【正文】 反應法，亦稱亞硝酸鹽法或 Griess法） ? 原理： – 體內(nèi) NO釋放后很快變?yōu)閬喯跛猁}和硝酸鹽（穩(wěn)定的終末代謝產(chǎn)物），利用測定亞硝酸鹽和硝酸鹽的含量而間接反映 NO的生成量。 – 有報道用高效液相色譜法可同時測定亞硝酸鹽和硝酸鹽，有較好的發(fā)展前途。 ? 方法簡單，對設備要求簡單，快速，穩(wěn)定，但靈敏度不高，且易受飲食中的硝酸鹽或含硝基化合物等外源性含硝基類物質(zhì)的影響。 ? 方法： cGMP可通過放射免疫法測定。 一氧化氮合酶（ NOS）的測定 ? 原理： – 在還原型尼克酰腺嘌呤和核苷酸磷酸存在的條件下， NOS可催化 L精氨酸和氧氣生成胍氨酸和 NO。 ? 本法應用較廣，但鈣離子濃度，溫度，時間等因素常影響測定結果。因此 ET增高也可以間接反映血管內(nèi)皮功能。這兩者也被當作內(nèi)皮功能標志物，反應血管內(nèi)皮細胞受損的程度。 方法雖無創(chuàng)，但因價格昂貴而不能廣泛應用。 99 Pathophysiology Vascular Disease ? Dyslipidemia, HT, Heredity, Smoking, Diabetes Risk Factors ? Xanthine Oxidase, NADH/NADPH, uncoupled eNOS Oxidative Stress ? NF?B, Chemokines, GFs, sCAM, iCAM, ACE/AGT II Endothelial Factors ? ? NO, ? VD, ?VC, Inflammation, Procoagulant state Function Alterations ? ? Tone, SMCP, Inflam. Cells, Plaque, Neg Remodel ? ? Fibrinolysis, ?Platelet aggregation, ?Inflammation Structural Alterations ? Ischemia, MI, CHF, Stroke, MACE, Death Clinical Sequelae ? O2 Endothelial Cells and ? H2O2 Vascular Smooth Muscle Oxidative Stress: Endothelial Dysfunction and CAD Risk Factors Endothelial Dysfunction Apoptosis Vasoconstriction Leukocyte adhesion Lipid deposition Thrombosis VSMC growth Hypertension Smoking Diabetes LDL Homocysteine Estrogen deficiency 內(nèi)皮功能異常與心血管疾病 ? 動脈粥樣硬化 （ Atherosclerosis， AS） ? 高血壓 （ Hypertension） ? 充血性心力衰竭 （ CHF） ? 心肌缺血 （ Myocardial ischemia） ? 血管內(nèi)皮細胞損傷與心血管介入 EC在心血管病的發(fā)生、發(fā)展中起著不可忽視的作用，糾正疾病時內(nèi)皮功能的紊亂，有助于疾病的治療，同時對于理解心血管疾病的病因?qū)W也有幫助。 動脈粥樣硬化 ? 概念： – AS是指內(nèi)膜下脂質(zhì)沉積 ， 同時有平滑肌細胞和纖維基質(zhì)成分的增殖 ， 逐步發(fā)展形成 AS斑塊的廣泛性動脈病變 。 The Universal Damage Coronary Heart Disease Endothelial Dysfunction ? NO ↑ Inflammation ↑ Thrombosis Genes Coronary Risk Factors The Essential Components Pathogenesis of AS Non Vulnerable Atheromatous Plaque Vulnerable Atheromatous Plaque 106 ? AS中的內(nèi)皮細胞 ?危險因素： –高血壓 、 缺氧 、 高膽固醇血癥 、 糖尿病 、吸煙及血液流變學 、 動力學改變等 。 在這兩種中 ， 有一共同點 ， 即 各種損傷因素首先導致了內(nèi)皮的功能紊亂 ， 從而引起一系列的細胞間的相互作用 ， 使 AS得以發(fā)生發(fā)展 。 – AS是內(nèi)皮細胞與平滑肌細胞 、 血小板 、 白細胞等的相互作用的過程 。 ? 隨著血清膽固醇的下降及動脈粥樣硬化的消退 ， 內(nèi)皮功能的異常可得到 逆轉(zhuǎn) 。 ? 高膽固醇 可激活補體，促進白細胞和血小板在內(nèi)皮聚集和粘附，致使血流減慢和血管通透性升高，導致內(nèi)皮的損傷。 ? 高血壓及血流動力學的變化 可引起內(nèi)皮破損，使內(nèi)膜暴露。 – 使內(nèi)皮細胞界面轉(zhuǎn)變成 促進血液凝固 和 抑制纖溶 的表面； – 舒血管物質(zhì) （ PGl EDRF等）釋放減少，而 收縮因子 (ET等 ) 釋放增加；引起 血管收縮 、 通透性增加 、組織缺血； – 促進 平滑肌細胞增殖 及向內(nèi)膜下 遷移 ； – 促進 誘導中性粒細胞、單核細胞等炎癥細胞 由血管腔向血管壁 黏附浸潤 ； – 激活血小板釋放 PAF、 ADP等， 促進血小板粘附 于內(nèi)皮細胞上，釋放氧自由基、蛋白水解酶、白三烯等，進一步造成 內(nèi)皮損傷 ； – 調(diào)節(jié) 血管細胞外基質(zhì)的合成 ； – 細胞因子可調(diào)節(jié)自身的表達， 并誘導一些相關蛋白生長因子的表達。 ? 高血壓時 血管 EC功能的失調(diào) ? 血管 EC功能失調(diào)在高血壓發(fā)病中的 作用 ? 糾正血管 EC功能失調(diào)在高血壓治療中的 意義 高血壓時 VEC功能的失調(diào) ? 證據(jù)： – 不同高血壓動物分離得到的動脈顯示，高血壓時 EC首先受到損害，其功能失調(diào)。 ? 表現(xiàn)： – 以內(nèi)皮依賴性舒張反應減弱為特征 ， 與血壓升高的程度呈相關性 。 VEC功能失調(diào)在高血壓發(fā)病中的作用 ? EC功能失調(diào)是高血壓的結果而不是原因 – 動物實驗提示， 內(nèi)皮受損是繼發(fā)于高血壓的 。 ? EC既是外周血管阻力的調(diào)節(jié)器，又是高血壓的靶組織 – 高血壓引起血管內(nèi)皮結構功能改變，既可引起血管的內(nèi)皮依賴性舒張反應受損， 血管痙攣性收縮 ；又可促進血管平滑肌細胞增殖纖維化，引起 血管壁僵硬 ，血管阻力升高，結果引起血壓進一步升高，血壓升高后進一步損害血管內(nèi)皮細胞的結構和功能，如此周而復始，使高血壓病程持續(xù)性發(fā)展，甚至發(fā)生嚴重的并發(fā)癥，造成 惡性循環(huán) 。 – 抑制內(nèi)皮源性收縮因子 ET1等的產(chǎn)生或拮抗其作用 。 ? 意義： – 有效降低血壓； – 進一步減輕高血壓引起的血管變化，如粥樣硬化和平滑肌肥大； – 也有可能進一步降低與高血壓有關的心腦血管意外，如中風和心肌梗死的發(fā)病率和死亡率。 充血性心力衰竭 ? 動物實驗研究 – CHF時內(nèi)皮依賴的舒張功能 受損。 – CHF時病人血管內(nèi)皮結構及功能均受到損害，自分泌舒血管物質(zhì)能力下降，相反，縮血管肽內(nèi)皮素的釋 放增多。 心肌缺血 ? 動物實驗研究： – 心肌缺血再灌注后 EC功能紊亂，特征是舒血管物質(zhì)釋放減少，縮血管物質(zhì)作用增強 – 心肌缺血、 心肌梗塞時乙配膽堿所引起的內(nèi)皮依賴的舒張反應大大削弱， EC的縮舒血管功能失衡。 – 在缺血造成的 EC損傷中，白細胞參與并釋放損害 EC的物質(zhì)，在冠狀微循環(huán)中尤為明顯。 ? 臨床研究： – 急性心肌梗塞時，血漿中內(nèi)皮素水平明顯升高（ 35倍），梗塞面積越大，內(nèi)皮素水平越高。 ? 損傷盡管不是心肌梗塞的起因，但其功能的受損卻加重了梗塞區(qū)的擴大及心功能的惡化。 – 有試用內(nèi)皮素抗體于急性心肌梗塞病人，得到了良好的治療效果。 ? PTCA術后再狹的發(fā)生機制 – 導管或電極機械損傷血管內(nèi)皮，內(nèi)皮功能失調(diào)，血液動力學發(fā)生改變，由此引發(fā)大量誘聚物和血管活性物質(zhì)在損傷血管局部堆積，血小板活化，導致 PTCA術后血栓形成、內(nèi)皮過度增生，再狹窄發(fā)生。 – 促凝和抗凝因素相互作用，由損傷程度和血流動力變化情況，決定何者主導。 ? 治療的指導意義 – 通過了解血管內(nèi)皮細胞的結構和功能特點，探討疾病的發(fā)病與血管內(nèi)皮細胞的關系，有助于弄清某些心血管疾病的發(fā)病機制，在摸索新的診斷方法和尋找新的治療措施等方面有很大的理論意