【正文】 抗生素指由細(xì)菌、霉菌或其它微生物在生活過(guò)程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類物質(zhì)。在臨床上常用的亦有幾百種。其分類有以下幾種：（一）β內(nèi)酰胺類青霉素類和頭孢菌素類的分子結(jié)構(gòu)中含有β內(nèi)酰胺環(huán)。（二）氨基糖甙類包括鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小諾霉素、阿斯霉素等。（四）氯霉素類包括氯霉素、甲砜霉素等。（六）作用于G+細(xì)菌的其它抗生素，如林可霉素、氯林可霉素、萬(wàn)古霉素、桿菌肽等。（八）抗真菌抗生素如灰黃霉素。（十）具有免疫抑制作用的抗生素如環(huán)孢霉素。有報(bào)道稱，一對(duì)青霉素高度敏感的病人，在食用含抗生素約 10 IU/mL 的商品奶后，發(fā)生了變態(tài)反應(yīng)[3]。 造成人體腸道內(nèi)的菌群失調(diào) 正常情況下，人體內(nèi)的菌群維持在一個(gè)平衡狀態(tài)，但當(dāng)長(zhǎng)期接觸含抗生素殘留的牛奶時(shí)，此種平衡狀態(tài)將會(huì)遭到破壞，引起胃腸疾病和生理紊亂，如造成維生素缺乏和紫癲性損傷。 對(duì)泌乳期奶牛的用藥治療 對(duì)泌乳期奶牛用藥不當(dāng)或不注意安全時(shí)間是造成牛乳中抗生素殘留的重要原因，尤其是采用乳房灌注治療奶牛乳房炎時(shí)，更易造成牛乳中抗生素的殘留。 在飼料中添加抗生素，可有效抑制或殺滅畜體內(nèi)的有害微生物，維持畜體胃腸道微生物的平衡，從而促進(jìn)動(dòng)物的健康，提高其生產(chǎn)性能但是，奶牛如果長(zhǎng)期食用含抗生素的飼料，很容易造成牛奶中抗生素殘留，這也是造成牛奶中抗生素殘留問(wèn)題的一個(gè)重要原因。 在牛奶中加入抗生素防止牛奶腐敗 一些不法交奶戶在高溫季節(jié)為了防止牛奶酸敗，在牛奶中摻雜各種抗生素通過(guò)抑制細(xì)菌生長(zhǎng)以達(dá)到防止牛奶酸敗，保持牛奶品質(zhì)的目的，這也是牛奶中抗生素殘留的一個(gè)重要原因。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）和世界衛(wèi)生健康組織（WHO）早在 1969 年就提出，應(yīng)對(duì)各種動(dòng)物性食品中的抗生素殘留規(guī)定允許標(biāo)準(zhǔn)，并建議在奶牛接受抗生素治療停藥后至少 3d（最好 5～7d）的牛奶不能作為食用奶的原料。我國(guó)雖然也頒布了相關(guān)管理?xiàng)l例，但是由于各種原因牛奶中抗生素殘留問(wèn)題依然十分嚴(yán)重?？梢妵?guó)內(nèi)市場(chǎng)中牛奶抗生素超標(biāo)現(xiàn)象十分嚴(yán)重，應(yīng)引起社會(huì)重視[7]。微生物法具有費(fèi)用低，操作簡(jiǎn)便，可靠性高等特點(diǎn)。目前常用的兩種方法是紙片法（PD法）和TTC 法?？莶輻U菌紙片法只適用于β內(nèi)酰胺類抗生素的檢測(cè)，而嗜熱脂肪桿菌紙片法不僅適用于β內(nèi)酰胺類抗生素的檢測(cè)，他還可檢測(cè)到奶樣中其它抗生素的存在。此方法為向檢樣中加入嗜熱乳酸鏈球菌和 TTC 試劑，通過(guò)觀察顯色狀態(tài)的變化判定檢樣中有無(wú)抗生素存在。相反，如果沒(méi)有抗生素存在，則加入菌液即進(jìn)行增殖，TTC 被還原而顯紅色。目前 TTC 法檢測(cè)的各種抗生素靈敏度如下：、卡那霉素5單位。其與先前的 DelvotestSP相似，但用時(shí)更短，只需培養(yǎng) 2h，對(duì)青霉素的檢測(cè)靈敏度提高到 。 DelvotestP 和DelvoXPress兩種檢測(cè)方法得出以下結(jié)論：DelvoXPress能準(zhǔn)確測(cè)定原料奶中的 β 內(nèi)酰胺類抗生素，可應(yīng)用于農(nóng)場(chǎng)外散裝原料奶的檢測(cè)[11]。 Brilliant Black Reduction Test(亮黑裉色試驗(yàn))是另一種重要的檢測(cè)方法，包括德國(guó)的 AiMAanlytikin Mitch Productionund Vertiebs Aim 和荷蘭的Gist Brocades等。陰性樣品呈黃色，否則呈藍(lán)色。理化檢測(cè)方法的原理是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來(lái)測(cè)定其含量[12]。理化檢測(cè)法具有靈敏度高，可進(jìn)行準(zhǔn)確定性分析（ 給出被測(cè)組分的結(jié)構(gòu)信息）和定量分析能力的優(yōu)點(diǎn)，Takeba等人已經(jīng)成功地使用 HPLC 同時(shí)檢測(cè)出牛奶中三氯苯達(dá)唑及其代謝產(chǎn)物亞砜和砜；Pollmeier更是在十億分之的水平上檢測(cè)出牛奶中的阿維菌素類似物乙酰氨基阿維菌素。最常用的方法為高效液相色譜法和聯(lián)用技術(shù)。通過(guò)引入氣相色譜的理論和技術(shù)，發(fā)展了高分離效能的色譜柱和高靈敏感性的檢測(cè)器，特別適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析，因此，高效液相色譜法成為目前廣泛應(yīng)用的一種抗生素殘留檢測(cè)手段。UVD 是應(yīng)用最早和最廣泛的 HPLC 檢測(cè)器。其靈敏度高，選擇性較好，能滿足殘留分析的一般要求。在許多常規(guī)分析中，HPLC/PDA 是一種簡(jiǎn)便的定性分析方法。它一般集分離、定量和定性于一體，特別適用于確證性分析。樣品平均回收率為 % ～% ，變異系數(shù)在 % ～% 之間，方法檢測(cè)限為 ～；賈薇等建立了一種用 C18 小柱進(jìn)行固相萃取，液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)牛奶中 4 種四環(huán)素類的方法，每毫升牛奶中含四環(huán)素、土霉素及美他環(huán)素為 ，；而 Van Bruiynsvoort則成功運(yùn)用色譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定了牛奶中的鏈霉素和二雙氫鏈霉素。目前GCM S 應(yīng)用較多，而 LCM S 是除 GCM S 之外，又一種集高效分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng)。DelvotestP成型于20世紀(jì)70年代，主要用于檢測(cè)內(nèi)酰胺類抗生素，裝在小型安碚瓶或者微孔板微孔中的瓊脂里，含有用微膠囊包裹的標(biāo)志微生物嗜熱硬脂酸芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus)的芽孢和pH指示劑(溴甲酚紫)，同時(shí)包裝內(nèi)附有一瓶營(yíng)養(yǎng)藥片，檢驗(yàn)時(shí)將營(yíng)養(yǎng)藥片與乳樣同時(shí)放在培養(yǎng)基上，在64e溫度下培養(yǎng)3h，培養(yǎng)基顏色由紫變黃表明抗生素殘留陰性，顏色不變表示陽(yáng)性。DelvotestP已經(jīng)在全世界通用。DelvotestSP的用法基本與DelvotestP相同，只是培養(yǎng)時(shí)間縮短為2h，~。Delvotest MCS是DelvotestSP的微孔板格式，但營(yíng)養(yǎng)試劑已直接加入瓊脂內(nèi)，使用時(shí)無(wú)需再添加營(yíng)養(yǎng)藥片，操作更方便，但保質(zhì)期短，適合于大型檢測(cè)中心使用。在需要檢測(cè)其他種類的抗生素時(shí)，可以選用對(duì)應(yīng)的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。Snap快速檢測(cè)法耗時(shí)9min，結(jié)果重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便，但實(shí)驗(yàn)成本較高。美國(guó)Charm Science公司Charm MRL檢測(cè)法與BetaSTAR檢測(cè)法形式十分相似，在8min內(nèi)可以檢測(cè)到青霉素和頭孢菌素殘留。 本實(shí)驗(yàn)研究的目的與意義牛奶是營(yíng)養(yǎng)最全面的營(yíng)養(yǎng)品 。 經(jīng)常飲用抗生素超標(biāo)的牛奶還會(huì)破壞人體道菌群平衡。牛奶中抗生素殘留問(wèn)題日益受到社會(huì)各界的重視。 保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)國(guó)標(biāo)TTC法和試劑盒法、紙片法檢測(cè)結(jié)果的比較為抗生素殘留快速檢測(cè)方法的補(bǔ)充提供理論依據(jù)。表21 原材料表品種編號(hào)規(guī)格（ml）來(lái)源純牛奶1220市售2220市售3220市售4220市售5220市售6220市售花色奶7280市售8250市售9220市售10280市售11240市售12250市售13220市售 對(duì)照試驗(yàn)樣品的采樣，見表22。（1）脫脂乳：經(jīng)113℃、20min滅菌（2）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：a 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：牛肉膏 NaCL 1000mlpHc 儀器或其他用具：試管，三角瓶，燒杯，量筒，培養(yǎng)基分裝器，天平，牛角匙，高壓滅菌鍋，PH試紙（～），棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。TTC水溶液：稱取1gTTC，溶于5ml滅菌蒸餾水中，裝入褐色瓶?jī)?nèi)與7℃冰箱保存，臨用時(shí)用滅菌蒸餾水以1:5稀釋。 主要儀器和設(shè)備表23 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備生產(chǎn)廠家Hws24型電熱恒溫水浴鍋 上海一恒科技有限公司DHG9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海一恒科技有限公司LRH50生化培養(yǎng)箱上海一恒科技有限公司京制00000249號(hào)電子天平北京