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2025-06-20 18:39本頁面
【正文】 凝膠中有重疊帶 2）特異 cDNA片段太短（ 110bp450bp)，得不到雜交信號 3） cDNA產(chǎn)物的質(zhì)量往往較低，在凝膠上 呈現(xiàn) smear狀態(tài) 4）得到的特異性的 cDNA 片段非翻譯序列 （ 3 ‘端 UTR，保守， Northern 雜交易出現(xiàn)假陽性） ，利用 GeneBank進行數(shù)據(jù)分析不利 5）檢測全部 mRNA的工作量很大（ T12MN 與 20種隨機引物組合 240次 PCR)三、 mRNA差別顯示技術(shù)的優(yōu)缺點n 技術(shù)的改進n 1)連接酶介導(dǎo) PCR法（ ligation linked PCR ) T12MN與 T7啟動子引物n 2)cDNA親合捕獲法n 32P dCTP取代 dCTPn 3）點雜交篩選法 TA克隆法n TA克隆載體n Taq DNA聚合 酶 具有一種非模板依 賴 性活性， 這 種活性可以在 PCR產(chǎn) 物的 3’ 端加上一個非配 對 的脫氧腺 嘌 呤核苷（ A）。 三、 mRNA差別顯示技術(shù)的優(yōu)缺點n 技術(shù)的改進n 4） 隨機引物法n 5） 簡化錨定引物法 GT12A、 GT12G、 GT12C 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 研究植物不同分化發(fā)育階段的基因表達差異n Vielle、 Calzada 、 Nuccion 狼尾草的有性生殖與無融合生殖的子房n 2個錨定引物， 20個隨機引物n 2268個 cDNA， 3個基因在有性生殖的子房中特異性的表達 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用基因的鑒定與克隆水稻的赤霉素調(diào)節(jié)基因 赤霉素處理的水稻：誘導(dǎo) 不誘導(dǎo) mRNA的表達量相差 10倍 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 研究激素對植物發(fā)育的影響n 婁沂春水稻葉綠體 ATP合成酶受赤霉素誘導(dǎo)的差別表達基因，證明了赤霉素誘導(dǎo)水稻產(chǎn)生生理發(fā)應(yīng)過程涉及了葉綠體基因表達 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 植物抗逆性機理的研究n 抗病蟲基因n 鹽脅迫n 高低溫脅迫 四、 mRNA差別顯示技術(shù)的應(yīng)用n 在營養(yǎng)學(xué)中的應(yīng)用 營養(yǎng)物質(zhì)的作用與基因調(diào)空有關(guān)，當(dāng)某種營養(yǎng)缺乏或過多時，在分子水平上就表現(xiàn)為某個或某些基因的開啟、關(guān)閉或表達量的變化。由此可以保存優(yōu)異的基因型，固定雜種優(yōu)勢，并可能使一些重要的作物實現(xiàn) “ 一系法 ” 育種；如果無融合生殖被很好地利用，它將是二十世紀六十年代 “ 綠色革命 ” 之后的又一次農(nóng)業(yè)革命 — 無性生殖革命 。我們通過栽培甜菜（Beta vulgaris L.） 與白花甜菜（ Zoss） 遠緣雜交獲得了真實雜種，經(jīng)遺傳回交獲得了帶有白花甜菜染色體的完整單體附加系系列，并且通過單體附加系傳遞研究，篩選出近 100%高頻率傳遞的單體附加系 M14品系。 甜菜單體附加系 M14品系 ( VV+1C, 2n = 19 = 18+1, 箭頭所指為附加的白花甜菜染色體 )五、 mRNA差別顯示在甜菜無融合生殖基因克隆研究中的應(yīng)用n 采用 mRNA差異顯示技術(shù)比較甜菜無融合生殖系及正常進行有性生殖的二倍體栽培植株在無融合生殖基因表達的三個關(guān)鍵時期，即大孢子母細胞減數(shù)分裂期、助細胞提前退化期、次生核自行分裂期 mRNA的差異，是進行克隆無融合生殖相關(guān)基因的比較有效的方法 五、 mRNA差別顯示在甜菜無融合生殖基因克隆研究中的應(yīng)用n 對總 RNA進行逆轉(zhuǎn) 錄 反應(yīng)，合成 cDNA第一鏈 。 （ 3）制備 2X反應(yīng)混合液，放置冰上，體系如下： DEPC
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