【正文】 依法測(cè)定(附錄Ⅳc)。 依法測(cè)定(附錄ⅡA)，最大吸收峰279nm177。2nm；在320～360nm處無(wú)吸收峰。 (附錄Ⅵc)。 CHO細(xì)胞蛋白殘留量 用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，％。 用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，％。℃保溫6小時(shí)，色譜柱為反相C8柱(25cm，粒度5um，孔徑30nm)，柱溫為45℃℃；；進(jìn)樣量為20ul；按下表進(jìn)行梯度洗脫(表中A為O．1％三氟乙酸水溶液，B為0．1％三氟乙酸80%乙腈水溶液)。 N末端氨基酸序列(至少每年測(cè)定1次) 用氨基酸序列分析儀測(cè)定，N末端序列應(yīng)為： AlaProProArgLeuIleCys AspSerArgValLeuGluArgTyr。 除復(fù)溶時(shí)間和水分測(cè)定外，應(yīng)按標(biāo)示量加入滅菌注射用水，復(fù)溶后進(jìn)行其余各項(xiàng)檢定。 應(yīng)為白色疏松體，復(fù)溶后為無(wú)色澄明液體。 依法檢查(附錄V B)，應(yīng)符合規(guī)定。 ％(附錄ⅦD)。 3 3．3．3鈉離子含量 應(yīng)不大于190mmol／L(附錄ⅦJ)。 依法測(cè)定(附錄ⅥB第二法)，應(yīng)符合經(jīng)批準(zhǔn)的蛋白質(zhì)含量范圍。 33．4．2體內(nèi)法 按附錄X B測(cè)定供試品體內(nèi)活性(IU／m1)，根據(jù)標(biāo)示裝量計(jì)算供試品生物學(xué)括性(IU／瓶)，應(yīng)為標(biāo)示量的80％～140％。 每1000IU人促紅素應(yīng)小于2EU(附錄ⅫE凝膠限量試驗(yàn))。 4保存、運(yùn)輸及有效期 于8℃以下避光保存和運(yùn)輸。5使用說(shuō)明應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。含適宜穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素。 2制造 ’ 重組鏈激酶工程菌株系由帶有鏈激酶基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株。 主種子批和工作種子批的菌種應(yīng)進(jìn)行以下各項(xiàng)全面檢定。 應(yīng)為典型的革蘭陰性桿菌。 (工作種子批可免做) 應(yīng)為典型大腸桿菌形態(tài)，無(wú)支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。 在搖床中培養(yǎng)，應(yīng)不低于原始菌種的表達(dá)量。 ’ 將檢定合格的工作種子批菌種接種于適宜的培養(yǎng)基(可含適量抗生素)中培養(yǎng)，供發(fā)酵罐接種用。 。發(fā)酵液應(yīng)定期進(jìn)行質(zhì)粒失率檢查(附錄ⅨG)。 采用經(jīng)批準(zhǔn)的純化工藝進(jìn)行初步純化，使其純度達(dá)規(guī)定的要求。加入適宜穩(wěn)定劑菌過(guò)濾后，保存于適宜溫度，并規(guī)定其有效期。 按經(jīng)批準(zhǔn)的配方配制稀釋液。 。 。 應(yīng)符合“生物制品分裝和凍于規(guī)程”規(guī)定。 應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。 依法測(cè)定(附錄ⅥB第二法)。 依法測(cè)定(附錄Ⅳc)。經(jīng)掃描儀掃描，純度應(yīng) ％。色譜柱采用十八烷基硅烷鍵鍵合硅膠為填充劑；以A相(三氟乙酸水溶液：，充分混勻)、B相(三氟乙酸乙腈溶液：取1．Oml三氟乙酸加入色譜純乙腈至1000ml，充分混勻)為流動(dòng)相，在室溫條件下，進(jìn)行梯度洗脫（0～70％B相)。按面面積一化法計(jì)算。 依法測(cè)定(附錄Ⅳc)。 每1次人用劑量應(yīng)不高于10ng(附錄ⅨB)。 依法測(cè)定(附錄ⅨA)，不應(yīng)有殘余氨芐西林或其他抗生素活性。 ～(附錄ⅣD)。3nm(附錄ⅡA)。 N末端氨基酸序列(至少每年測(cè)定1次) 用氨基酸序列分析儀測(cè)定，N末端序列應(yīng)為： ValLysProValGlnAlaIleAlaGlySerGluTrpLeuLeuAsp。 依法檢查(附錄ⅫA)，應(yīng)符合規(guī)定。 按免疫印跡法(附錄ⅧA)或免疫斑點(diǎn)法(附錄Ⅷ B)測(cè)定，應(yīng)為陽(yáng)性。 依法檢查(附錄V B)，應(yīng)符合規(guī)定。 ％(附錄ⅦD)。 應(yīng)為標(biāo)示量的80％～150％(附錄X I)。 每1次人用劑量應(yīng)小于15EU(附錄ⅫE凝膠限量試驗(yàn))。 4保存、運(yùn)輸及有效期 于2～8℃避光保存和運(yùn)輸。 5使用說(shuō)明 應(yīng)符合“生物制品包裝規(guī)程”規(guī)定。用于預(yù)防傷寒。　　 菌種檢定　　～、馬丁瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基?！　　　∮?7℃培育18～20小時(shí)的培養(yǎng)物以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成含菌6億/ml，與傷寒菌診斷血清作定量凝集試驗(yàn)，充分混合后放37℃過(guò)夜，以肉眼見到凝集（+）之血清最高稀釋度為凝集反應(yīng)之效價(jià)。并用傷寒Vi及O血清做凝集試驗(yàn)，應(yīng)與Vi血清有凝集，與O血清不凝集，或僅有較低凝集。每1稀釋度的菌懸液腹腔注射體重14～16g之小白鼠，最少5只，觀察3天?！　?毒性試驗(yàn)　　用37℃培育18～20小時(shí)之瓊脂培養(yǎng)物混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，56℃加溫1小時(shí)（或其他方法殺菌）。殺菌試驗(yàn)合格后稀釋為每ml含菌60、30及15億共3個(gè)濃度，～18g小白鼠5只，觀察3天，注射15億菌之5只小白鼠可有3只死亡?！　?抗原性試驗(yàn)　　選體重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力試驗(yàn)所用之菌液靜脈注射3次，第1次注射7億菌，第2次14億菌，第3次21億菌，每次間隔7天?！　?菌種保存　　菌種應(yīng)凍干保存，凍干菌種保存于2～8℃　　，合格后可使用3年，以后每次生產(chǎn)前必須檢查全部特性一次，合格者可繼續(xù)使用2年?！　?菌種　　凍干菌種啟開后應(yīng)檢查菌形、純度及玻片凝集試驗(yàn)（包括用Vi血清做玻凝集反應(yīng)），合格后即可使用，每啟開1支凍干菌種用于生產(chǎn)不應(yīng)超過(guò)6代?！　?原液制造　　 接種　　可采用涂種，接種后置37℃培育18～24小時(shí)。刮取菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水中。　　 殺菌　　%177。加殺菌劑后的原液應(yīng)放在37℃，不得超過(guò)7天，以后保存于2～8℃。　　 原液合并　　無(wú)菌試驗(yàn)合格的原液按不同菌株或不同制造日期分別過(guò)濾合并?！　?原液檢定　　 鏡檢　　菌形應(yīng)正常，無(wú)雜菌?！　?無(wú)菌試驗(yàn)　　按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行?！　?免疫力試驗(yàn)　　原液于無(wú)菌試驗(yàn)合格后與質(zhì)量檢定部門會(huì)同進(jìn)行，抽檢批數(shù)不應(yīng)少于生產(chǎn)批數(shù)的1/5。　　 原液保存　　原液應(yīng)保存于2～8℃?！　　　?原液配合　　稀釋前應(yīng)先將不同菌株所制之原液按菌數(shù)等量混合，但每個(gè)菌株所加的菌數(shù)與應(yīng)加菌數(shù)在總菌數(shù)不變的原則下允許兩個(gè)菌株之間在40%范圍內(nèi)互有增減?！　?菌苗濃度　　每ml含傷寒菌3億　　 菌苗分批　　同組配合的原液用同一批稀釋液在同一日稀釋的各瓶菌苗為1批?！　?檢定　　稀釋后每批應(yīng)逐瓶抽樣進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)及測(cè)定防腐劑含量（大罐稀時(shí)除外）?！　? 成品檢定　　　　菌苗應(yīng)為乳白色懸液，～，不應(yīng)有搖不散的菌塊及異物。　　 菌形及純度　　染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性桿菌?！　?無(wú)菌試驗(yàn)　　按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行?！　　　∮皿w重18～20g之健康小白鼠2只，用苯酚作防腐劑的菌苗注射之小白鼠會(huì)發(fā)生戰(zhàn)栗癥狀，但不應(yīng)超過(guò)半小時(shí)，觀察7日，不得有局部膿腫或死亡。自稀釋之日起效期為1年半。傷寒菌苗使用說(shuō)明書　　本品系用傷寒菌培育后，取菌苔制成懸液，加甲醛殺菌，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋制成?！　”酒窞槿榘咨幕鞈乙?，含苯酚防腐劑，不應(yīng)含有異物或搖不散的凝塊?！　∮梅ā　?．上臂外側(cè)三角肌附著處皮膚經(jīng)消毒后皮下注射?！　?周歲以上～14周歲：?！　〖訌?qiáng)注射劑量與第3針相同?！　?．孕婦，月經(jīng)及哺乳期。　　反應(yīng)　　局部可出現(xiàn)紅腫，有時(shí)全身有寒熱或頭痛。瓶?jī)?nèi)有搖不散的凝塊、異物，或安瓿有裂紋，曾經(jīng)發(fā)生過(guò)凍結(jié)者都不能使用?！　”４妗　”４嬗?～8℃暗處。供兒童預(yù)防百日咳、白喉及破傷風(fēng)之用。　　 精制白喉類毒素應(yīng)符合《吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程》中4項(xiàng)的要求?！　? 制造　　 配方　　每ml制劑中各種抗原成份含量如下：　　百日咳菌45億～90億　　精制白喉類毒素20Lf　　精制破傷風(fēng)類毒素5Lf　　 吸附劑配制，見《吸附精制破傷風(fēng)類毒素制造及檢定規(guī)程》5項(xiàng)。%（g /ml），%（g /ml），高壓蒸汽滅菌?！?。如用大罐吸附時(shí)，所用抗原和吸附劑可以多批混合（精制類毒素不超過(guò)3批），每罐為1批。不應(yīng)有搖不散的凝塊或異物?！　?%～%(g /ml)?！　?%(g /ml)?！　?無(wú)菌試驗(yàn)　　按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。　　 安全試驗(yàn)　　 小白鼠法　　用體重18～20g之健康小白鼠5只，不得有局部膿腫或死亡?！　?效力試驗(yàn)　　 百日咳菌苗免疫力試驗(yàn)　　每3批抽1批進(jìn)行，應(yīng)符合附錄1《百日咳菌苗原液制造及檢定要求》。取體重300～400g豚鼠4只，第30天采血，將分離的血清等量混合，進(jìn)行白喉及破傷風(fēng)抗毒素單位測(cè)定?！　?破傷風(fēng)抗毒素單位測(cè)定　　用L+/100小白鼠皮下法。取體重300～350g豚鼠5只以上?！　?亦可按WHO推薦的效力檢定方法（見《吸附精制白喉類毒素制造及檢定規(guī)程》附錄和《吸附精制破傷風(fēng)類毒素制造及檢定規(guī)程》附錄）。自吸附之日起效期為1年半。用于制備百日咳菌苗、白喉、破傷風(fēng)類毒素混合制劑?！　?菌種檢定　　 培養(yǎng)特性　　于包姜（BordetGengou）氏或其他適宜的培養(yǎng)基上培育，各菌株應(yīng)具有典型的形態(tài)及生化特性。同時(shí)與單價(jià)分型血清做定量凝集反應(yīng)，其型別應(yīng)與該菌種標(biāo)定型別相同。判為合格?！　?免疫力試驗(yàn)　　 方法　　按附錄2《百日咳菌苗原液免疫力試驗(yàn)方法》進(jìn)行。若試驗(yàn)菌液的效價(jià)低于此要求時(shí)，可復(fù)試，其結(jié)果的幾何平均值（如用概率分析法時(shí)，應(yīng)用加權(quán)幾何平均值）≥，仍判為合格?！　?凍干菌種應(yīng)保存在2～8℃?！　?. 制造　　 制造百日咳菌苗原液至少應(yīng)選用2個(gè)菌株，制成的菌苗應(yīng)含3型因子。如用液體培養(yǎng)基，不得含有已知引起人體毒性或變態(tài)反應(yīng)的成分。于35～37℃培育不超過(guò)72小時(shí)，以后各代不超過(guò)48小時(shí)，傳代菌種保存不得超過(guò)14天，凍干菌種啟開后用于生產(chǎn)時(shí)不應(yīng)超過(guò)10代。培育時(shí)間不得超過(guò)48小時(shí)，經(jīng)檢查為純菌后，用適當(dāng)方法收集菌體，～。亦可用其他適宜的殺菌劑和殺菌方法殺菌。有雜菌生長(zhǎng)者應(yīng)廢棄。不同菌株不同日期制造2的原液應(yīng)分別合并?！　?原液檢定　　 濃度測(cè)定　　每瓶原液應(yīng)按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量檢定部門會(huì)同測(cè)定濃度。　　 鏡檢　　每瓶原液取樣稀釋至成品濃度，涂片染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性球桿菌?！　?凝集反應(yīng)　?、裣嘌遄龆磕囼?yàn)，其凝集效價(jià)應(yīng)達(dá)血清原效價(jià)之半，如僅達(dá)到或低于血清原效價(jià)1/4時(shí)，應(yīng)作免疫力試驗(yàn)，合格后方可使用；同時(shí)應(yīng)用單價(jià)分型血清做定性凝集試驗(yàn)，其所含型別應(yīng)與制造原液的菌種型別相同。如特異無(wú)菌試驗(yàn)有百日咳菌生長(zhǎng)，可復(fù)試一次，若仍有百日咳菌生長(zhǎng)，原液應(yīng)判為不合格?！　?判定　　試驗(yàn)組小白鼠注射后72小時(shí)的總體重不少于注射前總體重，第7天小白鼠增加的體重不少于對(duì)照組增加體重的60%，并不得有死亡，該批原液毒性試驗(yàn)判為合格。仍達(dá)到不過(guò)要求。原液自采集之日起至成品發(fā)出不得少于4個(gè)月。附錄2 百日咳菌苗原液免疫力試驗(yàn)方法　　1 免疫　　 動(dòng)物　　選用體重10～12g同性或雌雄性各半的健康NIH小白鼠?！　?免疫原稀釋　　177?！　?免疫方法　　將不同稀釋度的免疫原分別免疫小白鼠。　　 培養(yǎng)基　　可用包姜氏培養(yǎng)基（含羊血20%～30%）或其他適宜的培養(yǎng)基。原代菌種放2～8℃可保存2周。用滅菌脫脂棉過(guò)濾，測(cè)定濃度，～、作為試驗(yàn)組的攻擊菌液，然后再連續(xù)稀釋，、800、80及8個(gè)菌，以上5個(gè)不同稀釋度的菌液，作為對(duì)照組的攻擊菌液?！　　　≡诠羟昂螅臃N于包一姜氏培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基平皿中，每次不得少于2個(gè)平皿，其菌落形成單位約為濁度測(cè)定的1/4。在試驗(yàn)組攻擊后再進(jìn)行對(duì)照組毒力測(cè)定，對(duì)照組每稀釋度攻擊10只小白鼠。攻擊后第2天，將試驗(yàn)組動(dòng)物處理成每組16只或20只?！　? 結(jié)果計(jì)算　　　 按WilsonWorcester氏法計(jì)算參考菌苗及待檢菌苗的ED50177?！　?按ReedMuench氏法計(jì)算對(duì)照組LD50，1個(gè)LD50的菌數(shù)應(yīng)不高于800個(gè)菌?！　　　〈龣z原液每ml應(yīng)含IU=參考菌苗ED50/待檢原液ED50參考菌苗每ml的IU數(shù)　　6 效力評(píng)價(jià)　　百日咳原液按成品菌苗嘗試稀釋后。　　2 177?！　? ?！　? 注射后的小白鼠應(yīng)逐日觀察，并于喂食后2小時(shí)進(jìn)行稱重?！　? 試驗(yàn)組小白鼠注射后72小時(shí)的總體重不少于注射前的總體重；7天小白鼠平均增加的體重不少于對(duì)照組平均增加體重的60%，并不得有死亡，該批原液毒性試驗(yàn)判為合格。吸附百日咳菌苗、白喉、破傷風(fēng)類毒素混合制劑使用說(shuō)明書　　本品系由百日咳菌苗原液、精制白喉類毒素及精制破傷風(fēng)類毒素用氫氧化鋁吸附制成。供兒童預(yù)防百日咳、白喉及破傷風(fēng)之日?！　〗臃N對(duì)象　　3個(gè)月～6周歲兒童?！　　　∽?月齡開始免疫，至12月齡完成三針次免疫，每針間隔4～6周?！　〗伞　∮邪d癇、神經(jīng)系統(tǒng)疾患及抽風(fēng)史者禁用。　　反應(yīng)　　注射本品后，局部可有紅腫、疼痛、發(fā)癢，或有低熱、疲倦、頭痛等，一般不須特殊處理即行消退，如有嚴(yán)重反應(yīng)應(yīng)及時(shí)診治?！　。植靠赡苡杏步Y(jié)，可逐步吸收?！　　?000腎上腺素，供偶有發(fā)生休克時(shí)急救用?！　”４妗　?yīng)保存于2～8℃暗處，不得凍結(jié)。用于預(yù)防結(jié)核病。嚴(yán)禁使用通過(guò)動(dòng)物的菌種制造卡介苗?！　?菌種檢定　　新收到的菌種或新制備種子批應(yīng)進(jìn)行下列檢定。培育溫度在37～39℃之間。在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基上發(fā)育的卡介菌應(yīng)是干皺成團(tuán)略呈淺黃色。在雞蛋培養(yǎng)基上有突起的皺型和擴(kuò)散型兩類菌落，且