基因工程制藥新版(2)-在線瀏覽
2025-07-13 06:02本頁面
【正文】 接酶 催化單鏈 DNA或 RNA的 5‘磷酸與另一單鏈 DNA或 RNA的 3’羥基之間形成共價(jià)連接。 （二）基因工程載體的必備條件 （ 1）具有有效 運(yùn)載 能力。 （ 3）載體在攜帶目的基因之后，還能夠在宿主體內(nèi)進(jìn)行 自主性復(fù)制 。 （ 5）能夠攜帶大小不同的外源性目的基因。 （ 7）容易控制、安全可靠。 （ 9）應(yīng)具有很強(qiáng)的 啟動(dòng)子 。 （ 11）應(yīng)具有很強(qiáng)的 終止子 ，以便重點(diǎn)克隆外源基因區(qū)段，而不轉(zhuǎn)錄其它無關(guān)基因。 （三）基因工程載體的種類 細(xì)菌質(zhì)粒 真核基因病毒 DNA λ 噬菌體 DNA 單鏈 DNA噬菌體 M13載體 人工質(zhì)粒載體 科斯質(zhì)粒 酵母 人工染色體 其他載體 細(xì)菌質(zhì)粒 （ 1）質(zhì)粒的定義 （ 2）質(zhì)粒的特性 （ 3）質(zhì)粒的分類 （ 4）質(zhì)粒載體的具備條件 （ 5）常用的細(xì)菌質(zhì)粒 （ 1）質(zhì)粒的定義 存在于天然細(xì)菌體內(nèi)的一種獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外的 雙鏈環(huán)狀 DNA，具有 獨(dú)立復(fù)制 的能力，常帶有細(xì)菌的 抗藥基因 。 其遺傳特性屬于 非染色體控制 。 容易在宿主體內(nèi)進(jìn)行 轉(zhuǎn)移和遷移 。能夠賦予宿主額外的遺傳特性： A、編碼產(chǎn)生 抗生素酶 的抗性基因， B、編碼產(chǎn)生 糖酵解酶系 的基因， C、編碼產(chǎn)生 抗重金屬酶 的抗性基因。 ◆ 松弛型（ relaxed plasmid): 復(fù)制不受宿主染色體復(fù)制的 限制可獨(dú)立復(fù)制，在宿主細(xì)胞中拷 貝數(shù)高，宿主細(xì)胞中質(zhì)粒有 10200拷貝 。 質(zhì)粒 DNA的構(gòu)型 三種不同的構(gòu)型： 當(dāng)其兩條核苷酸鏈均保持著完整的環(huán)形結(jié)構(gòu)時(shí)，稱為 共價(jià)閉合環(huán)形 DNA(cccDNA)，這樣的 DNA通常呈現(xiàn)超螺旋的 SC構(gòu)型； 如果兩條多核苷酸鏈中只有一條保持著完整的環(huán)形結(jié)構(gòu)，另一條鏈出現(xiàn)有一至數(shù)個(gè)缺口時(shí)，稱之為 開環(huán) DNA(ocDNA)； 若質(zhì)粒 DNA的雙鏈均發(fā)生斷裂而形成線形分子，則通稱為 L構(gòu)型 。 R質(zhì)粒 可編碼 宿主 A的一種或者數(shù)種抗生素抗性基因，并能夠?qū)⑺鼈?帶到 不存在該質(zhì)粒的另一 宿主 B的體內(nèi)，使得宿主 B也獲得同樣的抗性。 （ 4）質(zhì)粒載體具備條件 質(zhì)粒載體，也稱質(zhì)?？寺≥d體，是指用于實(shí)現(xiàn)基因工程操作的質(zhì)粒。 （ 2）構(gòu)建重組質(zhì)粒之后必須具有 轉(zhuǎn)化功能 。 （ 4）宿主范圍較為單一、無感染性。 AmpR→Amp敏感 (AmpS )、 TetR→Tet 敏感 (TetS). pBR322:人工構(gòu)建重要質(zhì)粒 優(yōu)點(diǎn)：具有較小的分子量． 具有兩種抗生素抗性基因，作為篩選標(biāo)記． 具有高拷貝數(shù)． 是松弛型質(zhì)粒． [B]、 pUC系列質(zhì)粒 由 pBR322和 M13噬菌體構(gòu)建而成的雙鏈質(zhì)粒載體； （ 1） 2674bp； （ 2） 有 ampR和位于 lacZ+ 基因中靠近 5’端多克隆位點(diǎn) (MCS)和 來源于 pBR322質(zhì)粒的復(fù)制起始點(diǎn) （ 3） 大腸桿菌 β 半乳糖苷酶(lacZ)的啟動(dòng)子及其編碼該基因氨基端 α 肽鏈的 DNA序列 ,此結(jié)構(gòu)特稱為 lacZ+基因 ，便于藍(lán)白篩選 pUC質(zhì)粒優(yōu)點(diǎn)： １．具有更小的分子，更高的拷數(shù) ２．適于組織化學(xué)檢測(cè)重組體． [C]、 pGEM3Z質(zhì)粒 含一個(gè) ampR基因和一個(gè)lacZ’編碼基因 。 正選擇顏色標(biāo)記 lacZ’。 [B]、有強(qiáng)大的啟動(dòng)子。 （ 2）已經(jīng)研究的真核基因病毒 DNA [A]、 SV40病毒 DNA [B]、牛乳頭瘤病毒 [C]、 RNA病毒 [D]、昆蟲桿狀病毒 [E]、人痘病毒 DNA [F]、 猴空泡病毒 DNA [G]、 人腺病毒 DNA [H]、 人牛痘病毒 DNA [ I ]、 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 [A]、 SV40病毒 DNA （ A1）、 SV40病毒 DNA的特性 （ A2）、 SV40病毒 DNA的基因組 （ A3）、 SV40病毒 DNA載體的構(gòu)建 （ A4）、 SV40病毒 DNA載體的使用方法 （ A1）、 SV40病毒 DNA的特性 為 環(huán)狀雙螺旋 結(jié)構(gòu)。 SV40病毒有二種表達(dá)方式： （ 1）游離表達(dá)方式， SV40DNA+外源性 DNA，形成重組 DNA，進(jìn)入宿主體內(nèi)，以重組 DNA的方式表達(dá)。 （ A2）、 SV40病毒 DNA的基因組 （ A3）、 SV40病毒 DNA載體的構(gòu)建 （ A4）、 SV40病毒 DNA載體的使用方法 [G]、腺病毒 （ G1）、 腺病毒 DNA載體 （ G2）、 腺病毒 DNA載體的特點(diǎn) λ 噬菌體 DNA （ 1） λ 噬菌體 DNA的特性 （ 2） λ 噬菌體 DNA的改造 （ 3） λ 噬菌體 DNA的體外包裝 （ 4） λ 噬菌體載體的構(gòu)建 （ 5） λ 噬菌體載體的使用 （ 6） λ 噬菌體載體的優(yōu)點(diǎn) （ 1） λ 噬菌體 DNA的特性 λ 噬菌體 DNA為 雙鏈的 DNA病毒 ，宿主是大腸桿菌。 [A]、 λ 噬菌體 DNA在宿主體內(nèi)的生活方式 [B]、 λ 噬菌體 DNA的結(jié)構(gòu) [A]、 λ 噬菌體 DNA在宿主體內(nèi)的生活方式 （ 1）溶源方式 ： λ噬菌
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