[基礎醫(yī)學]功能基因組研究-閱讀頁
2024-12-22 23:18本頁面
【正文】 含子 真核生物中有的結構基因不含有內(nèi)含子 ， 如組蛋白基因 、 干擾素基因等 ， 它們大多數(shù)以基因簇的形式出現(xiàn) ， 大多數(shù)的酵母結構基因也沒有內(nèi)含子 。 3． 側翼序列 在第一個外顯子和最末一個外顯子的外側是一段不被翻譯的非編碼區(qū) ， 稱為側翼序列 。 4． 啟動子 啟動子 （ promoter） 是基因中一段能結合 RNA聚合酶的 DNA序列 ， 由于它與 RNA聚合酶的結合 ， 由此開始 轉錄 。 它約在基因轉錄起始點上游約 30~50bp處 ， 基本上由 AT堿基對組成 ， 是決定基因轉錄起始點的選擇 ， 為 RNA聚合酶的結合處之一 ， RNA聚合酶與 TATA框結合才能開始轉錄 。 （ 3） GC框 （ GC box）：有兩個拷貝，位于CAAT框的兩側，由 GGCGGG組成，是一個轉錄調控區(qū)，有激活轉錄調控的功能 。在真核基因轉錄起始點的上游或下游一般都有增強子 ，增強子可與特異性細胞因子結合而促進轉錄的進行 。 6． 終止子 在一個基因的末端往往有一段特定順序 ， 它 具有轉錄終止的功能 ， 這段終止信號的順序 稱為終止子 （ terminator） 。 在回文序列的下游有 6~8個 AT對，因此，這段終止子轉錄后形成的 RNA具有發(fā)夾結構，并具有與 A互補的一串 U，因為 AU之間氫鍵結合較弱，因而 RNA/DNA雜交部分易于拆開，這樣的轉錄物從 DNA模板上釋放出來是有利的， 也可使 RNA聚合酶從 DNA上解離下來，實現(xiàn)轉錄的終止 。 基因克隆 這一系列艱巨的 、 極富挑戰(zhàn)性的解碼工作促使我們進入了 功能基因組 研究時代 。 基因克隆 1972年 ,美國學者 Berg P等人首次在體外進行 DNA的重組研究 , 成功地構建成第一個人工 DNA分子。 基因克隆 基因工程所采用的基本技術被稱為 DNA體外重組技術 ,也被稱為基因克隆或分子克隆技術。 基因克隆 一、 克隆概念 ：克隆（原指一個親本細胞產(chǎn)生成千上萬個相同細胞組成群體的過程 , clone），也就是細胞的無性繁殖。該技術是基因工程技術的核心。 目的基因 克隆載體 連 接 DNA重組體形成 含重組子的克隆菌 表達產(chǎn)物 RE消化 RE消化 T4 DNA連接酶 轉化（轉染）宿主細胞 誘導表達 獲得某一基因或 DNA片段，將其插入載體 DNA分子中，形成一個新的重組DNA分子。 陽性重組體細胞的篩選和鑒定。 只有 II型內(nèi)切酶在分子生物學中應用 。 2. DNA分子的結構和構型 ,環(huán)狀超螺旋 DNA的酶解效率低 于線型 DNA,限制酶識別序列中核苷酸的甲基化將阻止限制酶的切割 。 在保證限制酶切割效率前提下 ,盡量避免長時間酶解反應 , 5. 酶及酶量 , 高質量的酶及不使用過高的酶濃度 ,防止雜酶活性的產(chǎn)
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