微生物第七章-1-在線瀏覽
2025-02-02 04:39本頁面
【正文】 當?shù)南♂尪?，定量?~）取稀釋液涂布平板，或者定量（ 1mL）取稀釋液與融化后冷卻至 45℃ 的培養(yǎng)基混合倒平板； ? 培養(yǎng)后，對長出的單菌落計數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)，得到原菌液的生物量： cfu/mL 通常選擇三個稀釋度涂平板，擇其合適者計數(shù)； 19 ? 單細胞或絲狀微生物的生物量均可用直接測量濕重或干重的方法測量； ? 離心收集細胞沉淀，無菌水充分洗滌后，直接分析天平稱重 — 濕重（ mg/ml）； ? 洗滌后的細胞沉淀在 105℃ 下烘干至恒重，分析天平稱重 — 干重（ mg/ml）； ? 培養(yǎng)液菌體濕重約 40g/L，干重約 4mg/mL； ? 濕重受培養(yǎng)基成分影響大，而不準確；干重法費時，靈敏度低，適于測定絲狀微生物： 細胞濕重和干重法 20 ? 在一定范圍內，菌懸液的菌體濃度與一定波長下的光密度值（ optical density, OD值）呈線性關系；用分光光度計，在 600nm波長下，測定菌懸液的 OD600值，或吸光度值（ A600），可校正為 1 OD = n個細胞 /mL； 分光光度法 ?OD值在 ~性關系； ?適用于單細胞或單孢子懸液的生物量測定； 21 ? 在不方便使用顯微計數(shù)、平板菌落計數(shù)、細胞濕重和干重測定、分光光度測定生物量的情況下，可測定與生物量成比例關系的細胞總蛋白量，總核酸量，或者呼吸強度，間接測定總生物量，稱為生理指標法； ? 測定總蛋白：凱氏定氮法測定 ? 測總核酸：定磷法測定 ? 測呼吸強度： CO2產生量（速率） 生理指標法 22 ? 生長規(guī)律：二分裂殖的單細胞微生物在分批培養(yǎng)過程中，其生物量的增長隨培養(yǎng)時間的變化規(guī)律：即生長過程表現(xiàn)出延遲期、指數(shù)生長期（對數(shù)期）、穩(wěn)定期、對數(shù)衰亡期（死亡期）的規(guī)律變化； ? 非二分裂殖或非單細胞的微生物在分批培養(yǎng)過程中，生長規(guī)律類似，但不典型； ? 一般通過繪制微生物培養(yǎng)過程的生長曲線，反映其生長規(guī)律和生長參數(shù)； 微生物的生長規(guī)律 23 微生物的生長曲線 ? 生長曲線：在分批培養(yǎng)中，以微生物的生物量為縱坐標，以培養(yǎng)時間為橫坐標繪制的曲線圖，反映生物量隨培養(yǎng)時間的變化； ?對于二分裂殖的單細胞微生物，用細胞數(shù)量的對數(shù)值為生長曲線的縱坐標； ?對于其它微生物可用培養(yǎng)液的OD值或者細胞干重作為縱坐標； 24 ? 在確定的液體培養(yǎng)條件下，接種后，每隔一定時間取樣，測定生物量，至培養(yǎng)結束；用生物量對培養(yǎng)時間作圖，得到某種微生物在特定條件下的生長曲線； 生長曲線的繪制方法 實線為活菌計數(shù)，虛線為總菌計數(shù) 25 延遲期和指數(shù)生長期 ? 延遲期（ lag phase）：培養(yǎng)的最初階段，生物量不隨培養(yǎng)時間增加； ? 此階段，細胞繁殖速率很低，細胞處于吸收營養(yǎng)，調整代謝的生理階段； ? 此階段，細胞繁殖速率最大且穩(wěn)定，細胞代謝旺盛生理狀態(tài)均一； ?對數(shù)期（ log phase）或指數(shù)生長期（ exponential growth phase）：生物量隨培養(yǎng)時間呈指數(shù)曲線增長； 26 穩(wěn)定
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