元素是有區(qū)別的 ， 如生根培養(yǎng)要求無機(jī)離子濃度小一些 ，所以常用 1/2MS或 White。 ? 當(dāng)某些營養(yǎng)元素的供應(yīng)不足時(shí) ， 愈傷組織所表現(xiàn)出來的癥狀如下： ? 氮 —— 某些組織 （ 如五葉地錦 ） 表現(xiàn)出一種很引入注目的花色素苷的顏色；不能形成導(dǎo)管 。 ? 鐵 —— 細(xì)胞分裂停止 。 ? 錳或鉬 —— 影響細(xì)胞伸長 。 各中氯基酸和嘌 呤 、 嘧啶類物質(zhì) ， 可以促進(jìn)器官分化 。 酰胺類往往有促進(jìn)器官形成的作用 。 ? 4． 物理性質(zhì) 培養(yǎng)基的物理性質(zhì) （ 固體或液體狀態(tài) ， 滲透壓等 ） 對形態(tài)發(fā)生有明顯的影響 。 其方法是：第一階段誘導(dǎo)形成愈傷組織 ， 應(yīng)在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；第二階段細(xì)胞和胚狀體的增殖 ，需在液體培養(yǎng)基中完成；第三階段由胚狀體發(fā)育成可移植的植株 ， 又應(yīng)轉(zhuǎn)移到固體瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng) 。 如油菜花藥培養(yǎng)宜先在高糖 （ 910%） 培養(yǎng)基中培養(yǎng) ， 有利于細(xì)胞增殖和胚狀體的形成 。 ? 在愈傷組織誘導(dǎo)階段 ， 一般采用三種做法：全暗 、 周期性光照 、 散射性光照 ， 上述兩種做法誘導(dǎo)率差異不大 。 大豆愈傷組織誘導(dǎo)采用散射性光照比較好；光照對地錢干重的增加明顯地優(yōu)于黑暗培養(yǎng) 。 光周期長短因植物種類而異 。如茄子 、 蘋果等 。 ? 溫度 在組織培養(yǎng)中 ， 一般都采用 2225℃ 的恒溫條件下進(jìn)行外植體的培養(yǎng) 。 但是很多資料表明 ， 溫度高低對器官發(fā)生的數(shù)量和質(zhì)量仍有影響 。 而對于冷涼性植物如百合科 、 十字花科 、 菊科等植物則培養(yǎng)溫度可控制在 25℃ 以下較為適宜 。而國內(nèi)有關(guān)小麥、水稻花藥培養(yǎng)溫度試驗(yàn)的報(bào)道認(rèn)為：在誘導(dǎo)花形成愈傷組織時(shí)，晝夜恒溫較好，而在器官分化時(shí)，晝夜具有一定溫差比較好，分化出的小植株比較健壯。 器官發(fā)生與體細(xì)胞胚胎發(fā)生 ? 一 ． 器官發(fā)生 ? （ 一 ） 概念：離體培養(yǎng)的組織 、 細(xì)胞在誘導(dǎo)條件下經(jīng)分裂和增殖再分化形成根和芽等器官的過程 。 （ 由莖尖 、 腋芽 、原球莖 、 塊莖 、 鱗莖等器官發(fā)生 ） ? （ 2）間接發(fā)生：外植體（已分化的成熟組織）經(jīng)脫分化形成愈傷組織再分化形成器官的過程。 ? 由外植體經(jīng)胚狀體形成完整植株可分三個(gè)不同發(fā)育階段： ? 1)外植體細(xì)胞脫分化 。 這一階段同不定芽方式一樣 。 但在組織培養(yǎng)條件下胚狀體的發(fā)育過程是：細(xì)胞經(jīng)脫分化后 ， 發(fā)生持續(xù)細(xì)胞分裂增殖 ， 并依次經(jīng)過原胚期 、 球形胚期 、 心形胚期 、 魚雷形胚期和子葉期 ， 進(jìn)而成為成熟的有機(jī)體 。 ? 3)胚狀體再發(fā)育成完整植株 在外觀上，這種方式和不定芽均有光滑、圓形突起的形狀。 , February 2, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 :13:4804:13Feb232Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 :13:4804:13:48February 2, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 2月 上午 4時(shí) 13分 :13February 2, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 上午 4時(shí) 13分 48秒 上午 4時(shí) 13分 04:13: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 04:13:4804:13:4804:132/2/2023 4:13:48 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 04:13:4804:13:4804:13Thursday, February 2, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 48秒 04:13: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 48秒 04:13:482 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 , February 2, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 :13:4804:13Feb232Feb23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 48秒 04:13: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 48秒 04:13:482 February 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要