王鏡巖生物化學-第35章dna的重組與基因工程-在線瀏覽
2025-02-23 22:33本頁面
【正文】 隆 )— 應用酶學的方法，在體外將 目的基因 與 載體 DNA結合成一具有自我復制能力的 DNA分子（ 復制子、重組體 ），繼而通過轉化或轉染宿主細胞、篩選出含有目的基因的轉化子細胞，再進行擴增、提取獲得大量同一 DNA分子拷貝，或其 表達產(chǎn)物 。 terr ampr 篩選標志 （單一） （一）重組 DNA技術的相關概念 基因載體 vector p BR 3 22E c o R ⅠHind ⅢBam H ⅠAva ⅠPv u ⅡSal ⅠPst Ⅰ O r i 氨芐青霉素 抗性基因 四環(huán)素抗性基因 Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 （一）目的基因獲得 化學合成法 基因組 DNA 基因組 DNA文庫 — 存在于轉化細菌中、克隆載體攜帶的所有基因組 DNA的集合 cDNA cDNA文庫 聚合酶鏈式反應 PCR (二 )克隆載體的選擇和構建 (三 )外源基因與載體的連接（ DNA連接酶） 連接方式 1. 粘性末端連接 連接效率高 相同酶切末端 配伍末端 連接效率低 Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 目的基因載體 DNA+d G TP+d C TPPo ly GPo ly C3′3′3′3′重組 DNA技術簡圖 (四 ) 重組 DNA導入受體菌 基因工程菌 HB101,JM109 轉化 制備感受態(tài)細胞 冷的氯化鈣處理 細胞處于最適攝取和容忍外來 DNA的生理狀態(tài) Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 (五 )重組體的篩選 screening/selection 1. 直接選擇法 抗藥性標志選擇 標志補救 表達產(chǎn)物與營養(yǎng)缺陷互補 α—互補 藍白斑篩選 分子雜交 探針 原位雜交 /Southern印跡法 限制性酶切圖譜 /PCR 免疫學方法 Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 (六 )克隆基因的表達 載體有轉錄、翻譯的
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