cr技術(shù)培訓(xùn)講座ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-01-25 14:16本頁(yè)面
【正文】 檢查操作程序 ? 每次買來(lái)一批新試劑時(shí)，先觀察外包裝有無(wú)破損及有效期等，試劑運(yùn)輸過(guò)程中有無(wú)冷凍保存，如有異常，及時(shí)與廠家聯(lián)系。 ? 試劑的靈敏度：取衛(wèi)生部臨檢中心購(gòu)買的已知拷貝數(shù)的血清 1份，并稀釋至 10拷貝數(shù)，用新試劑檢測(cè)，計(jì)算出靈敏度。CV%應(yīng)在 30%。 熒光定量 PCR室內(nèi)質(zhì)控程序 ? 每天門診抽取病人血標(biāo)本時(shí)，須先仔細(xì)認(rèn)真核對(duì)化驗(yàn)單和病人姓名是否符合。 ? 每次試驗(yàn)中，須同時(shí)測(cè)定 1份陰性對(duì)照與一份質(zhì)控品。由于PCR產(chǎn)物增加按指數(shù)方式進(jìn)行，所以擴(kuò)增效率即使相差極小，也會(huì)極大改變產(chǎn)物的濃度。 終產(chǎn)物濃度的影響：終產(chǎn)物濃度達(dá)到一定水平后，不會(huì)再保持指數(shù)式增長(zhǎng)，而是進(jìn)入平臺(tái)期。 PCR診斷試劑質(zhì)量控制要點(diǎn) 酶活性測(cè)定 引物序列的確定 PCR加樣區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、檢測(cè)區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi) 選擇特異、敏感及簡(jiǎn)單快速的 PCR產(chǎn)物檢測(cè)方法 DNA聚合酶的活性及穩(wěn)定性能達(dá)到一定的要求，并有固定的來(lái)源 PCR產(chǎn)物檢測(cè)方法要盡可能的可靠、快速方便 PCR試劑盒的檢定人員應(yīng)進(jìn)行專門的培訓(xùn) 生產(chǎn)質(zhì)量檢定方法 ? 引物 20%聚丙烯酰胺凝膠電泳，應(yīng)只出現(xiàn)單一條帶；紫外分光光度計(jì)測(cè)定 A260/A280應(yīng)在 ～ 1. ? 分子信標(biāo)探針的質(zhì)控 ? Taq酶的質(zhì)控 穩(wěn)定性：放置于 37℃ 7天的實(shí)驗(yàn) Taq酶，與正常條件的 Taq酶做對(duì)比實(shí)驗(yàn)，測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控品 B、 G系列， B系列樣品全部為陰性，熒光強(qiáng)度在， 50以下； G系列樣品應(yīng)能測(cè)出 1fg/ul DNA，待測(cè)酶與對(duì)照酶測(cè)定 100fg/ul DNA的相對(duì)熒光強(qiáng)度均值相比波動(dòng)不超過(guò)177。 活性對(duì)比：待測(cè) Taq酶與對(duì)照 Taq酶做對(duì)比實(shí)驗(yàn)，測(cè)定室內(nèi)質(zhì)控品 B、 G系列， B系列樣品全部為陰性，熒光強(qiáng)度在， 50以下；G系列樣品應(yīng)能測(cè)出 1fg/ul DNA，待測(cè)酶與對(duì)照酶測(cè)定 100fg/ul DNA的相對(duì)熒光強(qiáng)度均值相比波動(dòng)不超過(guò) 177。 基因診斷市場(chǎng)前景 ? 基因診斷技術(shù)產(chǎn)品是重要的醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品。美國(guó)國(guó)家臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)主席 Enns斷言，對(duì)于感染性疾病，以 PCR檢測(cè)技術(shù)為基礎(chǔ)的基因檢測(cè)技術(shù)必然取代傳統(tǒng)的病原體檢測(cè)方法。 PCR的假陰性和假陽(yáng)性產(chǎn)生原因 ? 假陰性：操作不當(dāng)，試劑質(zhì)量差（包括引物和探針設(shè)計(jì)不當(dāng)）或過(guò)期、儀器設(shè)備不準(zhǔn)確 ? 假陽(yáng)性：幾乎均由污染所致 基因診斷市場(chǎng)容量及發(fā)展前景 ? 美國(guó) 《 自然遺傳學(xué) 》 雜志 2022年 9月 27日發(fā)表一項(xiàng)調(diào)查報(bào)告，列出了未來(lái) 5至 10年內(nèi)最有希望為改善世界各國(guó)、特別是廣大發(fā)展中國(guó)家人們的健康狀況作出貢獻(xiàn)的十大關(guān)鍵生物技術(shù)。調(diào)查報(bào)告認(rèn)為，十大關(guān)鍵生物技術(shù)中，位居第一位的就是針對(duì)傳染病的分子診斷技術(shù)，包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、單克隆抗體等技術(shù)。美國(guó)商務(wù)部預(yù)測(cè)，到2022年美國(guó)基因診斷產(chǎn)業(yè)收入將達(dá)到 200億美元。這些舉措的實(shí)施將對(duì) PCR檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展起到積極的指導(dǎo)和促進(jìn)作用，使其市場(chǎng)潛力得到
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