【正文】 設備，但可根據(jù)具體情況有所不同： 1) 全套防護服（連體防護服、手套和頭套 —— 用于涉及危險度 3 級和 4 級微生物的事故） 2) 帶有能有效防護化學物質和顆粒的濾毒罐的全面罩式防毒面具（ fullface respirator） 3) 房間消毒設備，如噴霧器和甲醛熏蒸器 4) 擔架 5) 工具，如錘子、斧子、扳手、螺絲刀、梯子和繩子 6) 劃分危險區(qū)域界限的器材和警告標示。 實驗室生物安全技術 實驗室傷害以及與工作有關的感染主要是由于人為失誤﹑ 不良實驗技術以及儀器使用不當造成的。 實驗室中標本的安全操作 實驗室標本的收集、運輸和處理不當，會帶來使相關人員感染的危險。標本容器應當堅固，正確地用蓋子或塞子蓋好后應無泄漏。容器上應當正確地粘貼標簽以便于識別。 標本在設施內的傳遞 為了避免意外泄漏或溢出，應當使用盒子等二級容器，并將其固定在架子上使 裝有標本的容器保持直立。密封口最好有一個墊圈，要定期清除污染。 打開包裝 接收和打開標本的人員應當了解標本對身體健康的潛在危害，并接受過如何采用標準防護方法 [3] 的培訓，尤其是處理破碎或泄漏的容器時更應如此。 移液管和移液輔助器的使用 應使用移液輔助器，嚴禁用口吸取。 不能向含有感染性物質的溶液中吹入氣體。 不能將液體從移液管內用力吹出。 污染的移液管應該完全浸泡在盛有適當消毒液的防碎容器中。 盛放廢棄移液管的容器不能放在外面，應當放在生物安全柜內。 在打開隔膜封口的瓶子時，應使用可以使用移液管的 工具， 而避免使用皮下注射針頭和注射器。 避免感染性物質的擴散 為了避免被接種物灑落，微生物接種環(huán)的直徑應為 2～ 3mm 并完全封閉，柄的長度應小于 6cm 以減小抖動。最好使用不需要再進行消毒的一次性接種環(huán)。 準備高壓滅菌和／或將被處理的廢 棄標本和培養(yǎng)物應當放置在防漏的容器內（如實驗室廢棄物袋）。 在每一階段工作結束后，必須采用適當?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的污染。 生物安全柜的使用 應參考國家標準和相關文獻，對所有可能的使用者都介紹生物安全柜的使用方法和局限性（參見第 10 章）。特別需要明確的是，當出現(xiàn)溢出﹑破損或不良操作時，安全柜就不再能保護操作者。 生物安全柜在使 用中不能打開玻璃觀察擋板。 安全柜內不能使用本生燈，否則燃燒產生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器。 所有工作必須在工作臺面的中后部進行，并能夠通過玻璃觀察擋板看到。 操作者不應反復移出和伸進手臂以免干擾氣流。 工作完成后以 及每天下班前，應使用適當?shù)南緞ι锇踩竦谋砻孢M行擦拭。 1在生物安全柜內操作時，不能進行文字工作。 避免感染性物質的食入以及與皮膚和眼睛的接觸 微生物操作中釋放的較大粒子和液滴（直徑大于 5μ m） 會迅速沉降到工作臺面和操作者的手上。 不能在實驗室內飲食和儲存食品。 不應在實驗室化妝。 避免感染性物質的注入 通過認真練習和仔細操作，可以避免破損玻璃器皿的刺傷所引起的接種感染。 銳器損傷（如通過皮下注射針頭、巴斯德玻璃吸管以及破碎的玻璃）可能引起意外注入感染性物質。 不要重新給用過的注射器針頭戴護套。 應當用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。 操作時應戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置。血液和血清應當小心吸取，而不能傾倒。 移液管使用后應完全浸入適當?shù)南疽褐小? 帶有血凝塊等的廢棄標本 管，在加蓋后應當放在適當?shù)姆缆┤萜鲀雀邏簻缇停蚍贌? 離心機的使用 在使用實驗室離心機時，儀器良好的機械性能是保障微生物安全的前提條件。 離心機放置的高度應當使小個子工作人員也能夠看到離心機內部，以正確放置十字軸和離心桶。 用于離心的試管和標本容器應當始終牢固蓋緊（最好使用螺旋 蓋）。 離心桶和十字軸應按重量配對，并在裝載離心管后正確平衡。 空離心桶應當用蒸餾水或乙醇（異丙醇， 70％）來平衡。 對于危險度 3 級和 4 級的微生物，必須使用可封口的離心桶（安全杯）。 1應當每天檢查 離心機內轉子部位的腔壁是否被污染或弄臟。 1應當每天檢查離心轉子和離心桶是否有腐蝕或細微裂痕。 1使用后應當將離心桶倒置存放使平衡液流干。如果將離心機放置在傳統(tǒng)的前開式的Ⅰ級或Ⅱ級生物安全柜內，這些粒子由于運動過快而不能被安全柜內的氣流截留。但是，良好的離心操作技術和牢固加蓋的離心管可以 提供足夠的保護，以防止感染性氣溶膠和可擴散粒子的產生。使用實驗室專用攪拌器和消化器更為安全。蓋子應能封蓋嚴密，襯墊也應處于正常狀態(tài)。由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質并傷害操作者，建議使用塑料容器，尤其是聚四氟乙烯（ polytetrafluoroethylene， PTFE）容器。可能的話，這些儀器可在生物安全柜內覆蓋塑料罩進行操作。 應對使用超聲處理器的人員提供聽力保護。塑料（聚四氟乙烯）研磨器更加安全。 冰箱與冰柜的維護和使用 冰箱、低溫冰箱和干冰柜應當定期除霜和清潔，應清理 出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。 儲存在冰箱內的所有容器應當清楚地標明內裝物品的科學名稱、儲存日期和儲存者的姓名。 應當保存一份凍存物品的清單。冰箱門上應注明這一點。安瓿應該在生物安全柜內打開，建議按下列步驟打開安瓿 ： 首先清除安瓿外表面的污染。 用一團酒精浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手，然后手持安瓿從標記的銼痕處打開。 如果塞子仍然在安瓿上，用消毒鑷子除去。 裝有感染性物質安瓿的儲存 裝有感染性物質的安瓿不能浸入液氮中，因為這樣會造成有裂痕或密封不嚴的安瓿在取出時破碎或爆炸。 此外，感染性物質應儲存在低溫冰箱或干冰中。 以這種方式儲存的安瓿在取出時應對外表面進行消毒。 標本的收集、標記和運輸 始終遵循標準防護方法 [2]；所有操作均要戴手套。 在靜脈抽血時，應當使用一次性的安全真空采血管取代傳統(tǒng)的針頭和注射器 ，因為這樣可以使血液直接采集到帶塞的運輸管和／或培養(yǎng)管中。 裝有標本的試管應置于適當容器中運至實驗室（運輸要求見第 15 章）， 在實驗室內部轉運也應這樣（見本章關于“在設施內轉移標本”部分）。 接收人員不應打開這些袋子。 必須戴手套， 并建議對眼睛和黏膜進行保護（ 護目鏡或面罩）。 打開標本管時，應用紙或紗布抓住塞子以防止噴濺。只能用實驗室級別（硼硅酸鹽）的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應丟棄。 用于顯微鏡觀察的蓋玻片和涂片 用于顯微鏡觀察的血液、唾液和糞便標本在固定和染色時，不必殺死涂片上的所有微生物和病毒。 自動化儀器（超聲處理器、渦旋混合器） 為了避免液滴和氣溶膠的擴散，這些儀器應采用封閉型的。 在每一步完成后應根據(jù)操作指南對儀器進行消毒。 應當避免冰凍切片。清除污染時，儀器的溫度要升至 20℃。一般情況可使用新鮮配制的含有效氯 1g/L 的次氯酸鹽溶液，處理溢出的血液時，有效氯濃度應達到 5g/L 。 對可能含有朊蛋白物質的防護 朊蛋白（ prion，也稱作為“慢病毒” ）與許多疾病相關，包括某些傳染性海綿狀腦?。?transmissible spongiform encephalopathies， TSEs）、克雅病（ CreutzfeldtJakob disease， CJD ；包括新的變異型）、格 施 沙綜合征（ GerstmannStr228。盡 管克雅病已經傳播到了人類，但是還沒有證據(jù)證實發(fā)生過由這些病原體所引起的實驗室感染。 當進行與傳染性海綿狀腦病有關材料的工作時，應根據(jù)微生物因子和所研究標本的特征來選擇生物安全水平，并向國內權威機構咨詢后進行。最近的研究表明，舌和骨骼肌組織也存在潛在朊蛋白感染的危險 [2124]。 主要應該預防的是避免污染材料的食入或實驗室工作人員的皮膚刺傷。 必須穿戴一次性防護服（隔離衣和圍裙）和手套（對病理學家而言，要在兩層橡膠手套間戴鋼絲網(wǎng)手套）。 由于滅菌的問題不能使用組織處理機（ tissue processors）， 應當使用廣口瓶 或燒杯（塑料材質）替代。 必須特別小心以避免產生氣溶膠、意外食入、劃傷或刺傷皮膚。 含有朊蛋白的組織標本暴露于 96%甲酸 1 h 可以基本失活 [24, 25]。 鋼絲網(wǎng)手套或 Kevlar 手套等非一次性用具，均必須 收集起來清除污染。 1多聚甲醛熏蒸的方法不能降低朊蛋白的滴度，朊蛋白對紫外線照射也具有抵抗力。 1朊蛋白污染的生物安全柜和其他表面可以采用含 20g/L（ 2%） 有效氯的次氯酸鈉處理1 h 來清除污染。在焚燒之前推薦進行下述處理： a. 在摘除前用噴漆噴頭給過濾 器的裸露表面噴霧， b. 在摘除過程中將過濾器“裝袋”，以及 c. 從工作柜中除去 HEPA過濾器，這樣可以不污染難以操作的安全柜壓力排風系統(tǒng)。 1不能高壓滅菌的用具可以反復用含 20g/L（ 2%）有效氯的次氯酸鈉潤濕超過 1h 來進行清潔，并要求用水沖洗以清除殘留的次氯酸鈉。 生物安全培訓規(guī)劃 斷進行崗位安全教育對于維持實驗室工作人員和后勤保障人 員的安全意識是很重要的。生物安全培訓（實際上即所有的安全和衛(wèi)生培訓）的效果取決于管理實施、激勵性因素、充分的上崗培訓、良好的溝通和最終的組織目標。這一過程包括確定相關的任務、重要性等級（以發(fā)生頻率、危害程度以及復雜性來表示）以及完成這些任務的必要步驟等細節(jié)。最令人滿意的情況是，期望受培訓者在進行培訓之后，能在工作中加以應用。 規(guī)定培訓的內容和方法。通常由那些對工作和相關要求最為了解的人員來確定生物安全培訓規(guī)劃的內容。還不能確定某種教學方法（專題講座、廣播介紹、計算機輔助教學、交互式影像方式等）是否會比另一種更好，教學方法的好壞很大程度上取決于特定的培訓需要、培訓對象的構成等。有效的培訓一定要考慮 培訓對象的特點。關于培訓規(guī)劃能否提高受培訓者的操作技能和個人安全水平，這可能取決于培訓所采用的方法。工作人員如有特別要求時也應提出，例如對聽力缺陷人員的課程調整。 針對不同的學習要求。例如，如果培訓的目的是要提高解決問題的能力，那么在教育中就應該強調思維／推理而并非死記硬背，應該要求培養(yǎng)創(chuàng)造性的行為和／或相應的反饋（肯定／正確／可 *）能力。 培訓評估。培訓評估通常包括下列四種方式： 考核培訓對象對所培訓內容的記憶和 /或操作執(zhí)行情況 按培訓機構的目的或目標來考查是否已有明確的 效果。僅考慮培訓對象對所進行培訓的反應是一種最不有效的評估方法，因為這種反應與培訓對象對培訓內容的實際掌握程度之間可能沒有關系，它也不應作為評估培訓效果的唯一指標。由于衡量結果的標準多種多樣，因此對培訓效果的評估很難表明培訓規(guī)劃究竟是完全成功還是徹底失敗。培訓所造成的知識或能力上的不同或差異，可能提示是否需要更長的培訓時間、采用其他的培訓方法或聘請更有能力的教師 。 實驗室廢棄物處理 （一）感染性生物材料 實驗室應有盛裝廢棄物的容器，最好是防碎裂的，里面盛裝適宜的消毒液，消毒液使用時新鮮配制。盛裝廢棄物的罐子在再次使用前應高壓并洗凈。高壓后，這些材料可放到運輸容器里以備運輸至焚燒爐。 焚燒是處理污染物（包括宰殺后的實驗動物）的終末最后步驟，污染物的焚燒必須取得公共衛(wèi)生機構和環(huán)衛(wèi)部門的批準，也要得到實驗室生物安全員的批準。 （三）有毒、有害化學物品 1．強酸、強堿 等化學物品必須經過中和反應后，消除其腐蝕性，方可廢棄； 2．其它的液體廢棄物必須經過足夠的稀釋后，對環(huán)境與人體無害后，方可廢棄； 3．其中含有有毒、有害化學物品的試驗材料在使用后應置于帶有明顯危險標志的容器內，送至指定地點統(tǒng)一處理。 （五）一般垃圾 無生物或化學毒害的紙類、玻璃碎片等，應配合后勤工作放入分類 容器進行資源回收。 2．完整的注射器應裝在防刺透利器盒里，并且不能裝滿，當裝至容積的四分之三時就應放入“感染性材料”容器里拿去焚燒。 4．一次性注射器應該放入容器里焚燒，必要時要先高壓后焚燒。 2 范圍 適用于檢驗科細菌室細菌培養(yǎng)、及消毒處理 3 程序 可疑高致病菌的上報 高致病性細菌，實驗室 感染機會多，感染后發(fā)病的可能性大，缺乏有效的預防方法，對人群危害較大的傳染病菌種。一類主要包括：鼠疫耶爾森菌、霍亂弧菌；天花病毒、黃熱病毒、新疆出血熱病毒、東西方馬腦炎病毒等。 細菌室在日常工作中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物為高致病菌，立刻電話報告感染控制科。 檢驗科實驗室污染及安全事故應急處置預案 一、目的 為了有效的預防實驗室污染，有效的應對實驗室突發(fā)污染事件，保證實驗結果的科學準確，保障實驗工作人員的健康、生命安全和國家財產，防止和杜絕實驗室污染對周圍環(huán)境造成嚴重污染，為了加強檢驗工作的質量控制和實驗室的管理，特制定本預案，確保一旦發(fā)生實驗室污染事件及安全事故時，能及時