微生物第七章-1(編輯修改稿)
2025-01-19 04:39 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 定量（ ~）取稀釋液涂布平板，或者定量（ 1mL）取稀釋液與融化后冷卻至 45℃ 的培養(yǎng)基混合倒平板； ? 培養(yǎng)后，對長出的單菌落計(jì)數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)，得到原菌液的生物量： cfu/mL 通常選擇三個(gè)稀釋度涂平板，擇其合適者計(jì)數(shù)； 19 ? 單細(xì)胞或絲狀微生物的生物量均可用直接測量濕重或干重的方法測量； ? 離心收集細(xì)胞沉淀，無菌水充分洗滌后，直接分析天平稱重 — 濕重（ mg/ml）； ? 洗滌后的細(xì)胞沉淀在 105℃ 下烘干至恒重，分析天平稱重 — 干重（ mg/ml）； ? 培養(yǎng)液菌體濕重約 40g/L，干重約 4mg/mL； ? 濕重受培養(yǎng)基成分影響大，而不準(zhǔn)確；干重法費(fèi)時(shí)，靈敏度低，適于測定絲狀微生物： 細(xì)胞濕重和干重法 20 ? 在一定范圍內(nèi)，菌懸液的菌體濃度與一定波長下的光密度值（ optical density, OD值）呈線性關(guān)系；用分光光度計(jì)，在 600nm波長下，測定菌懸液的 OD600值，或吸光度值（ A600），可校正為 1 OD = n個(gè)細(xì)胞 /mL； 分光光度法 ?OD值在 ~性關(guān)系； ?適用于單細(xì)胞或單孢子懸液的生物量測定； 21 ? 在不方便使用顯微計(jì)數(shù)、平板菌落計(jì)數(shù)、細(xì)胞濕重和干重測定、分光光度測定生物量的情況下，可測定與生物量成比例關(guān)系的細(xì)胞總蛋白量，總核酸量，或者呼吸強(qiáng)度，間接測定總生物量，稱為生理指標(biāo)法； ? 測定總蛋白：凱氏定氮法測定 ? 測總核酸：定磷法測定 ? 測呼吸強(qiáng)度： CO2產(chǎn)生量（速率） 生理指標(biāo)法 22 ? 生長規(guī)律：二分裂殖的單細(xì)胞微生物在分批培養(yǎng)過程中，其生物量的增長隨培養(yǎng)時(shí)間的變化規(guī)律：即生長過程表現(xiàn)出延遲期、指數(shù)生長期（對數(shù)期）、穩(wěn)定期、對數(shù)衰亡期（死亡期）的規(guī)律變化； ? 非二分裂殖或非單細(xì)胞的微生物在分批培養(yǎng)過程中，生長規(guī)律類似，但不典型； ? 一般通過繪制微生物培養(yǎng)過程的生長曲線，反映其生長規(guī)律和生長參數(shù)； 微生物的生長規(guī)律 23 微生物的生長曲線 ? 生長曲線：在分批培養(yǎng)中，以微生物的生物量為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制的曲線圖，反映生物量隨培養(yǎng)時(shí)間的變化； ?對于二分裂殖的單細(xì)胞微生物，用細(xì)胞數(shù)量的對數(shù)值為生長曲線的縱坐標(biāo)； ?對于其它微生物可用培養(yǎng)液的OD值或者細(xì)胞干重作為縱坐標(biāo)； 24 ? 在確定的液體培養(yǎng)條件下，接種后，每隔一定時(shí)間取樣，測定生物量，至培養(yǎng)結(jié)束；用生物量對培養(yǎng)時(shí)間作圖，得到某種微生物在特定條件下的生長曲線； 生長曲線的繪制方法 實(shí)線為活菌計(jì)數(shù)，虛線為總菌計(jì)數(shù) 25 延遲期和指數(shù)生長期 ? 延遲期（ lag phase）：培養(yǎng)的最初階段，生物量不隨培養(yǎng)時(shí)間增加； ? 此階段，細(xì)胞繁殖速率很低，細(xì)胞處于吸收營養(yǎng)，調(diào)整代謝的生理階段； ? 此階段，細(xì)胞繁殖速率最大且穩(wěn)定，細(xì)胞代謝旺盛生理狀態(tài)均一； ?對數(shù)期（ log phase）或指數(shù)生長期（ exponential growth phase）：生物量隨培養(yǎng)時(shí)間呈指數(shù)曲線增長； 26 穩(wěn)定期 ?
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