分子生物學(xué)講座ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-09 18:09本頁(yè)面
【正文】 NA， 可先連上人工設(shè)計(jì)合成的脫氧寡核苷酸雙鏈接頭，使 DNA末端產(chǎn)生新的限制內(nèi)切酶位點(diǎn)，經(jīng)內(nèi)切酶割后，即可按粘性末端相連。 不同的限制性內(nèi)切酶切，如果產(chǎn)生的 DNA的粘末端相同（同尾酶），也可用此法連接。有以下主要的方式。但人工設(shè)計(jì)化學(xué)合成核酸片段作為引物、接頭等已經(jīng)成為分子生物學(xué)和基因工程中必不可少而且十分重要的手段 。 保證聚合酶催化反應(yīng)的緩沖液（ 4）人工化學(xué)合成現(xiàn)在計(jì)算機(jī)控制的全自動(dòng)核酸合成儀已被廣泛應(yīng)用，按人們?cè)O(shè)計(jì)好的序列一次合成 100200bp長(zhǎng)的 DNA片段已不成問(wèn)題。 一對(duì)寡核苷酸引物168。 含有目的基因的 DNA模板168。（ 3）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR） 如果已經(jīng)知道目的基因的序列，就能很方便地用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ polymerase chain reaction， PCR）， 從基因組 DNA或 cDNA中獲得目的基因，可不必要經(jīng)過(guò)復(fù)雜的 DNA文庫(kù)構(gòu)建過(guò)程。 cDNA文庫(kù)顯然比基因組 DNA文庫(kù)小得多，能夠比較容易從中篩選克隆得細(xì)胞特異表達(dá)的基因?；蚪M DNA酶切（ 2） cDNA文庫(kù) 提出細(xì)胞的全部 mRNA， 在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA， 與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA， 并能繁殖擴(kuò)增，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的 cDNA克隆集合稱為該組織細(xì)胞的cDNA文庫(kù)。 化學(xué)合成得到目的基因的主要方法（ 1）基因組 DNA文庫(kù) 從細(xì)胞中提取出全部 DNA， 用物理方法（超聲波等）或酶法（內(nèi)切酶不完全酶解）將 DNA降解成大小不等的片段，然后將這些片段與適當(dāng)?shù)妮d體連接，轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，這樣每一個(gè)細(xì)胞接受了含有一個(gè)基因組 DNA片段與載體連接的重組 DNA分子，而且可以繁殖擴(kuò)增，許多細(xì)胞一起組成一個(gè)含有基因組各 DNA片段克隆的集合體，就稱為基因組 DNA文庫(kù)（ genomic DNA library）。 篩選文庫(kù)246。 目的基因的表達(dá)第三節(jié) 目的基因的獲取目的基因的概念 符合人們要求的 DNA片段，被稱為目的基因。 目的基因和載體連接178。應(yīng)用作為載體，但天然不行，需要改造一般地，基因工程操作可以分為四個(gè)步驟178。左右臂是必需的，中段是非必需的 。② 中段 ：長(zhǎng)約 20kb， 是 λDNA整合和切出，溶原生長(zhǎng)所需的序列。 λDNA的整合是可逆的，原噬菌體可從宿主 DNA中切出，進(jìn)入溶菌性方式的繁殖。170。170。λ噬菌體感染時(shí)，通過(guò)尾管將基因組 DNA注入大腸桿菌，而將其蛋白質(zhì)外殼留在菌外。 λ噬菌體由頭和尾構(gòu)成， DNA裝在頭部蛋白質(zhì)外殼的里面 。二、噬菌體載體結(jié)
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1