分子生物學(xué)課件cha-在線瀏覽
2025-03-07 00:54本頁面
【正文】 /2) of any genome DNA C0t(1/2) of DNA Kiic Complexity of any genome DNA Kiic Complexity of . 與 Cot(1/2)值呈正比 . 與 Cot(1/2)值呈正比 ? poly(A ) . = 1 。 Cot(1/2) = 比例常數(shù) K ≈ 106 / = 5 10 5 ? DNA . = 106 bp 。 Kohne 1968) 參與復(fù)性的組分是單質(zhì)的 / 6 t/C0= Cot (1/6) 2 / 6 t/C0= Cot (5/6) ● 真核生物復(fù)性動力學(xué)研究 C0 t 1 / 6 C/C0= Cot(1/6) 102 Calf thymus DNA 含有兩個以上的 . 不同的組分 5 / 6 C/C0= Cot(5/6) Ct/C0 6 1 0 5／ 6 1／ 6 3／ 6 10－ 2 DNA 3000 40% 60% 103 Calf thymus DNA C0t(1/2) 值矯正 40% = 60% 3000 = 1800 C0t(1/2) of DNA = 6 Kiic Complexity of = 106 C0t(1/2) of any genome DNA C0t(1/2) of DNA Kiic Complexity of any genome DNA Kiic Complexity of 60%DNA的總長度 = 單一序列的 Kiic plexity X = 108 bp 40%DNA 的總長度 (chemical plexity) 108 bp 4/6 = 108 bp 1800 X 6 106 = 40%DNA中單一序列的 Kiic plexity 40%DNA序列中單一序列的重復(fù)次數(shù)（ F） Y 6 106 = Y = 9200 bp Repetitive frequency = / = 108 bp / 9200 bp = 100,000 copies 40%DNA 的總長度 (chemical plexity) = 1800 5 105 bp = 9 105 bp 9 105 bp 4/6 = 6 108 bp 60%DNA的總長度 = 單一序列的 Kiic plexity C0t(1/2) 值矯正 40% = 60% 3000 = 1800 .= K Cot(1/2) 40%DNA中單一序列的 Kiic plexity 40%DNA序列中單一序列的重復(fù)次數(shù)（ F） Repetitive frequency = / = 6 108 bp / 6000 bp = 100,000 copies Y = 5 105 bp = 6000bp C0t(1/2) 值矯正 40% = 60% 3000 = 1800 重復(fù)序列復(fù)性的相對性 94℃ Renature at low C0t(1/2) Hydroxyapatite column 高度重復(fù)的. DNA Tm低于該部分天然 DNA值 Renature at middle C0t(1/2) How? Renature at high C0t(1/2) 單一序列的 Tm幾乎 接近該部分天然 DNA值 中度重復(fù)的. DNA Tm稍 低于該部分天然 DNA值 ? Tm接近天然 Tm Tm低于天然 Tm 單一序列的 復(fù)性 . DNA 復(fù)性 . DNA 重復(fù)序列的 高 C0t(1/2) 低 C0t(1/2) 結(jié)果表明： a) Nonrepetitive . DNA Renatured by exactly pairing b) Repetitive . DNA More renatured by partially pairing More inexactly pairing and mispairing 天然 DNA與復(fù)性 DNA之間比較 ? Tm相差 1－ ，預(yù)計約有 1％的堿基錯配 部分配對，錯誤配對愈多，變性時 Tm 值愈低 PCR, 分子雜交中，雜交溫度（ 復(fù)性 ）一般為 Tm － (25 ~ 30℃ ) = 55 ~ 65℃ 高于 55~65℃ ，為高嚴謹雜交條件 （用于單一序列探針） 低于 55~65℃ ， 為低嚴謹雜交條件 （用于重復(fù)序列探針） Why ? 利用水稻基因的探針與玉米根尖染色體細胞學(xué)制片進行原位分子雜交時 (FISH)，使用玉米 C0t DNA進行預(yù)雜交，結(jié)果發(fā)現(xiàn) ： 玉米 DNAC0t值分別為 10，50， 100 時的雜交效果不同，為什么？ C0t = 10 C0t = 50 C0t = 100 . 重復(fù)序列分類 a) 高度重復(fù)序列 ( High repetitive sequence) Microsatellite DNA 210 bp / copy 105106 copies / genome C0t(1/2) 多為串聯(lián)重復(fù)排列 分布于著絲點 , 端粒區(qū) , 結(jié)構(gòu)基因兩側(cè) heterochromatin 550 copies / genome Minisatellite DNA ( Variable number tandem repeats . VNTR ) 104 bp fragment CsCl gradient centrifugation Sequence in satellite DNA Sea crab 2 ATATAT….. Drosophila 5 ATAATATAAT….. Mouse 9 GAAAAATGAGAAAAATGA bp of repeat unit sequence Prokaryote Eukaryote (GC%) 42 41 34 55 MOUSE CALF 高度重復(fù)序列（ microsatellite） 不 編碼 結(jié)構(gòu)基因 （功能？） 無選擇壓力
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