【正文】 降低心血管疾病的發(fā)病率方面，研究和開(kāi)發(fā)富含DHA和EPA的營(yíng)養(yǎng)保健雞蛋具有重大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。本課題通過(guò)向飼料中添加亞麻籽，使DHA和EPA能夠在禽蛋中富集，從而使雞蛋成為繼深海產(chǎn)品之后富含DHA和EPA的產(chǎn)品。黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)碩士學(xué)位論文 第一章 文獻(xiàn)綜述第一章 文獻(xiàn)綜述 多不飽和脂肪酸的命名多不飽和脂肪酸（polyunsatursted fatty acid，PUFA），又稱(chēng)為多烯酸，是一類(lèi)含有2個(gè)及以上雙鍵（C=C），碳原子數(shù)為1622的直鏈脂肪酸。α亞麻酸（αLNA）和亞油酸（LA）分別是ω3和ω6系列脂肪酸的前體，在體內(nèi)經(jīng)過(guò)一系列的碳鏈延長(zhǎng)與脫飽和作用后衍生為其它的多不飽和脂肪酸[6]。ω3，6，9是根據(jù)ω編號(hào)系統(tǒng)來(lái)命名的[7]，將脂肪酸碳鏈的遠(yuǎn)羧基端的甲基碳原子稱(chēng)為ω1碳原子，則前面的碳原子依次稱(chēng)為ωωω4…碳原子。ω3脂肪酸有時(shí)也用n3表示，這兩種命名規(guī)則相同。例如，18：3ω3亞麻酸，指的是它有18個(gè)碳原子，有三個(gè)雙鍵，靠近甲基端的第一個(gè)雙鍵在ω3的位置[8,9]（如圖11所示）。圖11ω3脂肪酸結(jié)構(gòu)圖 DHA和EPA的生物學(xué)功能自1978年Dyerberg發(fā)現(xiàn)愛(ài)斯基摩人攝入大量的深海魚(yú)類(lèi)可以大大降低他們得冠心病、血栓等心腦血管疾病機(jī)率之后，關(guān)于DHA和EPA的研究迅猛發(fā)展，研究者不斷發(fā)現(xiàn)DHA和EPA更多的生物學(xué)功能。血栓素TAX2和前列環(huán)素PGI2之間存在一定的平衡，隨著年齡增長(zhǎng)，前列環(huán)素PGI2合成能力降低，血栓素TAX2量增多，平衡受到破壞。EPA是花生四烯酸的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制花生四烯酸向血栓素和前列環(huán)素轉(zhuǎn)化而生成TXA3和PGI3，TXA3幾乎沒(méi)有生物活性，而PGI3與前列環(huán)素PGI2的生理功能和活性相似，因而減少了血小板凝集并增加了血管舒張作用，使血栓形成減少[10]。因此食用DHA和EPA有助于抑制血小板凝集，防止心肌梗死和腦梗塞的發(fā)生[11]。高血脂是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要致病因素。因此，人體血清中HDL是心腦血管疾病的保護(hù)因子，而LDL則是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的原因之一。Balk等在對(duì)21個(gè)油脂實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)后發(fā)現(xiàn)，不同的魚(yú)油攝入量可改變總甘油三酯、HDL膽固醇和LDL膽固醇水平，但對(duì)魚(yú)油中總膽固醇含量沒(méi)有影響[13]。（3）預(yù)防冠心病膽固醇雖然是細(xì)胞膜的組成部分，在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中是必需的，但是血清中膽固醇含量過(guò)高，會(huì)堆積在冠狀動(dòng)脈血管壁上引起冠心病。當(dāng)膳食中存在DHA和EPA時(shí)，膽固醇便與之結(jié)合形成膽固醇酯，促其形成膽酸而從腸道排出[16,17]。 維護(hù)大腦和視網(wǎng)膜功能 （1）促進(jìn)嬰幼兒大腦和視網(wǎng)膜的發(fā)育ω3脂肪酸在大腦中主要存在于灰質(zhì)部分，是人腦中神經(jīng)細(xì)胞膜的主要脂質(zhì)成分，也是大腦細(xì)胞優(yōu)先吸收利用的脂肪酸成分。DHA在腦細(xì)胞形成過(guò)程中起重要作用，有利于腦細(xì)胞突起的延伸和重新產(chǎn)生。DHA是惟一可以通過(guò)胎盤(pán)的ω3不飽和脂肪酸，可促進(jìn)胎兒腦細(xì)胞分裂，健全胎兒腦組織。在胎兒時(shí)期，從受精卵在母親子宮內(nèi)分裂開(kāi)始就需要DHA，因此，妊娠婦女需外源補(bǔ)充DHA，以確保妊娠后期為胎兒大腦的快速發(fā)育提供充足的脂肪酸。有研究顯示，懷孕期間接受DHA補(bǔ)充的女性，懷孕期較長(zhǎng)，嬰兒出生體重較高。研究表明，DHA有利于嬰兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、視網(wǎng)膜的發(fā)育，智力、認(rèn)知能力和解決問(wèn)題能力的發(fā)育，脈管系統(tǒng)的發(fā)育和免疫系統(tǒng)發(fā)育[22]。在早產(chǎn)兒的體內(nèi)DHA的濃度偏低，需要特別補(bǔ)充DHA，才可使其體內(nèi)DHA濃度回升到正常水平[23]。對(duì)老年人來(lái)講，DHA有防止老年癡呆的作用。如果缺乏DHA，已形成的腦突觸會(huì)逐漸萎縮，腦細(xì)胞間信息的傳遞能力就會(huì)下降，同時(shí)還會(huì)使感觀的功能衰退。另外，隨著年齡的增加，體內(nèi)各種自由基的數(shù)目不斷增多，而谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）及超氧化物歧化酶（SOD）數(shù)量逐漸降低，活性逐漸減弱，因此自由基代謝產(chǎn)物丙二醛（MDA）的生成增多，使細(xì)胞受到損傷，組織器官功能下降。Bartsch（1999）在研究EPA對(duì)小雞腦發(fā)育時(shí)發(fā)現(xiàn)，EPA能迅速在腦中轉(zhuǎn)化成DHA并蓄積，這也說(shuō)明EPA是通過(guò)DHA對(duì)腦發(fā)育起重要作用的物質(zhì)[24]。臨床及實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，ω3不飽和脂肪酸對(duì)癌癥有較好的抑制作用[25]。劉艷（2004）對(duì)DHA和EPA的抗癌機(jī)制進(jìn)行了專(zhuān)門(mén)論述，認(rèn)為其抗癌機(jī)制涉及許多因素，如惡病因子、免疫功能、脂質(zhì)過(guò)氧化等 [26]。腫瘤在體內(nèi)能產(chǎn)生某些促進(jìn)分解代謝的因子，如脂肪動(dòng)員因子和蛋白水解誘導(dǎo)因子，這是各類(lèi)癌癥病人晚期脂肪和骨骼肌肌肉組織大量分解，出現(xiàn)惡病質(zhì)的主要原因。在許多腫瘤組織中，前列腺素的含量明顯高于正常組織。DHA和EPA能夠抑制前列腺素的活性，從而發(fā)揮對(duì)腫瘤的抑制作用。用DHA和EPA喂養(yǎng)小鼠，其實(shí)驗(yàn)性炎癥的水腫程度降低[28]。用DHA和EPA防治某些炎性疾病，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，已取得良好的效果[31]。自20世紀(jì)80年代起，在治療慢性炎癥有效藥物的研究工作中，DHA和EPA已逐漸得到重視。（3）免疫調(diào)節(jié)功能有研究表明[34]，富含DHA和EPA的魚(yú)油可調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)患有免疫性疾病的動(dòng)物模型抵抗內(nèi)毒素的能力，并延長(zhǎng)移植器官的存活時(shí)間。富含DHA和EPA的魚(yú)油飲食可減輕自身抗體介導(dǎo)的疾病的嚴(yán)重程度，和提高動(dòng)物生存能力；而富含ω6型多不飽和脂肪酸的亞油酸食物則增加疾病的嚴(yán)重程度。在實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病中，補(bǔ)充DHA和EPA可加重疾病，補(bǔ)充ω6型多不飽和脂肪酸則阻止或減輕疾病的嚴(yán)重化。長(zhǎng)期堅(jiān)持食用DHA或EPA，可抑制T細(xì)胞的自身激活或過(guò)度激活，也就是可以使炎性、免疫性疾病發(fā)生率下降，健康人群可以通過(guò)補(bǔ)充DHA和EPA來(lái)降低自體免疫性疾病的患病率[36]。還有些臨床研究表明，DHA和EPA對(duì)牛皮癬、多發(fā)性硬化結(jié)節(jié)有療效[38]。 DHA和EPA的來(lái)源深海魚(yú)油是DHA和EPA的重要來(lái)源。但由于魚(yú)油資源有限且價(jià)格高，同時(shí)魚(yú)油中的ω3不飽和脂肪酸的構(gòu)成和含量隨著魚(yú)的種類(lèi)、季節(jié)和地理位置等不同而變化[40]，利用海洋魚(yú)油作為ω3不飽和脂肪酸來(lái)源受到了很大的限制。DHA的另一個(gè)重要來(lái)源是藻油。實(shí)際上很多深海魚(yú)之所以擁有DHA，都是因?yàn)樯詈ｔ~(yú)吃了海藻后在體內(nèi)殘存的。日糧中添加海藻比魚(yú)油更有利，首先能避免魚(yú)油產(chǎn)生的魚(yú)腥味，另外價(jià)格也優(yōu)于魚(yú)油，但不同種類(lèi)的海藻DHA和EPA含量差別很大，即使同一種類(lèi)的不同品系之間也存在很大差別。魚(yú)油產(chǎn)品中的重金屬殘留，尤其是汞殘留問(wèn)題一直受到廣泛關(guān)注。原來(lái)海水中的汞，被海藻類(lèi)等浮游生物吸收后，轉(zhuǎn)變成有機(jī)汞，海魚(yú)采食海藻后，有機(jī)汞在魚(yú)體內(nèi)積累，人再食用了這些魚(yú)類(lèi)，人體內(nèi)的汞毒性是原來(lái)的幾十倍，對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是對(duì)兒童產(chǎn)生破壞作用。早期研究報(bào)道，利用脂微生物來(lái)合成多不飽和脂肪酸是開(kāi)發(fā)新油源的良好途徑[44,45]。α亞麻酸是DHA和EPA的前體，在動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)脫飽和和碳鏈延長(zhǎng)生成DHA和EPA，也是DHA和EPA的主要來(lái)源。亞麻籽也是α亞麻酸的重要來(lái)源，實(shí)際上目前應(yīng)用較廣的就是利用富含α亞麻酸的植物籽（油）生產(chǎn)多不飽和脂肪酸產(chǎn)品[47]。根據(jù)近些年國(guó)內(nèi)外的醫(yī)學(xué)研究和動(dòng)物試驗(yàn)，證實(shí)青少年和嬰幼兒體內(nèi)缺乏“碳鏈加長(zhǎng)酶”和“減飽和化酶”這些酶的幫助，不能把α亞麻酸轉(zhuǎn)化成DHA。因此，直接生產(chǎn)含有DHA和EPA，而不需要轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品，才能夠完全解決DHA和EPA及相關(guān)α亞麻酸轉(zhuǎn)化酶缺乏的問(wèn)題。其中以嬰幼兒配方奶中添加DHA和EPA偏多，牛奶[49]、豆奶[50]及奶片[51]都有所研究。 DHA和EPA肉產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)開(kāi)發(fā)富含多不飽和脂肪酸的肉類(lèi)產(chǎn)品多以雞肉為主，在豬肉[52]和牛羊肉[53]上研究開(kāi)發(fā)的較少。日糧對(duì)體脂的結(jié)構(gòu)影響很大，其飽和、不飽和與多不飽和脂肪酸的結(jié)構(gòu)近似于飼料中的，可能增加雞肉中ω3多不飽和脂肪酸的富集[54]。有研究標(biāo)明，肉雞日糧中添加5%步魚(yú)油可提高肉雞體組織中的ω3多不飽和脂肪酸的總沉積量，但利用魚(yú)油生產(chǎn)的DHA和EPA產(chǎn)品帶有無(wú)法去除的魚(yú)腥味，大大的影響了產(chǎn)品的質(zhì)量。后有研究顯示，給肉雞飼喂亞麻籽后，雞肉中ω3多不飽和脂肪酸及亞油酸的水平都增高了，而油酸的水平降低了[55]，且多不飽和脂肪酸多以磷脂的形式沉積在肌肉中，而不沉積在脂肪組織中，因此長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸只儲(chǔ)存在瘦肉中，另外脂肪酸沉積量與亞麻籽攝入量成正比，說(shuō)明亞麻籽可以作為增加雞肉中多不飽和脂肪酸富集的重要原料加以研究。劉利曉等（2009）研究發(fā)現(xiàn)肉雞日糧中使用亞麻籽油可增加肌肉中ω3不飽和脂肪酸含量，降低n6/n3比值，生產(chǎn)出對(duì)人類(lèi)健康有益的功能性雞肉產(chǎn)品，且5%亞麻籽油添加量較3%添加量效果好[56]。由此認(rèn)為，通過(guò)飼糧中添加不同脂肪酸組成的油脂可生產(chǎn)富含ω3不飽和脂肪酸的雞肉[57]。Naber等（1979） 研究發(fā)現(xiàn)，盡管飼料途徑不可以改變雞蛋中的總蛋白和脂肪的含量，但可以改變雞蛋的脂肪酸組成、礦物質(zhì)和維生素的含量[58]。人。將ω3多不飽和脂肪酸導(dǎo)人雞蛋中，不僅可以解決人類(lèi)ω3多不飽和脂肪酸攝人的不足，同時(shí)還可以降低膽固醇的增脂效應(yīng)，成為有降低血脂作用的保健食品[59]。因此，生產(chǎn)和開(kāi)發(fā)DHA和EPA雞蛋多不飽和脂肪酸產(chǎn)品成近些年的研究熱點(diǎn)。麻麗坤等（2006）分別在蛋雞日糧中添加菜油和魚(yú)油，研究日糧不同水平ω3不飽和脂肪酸在蛋黃中的富集效應(yīng)及對(duì)蛋品質(zhì)的影響，結(jié)果顯示，各試驗(yàn)組ω3不飽和脂肪酸在蛋黃中的沉積量隨魚(yú)油添加時(shí)間延長(zhǎng)而顯著提高，且魚(yú)油效果較菜油效果好[61]。但魚(yú)油價(jià)格昂貴且在雞蛋中產(chǎn)生不可去除的魚(yú)腥味，因此利用其他資源生產(chǎn)多不飽和脂肪酸雞蛋勢(shì)在必行。首先，雖然海魚(yú)油富含ω3不飽和脂肪酸，但由于海魚(yú)油資源有限，只有較大的海魚(yú)才能用來(lái)提取魚(yú)油，這樣造成了魚(yú)油的價(jià)格很高，限制了它作為人類(lèi)健康食品添加劑的使用。第三，魚(yú)油需貯存于20℃條件下，添加魚(yú)油的飼料需現(xiàn)配現(xiàn)用；而魚(yú)油的制備還需經(jīng)蒸餾加熱，在熱處理前需加入抗氧化劑，以防止ω3不飽和脂肪酸的氧化。ω3不飽和脂肪酸含有多個(gè)不飽和鍵，很容易被氧化，產(chǎn)生過(guò)氧化物。即使在冷凍期間，海魚(yú)所含的ω3不飽和脂肪酸仍發(fā)生氧化，氧化物的生成量與貯藏時(shí)間成正比，在18℃冷凍條件下過(guò)氧化物的生成量高于40℃條件下的生成量。因此，當(dāng)海魚(yú)的貯藏加工條件控制不當(dāng)時(shí)，不僅會(huì)導(dǎo)致ω3不飽和脂肪酸損失，所產(chǎn)生的過(guò)氧化物還會(huì)對(duì)人體有害。而且雞蛋中ω3不飽和脂肪酸表現(xiàn)出較高的穩(wěn)定性[62]。關(guān)于雞蛋內(nèi)ω3不飽和脂肪酸之所以穩(wěn)定的機(jī)理有多種解釋。2）在蛋黃低密度脂蛋白的分子外部，蛋白質(zhì)和磷脂構(gòu)成交織結(jié)構(gòu)，使得氧分子不能進(jìn)入低密度脂蛋白分子內(nèi)部，保護(hù)低密度脂蛋白分子內(nèi)部的多不飽和脂肪酸免遭氧化破壞。由于魚(yú)油存在的一些弊端，采用非魚(yú)油添加到飼料中生產(chǎn)富含DHA和EPA雞蛋就顯得十分必要。亞麻籽中含有DHA和EPA的前體α亞麻酸，可以通過(guò)蛋雞采食后，在雞體內(nèi)α亞麻酸酶作用下生成DHA和EPA，并沉積在蛋黃中。 亞麻籽的飼用價(jià)值亞麻亦稱(chēng)胡麻，為一年生草本植物，是世界十大油料作物之一，居世界油料總產(chǎn)量的第7位，也是我國(guó)重要的油料及纖維作物，主產(chǎn)于我國(guó)的山西、內(nèi)蒙古、寧夏、東北等地，居我國(guó)油料總產(chǎn)量的第4位。亞麻籽（linseed）為亞麻的種子，呈扁卵形，前端稍尖銳，表面平滑有光澤，一般為褐色，有堅(jiān)硬的外殼，亞麻籽粗蛋白含量約為22%，主要由白蛋白和球蛋白組成，是飼料中優(yōu)質(zhì)植物蛋白的來(lái)源[64]。亞麻籽含豐富的礦物質(zhì)，鉀含量最高，與維持動(dòng)物體內(nèi)正常血壓有關(guān)；鋅含量也較多，鈣較少，磷較多，一部分以植酸磷的形式存在。脫粒后的碎果皮（亞麻糠）每千克含有20克消化蛋白，也是養(yǎng)豬的好飼料。近十幾年來(lái)，飼料產(chǎn)業(yè)以亞麻籽做為配合飼料，看重的不是它的蛋白質(zhì)，而是它的脂肪性質(zhì)，亞麻籽含豐富的油脂，油脂以不飽和脂肪酸居多，約占92%，其中以α亞麻酸（ALA）為代表的ω3系列多不飽和脂肪酸約占83%[65]，ω6多不飽和亞油酸含量較低，飽和脂肪酸（SFA）含量也低，這是大豆、棉籽、玉米和葵花籽做添加飼料所無(wú)法取代的性質(zhì)。近三十年來(lái)，歐美科學(xué)家研究證明，油用亞麻種子中富含亞麻酸（十八碳三烯酸），而亞麻酸在人體或動(dòng)物體中雖不能自然生成，但人體或動(dòng)物體分泌的一些酶類(lèi)，卻可以將其轉(zhuǎn)化成DHA和EPA。研究發(fā)現(xiàn)，亞麻籽中還含有多種活性成分，如木酚素、亞麻膠等，其中多種成分被證實(shí)有抗癌活性，現(xiàn)在許多國(guó)家將亞麻籽直接加入保健食品或加入動(dòng)物飼料中，提高動(dòng)物產(chǎn)品價(jià)值。所以，亞麻籽在人類(lèi)食品和動(dòng)物飼料中的應(yīng)用有很大的發(fā)展前景。但是未完全成熟的亞麻種子及其所制成的麻籽餅粕中，含有抗?fàn)I養(yǎng)因子，如亞麻籽膠、植酸、變應(yīng)原、生氰糖苷、胰蛋白酶抑制因子、抗維生素B6因子等，特別是其中生氰糖苷的毒性，在動(dòng)物飼料中受到關(guān)注。亞麻籽及其榨油后的餅粕中含有生氰糖甙，主要是亞麻苦甙和少量百脈根甙。所以，不能過(guò)多或長(zhǎng)期飼喂亞麻籽。據(jù)報(bào)道，完全成熟的種子極少或完全不含亞麻苦甙；油用亞麻是用成熟種子作油料，其種子中亞麻苦甙含量較少；纖維用亞麻品種由于其收獲較早，所以其種子中亞麻苦甙較多。一般采用水浸泡，加熱蒸煮的方法，去除生氰糖甙，磨碎或發(fā)酵對(duì)去除氫氰酸也有一定效果。 研究目的與意義亞麻資源的利用過(guò)去多集中在其餅粕上，而對(duì)亞麻籽的應(yīng)用研究較少，這方面的開(kāi)發(fā)潛力很大，有許多研究工作有待完成。我國(guó)亞麻資源豐富，但亞麻籽主要作榨油用，經(jīng)濟(jì)價(jià)值有限，未能引起足夠的重視。若把亞麻籽中的這些生理活性物質(zhì)在藥品、保健品、食品及食品添加劑、飼料等方面開(kāi)發(fā)利用，從中得到經(jīng)濟(jì)價(jià)值、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值較高的保健品和藥用功能性產(chǎn)品，其經(jīng)濟(jì)附加值可大大提高，也會(huì)產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。本研究的主要目的為：（1）在蛋雞飼料中添加不同比例的亞麻籽，探討不同含量亞麻籽對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響；（2）對(duì)雞蛋蛋黃內(nèi)二十二碳六烯酸DHA和二十碳五烯酸EPA含量進(jìn)行測(cè)定，研究不同劑量亞麻籽對(duì)蛋黃中不飽和脂肪酸含量的影響，并確定蛋雞飼料中亞麻籽的最佳添加劑量。脂肪酸甲脂化試劑，購(gòu)自Sigma公司。2℃烘2h，取出，在干燥器中冷卻30min，取出稱(chēng)重，；再置于烘箱中105177。用已恒重的鋁盒中的紙包稱(chēng)取試樣2g左右，不蓋蓋，在105177。遺失的重量即為水分含量。W1 W2W1 W0 水分（%）= 100