分子生物學(xué)講座ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 18:09本頁(yè)面
【正文】 成噬菌體頭、尾和尾絲所需的各種蛋白質(zhì)， λDNA經(jīng)多次復(fù)制合成許多子代 λDNA， 于是裝配成許多子代的 λ噬菌體，最后裂菌，釋放出許多新的 λ噬菌體。② 溶原性方式（ lysogenic pathway）： 進(jìn)入細(xì)菌的λDNA可整合 (integrate） 入細(xì)菌的染色質(zhì) DNA中，隨細(xì)菌染色體 DNA復(fù)制，傳給細(xì)菌后代，這個(gè)穩(wěn)定潛伏在細(xì)菌染色質(zhì) DNA中的 λDNA稱為原噬菌體(prophage)， 含有原噬菌體的細(xì)菌稱為溶源菌(lysogen)。 基因組λ噬菌體整個(gè)基因組可分為三個(gè)部分：① 左臂 ：長(zhǎng)約 20kb， 編碼構(gòu)成頭部、尾部、尾絲對(duì)組裝完整噬菌體所需要的蛋白質(zhì)。③ 右臂 ：長(zhǎng)約 10kb， 是調(diào)控區(qū)，控制溶菌和溶原生長(zhǎng)最重要的調(diào)控基因和序列、以及 λDNA復(fù)制起始均在這區(qū)域內(nèi)。在中段插入外源基因不影響它的增殖，這是作為載體的基礎(chǔ)。 目的基因的獲得178。 目的基因的轉(zhuǎn)化178。246。 PCR擴(kuò)增246。 如果這個(gè)文庫(kù)足夠大，能包含該生物基因組 DNA全部的序列，就是該生物完整的基因組文庫(kù)，能從這文庫(kù)中釣取該生物的全部基因或 DNA序列?；蚪M含有的基因在特定的組織細(xì)胞中只有一部分表達(dá)，而且處在不同環(huán)境條件、不同分化時(shí)期的細(xì)胞其基因表達(dá)的種類和強(qiáng)度也不盡相同，所以 cDNA文庫(kù)具有組織細(xì)胞特異性。但對(duì)真核細(xì)胞來說，從基因組 DNA文庫(kù)獲得的基因與從 cDNA文庫(kù)獲得的不同，基因組 DNA文庫(kù)所含的是帶有含子和外顯子的基因組基因，而從 cDNA文庫(kù)中獲得的是已經(jīng)過剪接、去除了內(nèi)含子的 cDNA。 PCR反應(yīng)系統(tǒng)包括：168。 對(duì)熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶168。 4種三磷酸脫氧核苷168。但隨意合成的 DNA絕大多數(shù)肯定不具有生物功能或無法知道它會(huì)有什么功能的，因而只能模仿自然界生物中已知的基因序列來合成，而化學(xué)合成這樣長(zhǎng)的基因 DNA序列，其價(jià)格遠(yuǎn)高于用 PCR法獲得基因，所以目前很少全部用化學(xué)方法去合成基因。第四節(jié) 目的基因和載體的連接 將目的基因或序列插入載體，主要靠 DNA連接酶。一、粘性末端連接 如果目的序列兩端有與載體上相同的限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)，則同一限制酶切開產(chǎn)生的粘末端，在降低溫度退火時(shí)，能重新互補(bǔ)結(jié)合，在DNA連接酶催化下，目的序列就與載體 DNA鏈相連接。 如果在連接的兩個(gè) DNA片段沒有能互補(bǔ)的粘性末端，可用末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化脫氧單核苷酸添加 DNA的 3’末端，例如一股 DNA3’端加上 polyG， 另一股 DNA3’端 加上 polyC， 人工在 DNA兩端做出能互補(bǔ)的核苷酸多聚物粘性末端，退火后能連接，稱為同聚物加尾法。 GGGGGCCCCC5`5`
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