【正文】 低毒副作用的優(yōu)勢 [1]。醫(yī)學研究表明：心腦血管疾病已成為中老年人群中發(fā)病率較高的一項頑疾。因此市場上對治療心血管疾病的藥品需求量很大。為了提高對該藥材質量的控制，我們采用大孔吸附樹脂法以蘆丁為標準品對刺玫果中總黃酮提取進行研究，為提取刺玫果中有效物質提供一定參考。 《中華大辭典》稱：刺玫果具有健脾理氣,養(yǎng)血調經之功效。現(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，刺玫果具有抗衰老、抗疲勞、耐缺氧，增強人體免疫功能作用，長期服用能顯著提高人體的 SOD 含量 [2]。還具有顯著的抗衰老、抗疲勞、抗輻射、耐缺氧、治血栓、降血壓、防癌、治癌、強身壯陽、健腦增智、延年益壽的作用。目前刺玫果正在作為一種天然保健藥物被日益重視和廣泛開發(fā)。臨床已研制出以刺玫果為原料的“冠心病口服液” 等注射液和口服液 [4]。為提高刺玫果提取工藝的科學性，特以主要成分總黃酮為考察指標，采取大孔吸附樹脂純化刺玫果中的總黃酮，以多種樹脂共同吸附黃酮,考察其吸附率及解析率,尋找最優(yōu)樹脂。對刺玫果中總黃酮的提取方法做了進一步探索，通過實驗找出最經濟實惠，效率較高的方法，能實現(xiàn)實際的工業(yè)生產。2 / 46 有關刺玫果的介紹 藥材來源及植物特征1．形態(tài)特征野生刺玫果為落葉小灌木，莖直立，多皮刺，株高 ～2m 。葉互生，奇數羽毛狀復葉，小葉 5～7 個，小葉長圓形或闊披針形，長 1～，寬 ～，先端尖或稍鈍,基部圓形或楔形，邊緣具細鋸齒，正面深褐色無毛，背面灰白色有粒狀腺點及短柔毛，葉柄有腺體，托葉宿存。果實球形或卵球形，直徑 1～，呈紅色或橙黃色，果肉的果邊萼片基部有茸毛，種實為瘦果，多數包于花托內而成聚合果，果熟時花托肉質，果實為冬不落果。陽性樹種，喜光，但稍能耐陰，結果生長性狀好的郁閉度不超過 。以群叢分布為主，很少單生?，F(xiàn)分類如下：刺玫果含豐富的維生素（mg/100g）：Vc12742264，遠高于蘋果、橘子、獼猴桃等水果。從刺玫果干果及鮮果中共檢出了 28 種礦物元素，其中 11 種為人體必需的礦物元素，3 / 46如鉀、磷、鈣、鈉、鎂、鋅、銅、鐵、錳等。已經鑒定的脂肪酸有硬脂酸、軟脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳二烯酸、二十碳三烯酸等，呋喃衍生物有糠基乙酸酯、正己基呋喃、2呋喃基戊醛等。 刺玫果含 17 種氨基酸，包括 7 種人體必須的氨基酸，游離氨基酸總量為，水解氨基酸總量為 mg/100g，其中精氨酸含量最高。已報道到的有：金絲桃苷、銀煅苷、橙皮苷、槲皮素。已報道到的有：木麻黃素、刺玫果素、刺玫果素 DD T 2，龍芽草素，金櫻子素及特有成份 6—四氧—沒食子酰βD—葡萄糖，6—四氧—沒食子酰βD—葡萄糖等。 刺玫果的藥理作用據《中國中藥大辭典》記載：花：甘、微苦、溫。治吐血、血崩、肋間神經痛、月經不調、肺結核咳嗽、腹瀉。根：苦、澀、平。用于慢性氣管炎、腸炎、細菌性痢疾、胃功能失調、膀胱炎、功能性子宮出血、跌打損傷 [8]。黑龍江老年醫(yī)學研究所對 100 例健康老人的臨床測試表明服用刺玫果浸膏粉后，能使 %受試者睡眠增加，%食欲增加，%精力增加，%體力增加，%肺活量增加，%聽力增加。4 / 46刺玫果水提物及醇提物均可降低大鼠、兔的血壓及腦血管阻力，增加冠脈流量，抑制血小板聚集，延長凝血時間，抑制血栓形成。以刺玫果為主組成復方制劑治療腦血栓、腦動脈硬化及冠心病 133 例，臨床總有效率為 %。刺玫果能明顯提高小鼠血清半數溶血值，增強機體的體液免疫功能。、耐缺氧和類性激素作用劉中申等進行了小鼠荷重游泳實驗及減壓耐缺氧實驗，結果刺玫果組存活時間顯著高于空白對照組。刺玫果對實驗性酒精、氯仿及亞硝酸鈉+氨基比林分布引起的小鼠肝損傷均有顯著拮抗作用，能抑制這些肝損傷劑對小鼠谷丙轉氨酶的增高及肝細胞的纖維化轉變，此作用可能與刺玫果富含齊墩果酸及維生素 C 有關 [13]。刺玫果可阻斷二甲基亞硝胺在動物體內外的合成，其阻斷率（%）遠高于同濃度維生素 C 的阻斷率（%） 。通過跳臺實驗、迷宮實驗及藥物所致記憶障礙實驗表明，刺玫果復合制劑能明顯提高小鼠記憶力，可對抗東莨菪堿所致記憶獲得障礙，對氯霉素引起的記憶鞏固不良和400mL/L 乙醇引起的記憶再現(xiàn)障礙亦有拮抗作用 [15]。在臨床上還應用于治療消化不良、氣滯腹瀉、胃痛、月經痛及頑固性淋病等。其中維生素 C含量高達 2720mg/100g，微量元素 Se 含量高達目前所報道的果品、蔬菜及其他食品中極少見的高含量。同時，刺玫果中還含有多種黃酮類物質及本文中未測定的其他多種維生素類、活化酶類、藥效成分等。在當代迅速發(fā)展的抗衰老藥物研究中，作為人類抗衰老的天然添加劑及其綜合利用，刺玫果將具有重要意義。刺玫果中維生素 E、胡蘿卜素含量很高（1956 年有報道） ，山西省醫(yī)藥研究所測試的微量元素 Se，17 種微量元素及總黃酮未見有報道。在測定刺玫果中維生素 C 含量時，我們在相同條件下測定山楂果維生素 C 含量，發(fā)現(xiàn)山楂果中總黃酮含量遠大于刺玫果肉（山楂濃縮汁中總黃硐含量大于 280mg/100mL；但在相同條件下，刺玫果中維生素 C 含量穩(wěn)定性很好，山楂果維生素 C 含量保存率較低，揭示刺玫果中除含有大量類黃酮保護維生素 C 免受破壞外，可能還含有大量抗氧化酶類如谷胱甘肽還原酶（GSSG12） 、過氧氫酶（CAT） 、過氧化物酶（POT）等，可抑制氧化酶系的作用。近年對刺玫果的藥理研究表明，刺玫果有顯著的抗衰老、抗疲勞、抗血栓、耐缺氧及類似性激素樣作用?？勺o張冠狀動脈、增加冠狀動脈血流量，降低其阻力，改善心肌營養(yǎng)血流，降低心肌耗氧量及對抗氧化鉀，去甲腎上腺素引起的血管和腦垂體后葉素引起的心肌缺血，使腦動脈壓力下降，還可顯著抑制血小板聚焦，可用于防治冠心病、高血壓、腦血管功能不全，腦血栓和治療老年人失眠、健忘、易疲勞及性功能減退等。刺玫果是野生食用果，對人體無毒，毒理實驗報道，刺玫果水醇提取液對小鼠試驗 LD50 為 g /kg.綜上所述，刺玫果是一種很有營養(yǎng)價值及保健作用的天然植物。陽性樹種，喜光，但稍能耐陰，結果生長性狀好的郁閉度不超過 。以群叢分布為主，很少單生。根為木質，粗長，暗褐色，枝暗紫色，無毛，小枝及葉柄基部有成對的皮刺，刺稍彎曲或直?；▋尚?，整齊，花梗稀膨大，花托壇狀，稀為杯狀，萼裂片5，稀為 4，宿存，花單生或 2～3 朵并生，深紅色或絳紫色，直徑 4cm。 刺玫果的開發(fā)前景從上述的刺玫果的藥理作用、營養(yǎng)價值來看，可以知道刺玫果是很有開發(fā)價值的野生果實資源，目前刺玫果正在作為一種天然保健藥物被日益重視和廣泛開發(fā)，市場上已經出現(xiàn)由該果汁為主開發(fā)研制的保健食品及保健飲品；臨床上也已經研制出以刺玫果為原料的注射液及口服液。更主要的是刺玫果的生態(tài)價值，刺玫果屬薔薇科，根粗長且堅硬，根系發(fā)達，抗逆性和適應性極強，刺玫果喜溫暖環(huán)境，又耐寒，能在39℃下安全過冬，南北各地均可栽培，根、花、果實均可入藥?，F(xiàn)在野生刺玫果主要分布于東北及內蒙古、山西等省，其中以黑龍江省最多。由于刺玫果重要的經濟價值，如果要大量的開發(fā)利用刺玫果資源，僅靠野生刺玫果資源是遠遠不夠的，必須進行人工栽培。隨著人們對綠色的認識，該項資源的開發(fā)可望有很好的前景?，F(xiàn)在，黃酮類化合物是泛指兩個苯環(huán)通過三個碳原子相互連接而成的一系列化合物。黃酮類化合物包括：黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、黃烷酮類等。黃酮類化合物是一類生物活性強的化合物,具有降低心肌耗氧量、防治血管硬化等作用，同時也是一種天然抗氧化劑，具有抗衰老、增強機體免疫力、抗癌防癌的功效 [17]。7 / 46 黃酮類化合物的分類根據黃酮類化合物 A 環(huán)和 B 環(huán)中間的三碳鏈的氧化程度、三碳鏈是否構成環(huán)狀結構、3 位是否有羥基取代以及 B 環(huán)連接的位置等特點，將黃酮類化合物分為以下種類：1．黃酮類黃酮類即以2苯基色原酮為基本母核，且3位上無含氧基團取代的化合物。3．二氫黃酮類二氫黃酮類結構可視為是黃酮基本母核的3位雙鍵被氫化而成。5．異黃酮類異黃酮類母核為3苯基色原酮的結構，即B環(huán)連接在C環(huán)的3位上。7．查耳酮類查耳酮類的結構特點是二氫黃酮C環(huán)的2位鍵斷裂生成的開環(huán)衍生物，即三碳鏈不構成環(huán)。9．其它黃酮類 黃酮類化合物的國內外研究進展 提取工藝的研究進展目前，有關國內外研究現(xiàn)狀主要有以下幾種方法，現(xiàn)就各方法做簡單介紹。此工藝成本低，安全，適合于工業(yè)化大生產。2．醇提法高濃度的乙醇(如90%95%)適宜于提取黃酮甙元，60%左右濃度的乙醇適宜于提取黃酮甙類。冷浸法雖不需加熱，但提取時間長，效率低?；亓鞣ㄐ瘦^冷浸法和滲漉法高，但8 / 46含受熱易破壞成分的藥材不宜用此法。稀氫氧化鈉水溶液浸出能力較大，但浸出雜質較多。石灰水的缺點是浸出效果可能不如稀氫氧化鈉水溶液，有些黃酮類化合物能與鈣結合成不溶性物質，不被溶出。4．樹脂法和酶法國外最近采用此法提取工藝，能提高提取物的有效成分的得率及其在體內的吸收效果。濾除銀杏葉，提取液濃縮至一半體積以下，冷卻，析出脂溶性成分。將濾液轉移到填充大孔樹脂（非極性大孔樹脂）柱上，銀杏葉提取物被樹脂吸附，用水洗柱，再用70 %乙醇洗脫被吸附的提取物。將預先干燥并粉碎過的青銀杏葉，用10%30%的乙醇在3060℃加熱回流提取。在不會使酶滅活的溫度（如3060℃）下加熱提取液，進行糖苷轉移反應，也可以用新鮮青銀杏葉的醇提取液直接進行酶化反應制備糖苷提取物。5．超濾法控制超濾膜孔徑大小能有效除去煎液中大分子物質，選用適宜孔徑的超濾膜是提高產品收率和質量的關鍵。超濾技術的主要特點是分離過程無相變化，耗能低，分離率高，藥液溫度14℃和pH=15時提得率高。它和上述提取工藝相比較，具有提取效率高、無溶劑殘留、天然植物中活性成分和熱不穩(wěn)定成分不易被分解破壞等優(yōu)點。因此，在當今人們渴望回歸大自然的潮流中，該提取方法倍受青睞，用超臨界二氧化碳提取銀杏葉黃酮類成分的方法，已受到人們的關注，在歐洲已有專利報道 【15】 。此法是目前中藥精制最常用的方法，優(yōu)點是操作簡單，能有效的去除雜質，獲得較好的澄明度，但可造成藥物（如苷類）有效成分不同程度的損失，而某些水中難溶的成分如多種苷元、黃酮等在水體液中的含量本來就不高，經醇處理后，大部分會沉淀或被沉淀包裹而濾除。2．膜濾膜分離法是以超濾路膜為分離介質，以膜兩側壓差為推動力，將溶液中的混合物分成保留液與通過液兩部分，從而相對分子質量分離組分。缺點是目前膜材料的品種較少，膜孔徑分布較寬，性能不夠穩(wěn)定。3．超速離心超速離心法是通過離心機的高速運轉，使離心加速度超過重力加速度，增加沉降速度，從而加速藥液中雜質沉淀并將其除去的一種方法，具有省時、省力、藥業(yè)回收充分，有效成分含量高、澄明度高等特點，適用于分離含難于沉降過濾的微粒或絮狀物的懸浮液。4．大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂的理化性質穩(wěn)定，不溶與酸、堿及有機溶劑，對有機物的選擇性好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物的影響。它的吸附性能是由于范德華力或生成氫鍵的結果。由于吸附和分子篩的雙重作用，有機化合物可根據吸附力及相對分子質量大小的不同，被吸附樹脂吸附后再經一定溶劑洗脫而被分離 [18]。大孔吸附樹脂色譜常用的洗脫劑包括水、不同濃度的乙醇、甲醇和丙酮等。按照單體與模板分子結合方式的不同，分子烙印技術課可分為共價型、非共價型和半共價型，周力等制備了以10 / 46皮素為模板的分子烙印聚合物，從沙洪粗提物中分離提取皮素和異鼠李素 2 種黃酮，效果良好。6．雙水相提取雙水相提取技術是瑞典 Per Albersson 首先發(fā)現(xiàn)并研究的一種分離技術，由于此技術具有對生物產品穩(wěn)定性好、易放大等優(yōu)點，在生物大分子如蛋白質、核酸和細胞器等產品中得到廣泛應用。張春繡等取一定量的銀杏葉浸提液，25℃加到 PEG1500/磷酸鹽體系雙水相系統(tǒng)中，相比為，則黃酮類化合物進入上相 PEG，從而將黃酮化合物富集分離，提取率可達 %。由于目前對此法的研究較少，對中草藥提取研究尚處于起步階段，此技術的應用有待進一步研究。與有機溶劑法相比，具有提取效率高、無溶劑殘留、活性成分和熱不穩(wěn)定成分不易被分解破壞等優(yōu)點，通過控制溫度和壓力以及調節(jié)改性劑的種類和用量，還可以實現(xiàn)選擇性萃取和分離純化。據夏開元報道，以乙醇和用大孔樹脂提取的銀杏葉精提物，于CO2FE精制前，%，而用CO 2FE精提后，%。因此，在當今人們渴望回歸大自然的潮流中，該提取方法倍受青睞，用超臨界二氧化碳提取銀杏葉黃酮類成分的方法，已受到人們的關注，在歐洲已有專利報道。它是利用某些物質的分子在200～800nm光譜區(qū)的吸光度來進行分析測定的方法。劉逢芹等用此法測定野葛藤總黃酮的含量，測得%。 (2)比色法:研究中，我們常向供試品中加入顯色劑后測定吸光度以測定其含量，這種紫外可見分光光度的方法又稱為比色法。據文獻報道，黃酮類化合物分子中若具有3羥基、5羥基或鄰二酚羥基，則易于與金屬鹽類如鋁鹽、鋯鹽、鍶鹽、鎂鹽等反應，生成有色金屬絡合物，這些絡合物作用在光譜上能產生明顯的變化，吸收峰紅移。Al(NO3)3比色法是一些藥典最常用的總黃酮含量檢測方法，它主要以Al(NO 3)3為顯色劑，在堿性條件下，利用其與黃酮形成紅色螯合物為特征，以蘆丁為對照品，在510nm處測定其吸收度，從而得到待測物質的黃酮含量。%。劉春宇等采用AlCl 3對沙苑子總黃酮的含量進行了測定，得總黃酮含量為 。中草藥的成分十分復雜，在進行黃酮含量測定時要根據具體條件選擇適當方法。郭亞建等曾對Al(NO 3)3比色法的專屬性進行了討論，發(fā)現(xiàn)具有鄰二酚羥基的非黃酮類物質在蘆丁顯色的最大波長處(51