【正文】 elF4E/elF4G/elF4A/elF4B/PAB ?核蛋白體大亞基結(jié)合 IF2(GTP)促進(jìn)三種 IF釋放 ?核蛋白體大亞基結(jié)合 elF5/GTP促進(jìn)各種 elF釋放 肽鏈合成延長(zhǎng) 核蛋白體循環(huán) 進(jìn)位、成肽、轉(zhuǎn)位 每次循環(huán)增加一個(gè)氨基酸 原核生物 核蛋白體循環(huán) 真核生物 核蛋白體循環(huán) ?進(jìn)位 EFTu結(jié)合分解 GTP， 促進(jìn)氨基酰 tRNA進(jìn)入 A位 EFTs調(diào)節(jié)亞基 ?進(jìn)位 EF1α EF1βγ ?成肽 (23s rRNA) 轉(zhuǎn)肽酶 催化的肽鍵形成（ 核酶 ） ?成肽 轉(zhuǎn)肽酶 催化的肽鍵形成 ?轉(zhuǎn)位 EFG有轉(zhuǎn)位酶活性 (GTP酶活性 ) 促進(jìn) mRNA肽酰 tRNA由 A位移到 P位，促進(jìn) tRNA從 E位釋放 ?轉(zhuǎn)位 EF2 轉(zhuǎn)位時(shí)卸載的 tRNA直接從 P位脫落（沒(méi)有 E位） 每合成一個(gè)肽鍵，消耗 4個(gè)高能磷酸鍵 活化 :2個(gè) ATP / 進(jìn)位 :1個(gè) GTP / 轉(zhuǎn)位 :1個(gè) GTP 肽鏈合成終止 mRNA上終止密碼出現(xiàn)，多肽鏈合成停止， 肽鏈從肽酰 tRNA中釋出， mRNA、核蛋白體等分離 原核生物 核蛋白體循環(huán) 真核生物 核蛋白體循環(huán) ?終止密碼的辨認(rèn) RF1識(shí)別 UAA、 UAG RF2識(shí)別 UAA、 UGA ?終止密碼的辨認(rèn) ?肽鏈從肽酰 tRNA水解出 eRF ?肽鏈從肽酰 tRNA水解出 RF3：促進(jìn)釋放 結(jié)合 GTP/GTP酶活性 ? 翻譯后加工 ?多肽鏈折疊為天然的 三維結(jié)構(gòu) ?促進(jìn)蛋白折疊功能的大分子 ?分子伴侶 （熱休克蛋白 /伴侶素） ?蛋白二硫鍵異構(gòu)酶 ?肽 脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶 ?肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)的修飾 ?肽鏈 N端的修飾 ?個(gè)別氨基酸的修飾 ?多肽鏈的水解修飾 ?高級(jí)結(jié)構(gòu)修飾 ?亞基聚合 ?輔基連接 ?疏水脂鏈的共價(jià)連接 ?蛋白質(zhì)合成后的 靶向輸送 ?分泌性蛋白 的靶向輸送 ?信號(hào)肽 抗生素 作用點(diǎn) 作用原理 應(yīng)用 四環(huán)素族 （金霉素 新霉素、土霉素） 鏈霉素 、 卡那霉素、新霉素 氯霉素 、林可霉素 紅霉素 梭鏈孢酸 放線菌酮 嘌呤霉素 原核核蛋白體小亞基 原核核蛋白體小亞基 原核核蛋白體大亞基 原核核蛋白體大亞基 原核核蛋白體大亞基 真核核蛋白體大亞基 真核、原核核蛋白體 抑制氨基酰 tRNA與小亞基結(jié)合 改變構(gòu)象引起讀碼錯(cuò)誤、抑制起始 抑制轉(zhuǎn)肽酶、阻斷延長(zhǎng) 抑制轉(zhuǎn)肽酶、妨礙轉(zhuǎn)位 與 EFGGTP結(jié)合，抑制肽鏈延長(zhǎng) 抑制轉(zhuǎn)肽酶、阻斷延長(zhǎng) 氨基酰 tRNA類(lèi)似物，進(jìn)位后引起未成熟肽鏈脫落 抗菌藥 抗菌藥 抗菌藥 抗菌藥 抗菌藥 醫(yī)學(xué)研究 抗腫瘤藥 ?蛋白質(zhì)生物合成抑制劑 ?環(huán)己亞胺 ?作用于 真核 生物 80S核糖體 ?抑制肽?；鶊F(tuán)的轉(zhuǎn)移 ?抗腫瘤 ?白喉毒素 ?對(duì) 真核生物 有劇毒的毒素，抑制蛋白質(zhì)的合成 ?eEF2 eEF2 腺苷二磷酸衍生物 (無(wú)活性 ) ?蓖麻毒素 ?使 真核 生物核糖體 60S大亞基失活 ?28SrRNA特異位點(diǎn)的腺苷發(fā)生脫嘌呤 ?干擾素 ?真核 細(xì)胞感染病毒后分泌的具有抗病毒作用的 蛋白質(zhì)， 抑制病毒的繁殖 ?干擾素誘導(dǎo) eIF2磷酸化而失活 ?干擾素誘導(dǎo)病毒 RNA降解 ?九、基因表達(dá)調(diào)控的概念及原理 基因表達(dá) 基因轉(zhuǎn)錄、翻譯的過(guò)程 基因表達(dá)的特異性 ?時(shí)間性（階段性） ?空間性（細(xì)胞特異性，組織特異性） 基因表達(dá)的方式 （協(xié)調(diào)表達(dá)） ?組成性表達(dá)（管家基因的表達(dá)） ?管家基因 :在個(gè)體幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá) ?誘導(dǎo)和阻遏表達(dá) ?可誘導(dǎo)基因 /可阻遏基因 基因表達(dá)調(diào)控 的生物學(xué)意義 ?適應(yīng)環(huán)境、維持生長(zhǎng)和增殖 ?維持個(gè)體發(fā)育與分化 ? 基因表達(dá)調(diào)控的基本原理 基因表達(dá)的多級(jí)調(diào)控 ?DNA水平 ?基因激活 ?RNA水平 ?轉(zhuǎn)錄起始 ?轉(zhuǎn)錄后加工 ?mRNA降解 ?蛋白質(zhì)水平 ?蛋白質(zhì)翻譯 ?翻譯后加工修飾 ?蛋白質(zhì)降解 基因 轉(zhuǎn)錄 激活調(diào)節(jié)基本要素 原核生物 真核生物 特異 DNA序列 ?操縱子 ?啟動(dòng)序列 (共有序列 ) 35區(qū) TTGACA 10區(qū) TATAAT ?操縱序列 ?其他調(diào)節(jié)序列 ?順式作用元件 (DNA) ? 影響自身基因表達(dá)的 DNA序列 ? TATA盒 /GC盒 /CAAT盒 調(diào)節(jié)蛋白質(zhì) ?阻遏蛋白 (負(fù) ) ?激活蛋白 (正 ) ?反式作用因子 (轉(zhuǎn)錄因子 /蛋白質(zhì) ) 與順式作用元件作用調(diào)節(jié) DNA表達(dá) DNA 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) ?順式作用元件 反式作用因子 ?反式作用因子 二聚體 /多聚體 RNA聚合酶 ?RNA聚合酶 +原核啟動(dòng)序列 /真核啟動(dòng)子 ?RNA聚合酶活性：誘導(dǎo)劑 /阻遏劑 DNA蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) （一）原核基因的表達(dá)調(diào)控 ?轉(zhuǎn)錄起始 ?乳糖操縱子調(diào)節(jié)機(jī)制 ?阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié) ?CAP的正性調(diào)節(jié) ?協(xié)調(diào)調(diào)節(jié) ?轉(zhuǎn)錄終止 ?衰減 色氨酸操縱子 ?抗終止 ?翻譯水平的調(diào)節(jié) ?蛋白質(zhì)分子的自我調(diào)節(jié) ?反義 RNA的調(diào)節(jié) 乳糖操縱子 (lactose operon) ?一個(gè)操縱子 =編碼序列（ 26） +啟動(dòng)序列 +操縱序列 +(其他調(diào)節(jié)序列 ) I P O Z Y a 控制位點(diǎn) 結(jié)構(gòu)基因 DNA 阻遏蛋白 啟動(dòng)序列 操縱序列 β半乳糖苷酶 通透酶 乙酰基轉(zhuǎn)移酶 ? 乳糖操縱子（ Lactose operon） 結(jié)構(gòu) RNA聚合酶 結(jié)合位點(diǎn) 調(diào)控基因 ?乳糖操縱子總結(jié) ?環(huán)境條件的變化是相關(guān)基因 表達(dá)的外界信號(hào) ?葡萄糖、乳糖濃度的變化 ?基因表達(dá)的 負(fù)調(diào)控 ?Lac阻遏物 與操縱基因 ?基因表達(dá)的 正調(diào)控 ?cAMP+CAP與相應(yīng)的 DNA序列 ?正、負(fù)調(diào)控協(xié)同表達(dá) 翻譯水平調(diào)節(jié)的操縱子 ?蛋白質(zhì)分子結(jié)合于啟動(dòng)序列或啟動(dòng)序列周?chē)M(jìn)行自我調(diào)節(jié) （順式調(diào)控） ?翻譯水平上的調(diào)節(jié) ?調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合 mRNA靶位點(diǎn) ?阻止核蛋白體識(shí)別翻譯起始區(qū) ?阻斷翻譯 ?負(fù)自我調(diào)節(jié) ?調(diào)節(jié)蛋白作用于 自身 mRNA ?抑制 自身的合成 ?舉例 ?核糖體蛋白質(zhì)的操縱子 反義 RNA 反義 RNA結(jié)合 mRNA翻譯起始部位的互補(bǔ)序列對(duì)翻譯進(jìn)行調(diào)節(jié) (反式調(diào)控： 阻遏蛋白 /CAP/反義 RNA ） ?抑制翻譯起始 ?反義 RNA與特定 mRNA翻譯起始部位互補(bǔ) ?導(dǎo)致 mRNA不穩(wěn)定 ?反義 RNA與 mRNA形成雙鏈 ?雙鏈含有核酸內(nèi)切酶的靶位點(diǎn) ?造成翻譯提前終止 ?反義 RNA結(jié)合于轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 ?形成類(lèi)似的終止子結(jié)構(gòu) ?真核基因組結(jié)構(gòu)特點(diǎn) ?基因組結(jié)構(gòu)龐大 ?單順?lè)醋? ?重復(fù)序列 ?基因不連續(xù)（斷裂基因） ?真核基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn) ?多層次上進(jìn)行 ?轉(zhuǎn)錄、 轉(zhuǎn)錄后 ?翻譯、翻譯后 ?mRNA降解 ?蛋白質(zhì)分選 ?RNA聚合酶 ?活性染色體結(jié)構(gòu)表化 ?正性調(diào)節(jié)占主導(dǎo) ?轉(zhuǎn)錄與翻譯分開(kāi)進(jìn)行 ?轉(zhuǎn)錄后修飾、加工 （二）真核基因表達(dá)的調(diào)控 ?真核基因表達(dá)調(diào)控主要表現(xiàn)為對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控 ?真核基因轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控 ?染色質(zhì)疏松、活化： 調(diào)節(jié)蛋白 在特定部位改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu) ?轉(zhuǎn)錄因子 /抑制因子 調(diào)節(jié)基因活性 ?處于轉(zhuǎn)錄激活狀態(tài)的染 色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化 ?對(duì)核酸酶敏感 ?DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)變化 ?DNA堿基的甲基化修飾變化 ?組蛋白變化 轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控 ?對(duì)核酸酶敏感 ?活化基因常有 高敏位點(diǎn) ， 位于調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合位點(diǎn)附近 ?DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)變化 ?天然雙鏈 DNA均以負(fù)性超螺旋存在 ?基因活化后 :負(fù)超螺旋 RNAP 正超螺旋 ?DNA堿基的甲基化 修飾變化 ?真核 DNA約有 5%的胞嘧啶被甲基化 ?甲基化 范圍。 DNA 酶 RNA聚合酶全酶(?2????) ?RNApol不與 DNA分子直接結(jié)合 ?轉(zhuǎn)錄因子 互相結(jié)合生成復(fù)合物 RNA聚合酶 結(jié)合、轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的基因 起始點(diǎn)辨認(rèn) ?70 TFⅡD （ RNApolⅡ ） 啟動(dòng)序列 35區(qū)的 TTGACA 10區(qū)的 TATAAT 25bp TATA Inr 起始復(fù)合物 DNARNApol DNARNApol各種 TF 原核生物 真核生物 ?延長(zhǎng) 轉(zhuǎn)錄 翻譯過(guò)程偶聯(lián) 轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程分開(kāi) 轉(zhuǎn)錄空泡 RNApol （核心酶） ?切口填補(bǔ) : ?連接雙股 DNA分子中一鏈的切口 ?雙鏈 DNA分子中雙鏈的切口 ?不能 連接二分子單鏈 DNA ? DNA連接酶 催化二段 DNA鏈之間 3’,5’ 磷酸二酯鍵的形成 ? 復(fù)制終點(diǎn)與 Tus蛋白 ?復(fù)制終點(diǎn) ?E .coli 復(fù)制終點(diǎn)位于 2個(gè)復(fù)制叉的匯合處 ?與復(fù)制起始點(diǎn) oriC相對(duì) ?復(fù)制叉匯合點(diǎn)兩側(cè)各存在一終止區(qū)（ ter） ?Tus蛋白 ?反旋轉(zhuǎn)酶活性 ?識(shí)別結(jié)合 ter共有序列 ?阻止解旋酶 /抑制復(fù)制叉前進(jìn) /復(fù)制體解體 ?原核生物復(fù)制的起始 ?真核生物復(fù)制的起始 ?雙向復(fù)制 ?θ 型復(fù)制 ?雙向復(fù)制 ?多個(gè)復(fù)制單位 ?(復(fù)制泡 =復(fù)制起始點(diǎn) +復(fù)制叉 ) ?oriC ?多個(gè)起始點(diǎn) ?DnaA辨認(rèn)起始點(diǎn) ?“ 蛋白質(zhì) +DNA復(fù)合物 ” 辨認(rèn)起始點(diǎn) ?DnaA、 B、 C/拓?fù)洚悩?gòu)酶/SSB/引物酶 ?DNApolα 、 δ ， PCNA ，拓?fù)涿福? 復(fù)制因子 （ 2）真核生物的 DNA復(fù)制過(guò)程 ?復(fù)制的延長(zhǎng) ?子鏈的延長(zhǎng) ?子鏈延長(zhǎng)方向 ?領(lǐng)頭鏈 ?隨從鏈 ?DNA聚合酶 δ+PCNA /dNTP/3’,5’磷酸二酯鍵 ?5’ 3’ ?模板： 3’ 5’，子鏈： 5’ 3’ ?模板： 5’ 3’，子鏈： 5’ 3’， 崗崎片段 ?復(fù)制的終止 ?去除 RNA引物 ?補(bǔ)充空缺 ?連接 ?切除引物 : RNAaseH1/FEN1 ?真核生物是線性 DNA每復(fù)制一次，子鏈 5’有缺失 ?端粒酶作用，形成端粒，防止子鏈的 5’有缺失 線形 DNA復(fù)制末端問(wèn)題 ?DNA聚合酶 ?原核生物 DNA聚合酶 ?DNA聚合酶 Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ ?真核生物 DNA聚合酶 ?DNA聚合酶 α (引物酶） ?起始引發(fā)，引物酶活性 ?DNA聚合酶 β ?低保真度的復(fù)制 ?DNA聚合酶 γ ?線粒體 DNA復(fù)制 ?DNA聚合酶 δ (DNA聚合酶 Ⅲ) ?延長(zhǎng)子鏈的主要酶，解旋酶活性 ?DNA聚合酶 ε (DNA聚合酶 Ⅰ ) ?填補(bǔ)引物空隙，切除修復(fù)，重組 ?端粒 ?真核生物 染色體線性 DNA分子末端的結(jié)構(gòu) ?染色體線性 DNA膨大結(jié)構(gòu)： DNA+結(jié)合蛋白 ?維持染色體穩(wěn)定和 DNA復(fù)制的完整性 ?端粒酶 ?防止端粒縮短的酶 ?蛋白質(zhì) (逆轉(zhuǎn)錄酶 /協(xié)同蛋白 ) +RNA(合成端粒 DNA的模板 ) ?唯一攜帶 RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄酶 ?端粒、 端粒酶和衰老、腫瘤有關(guān) 哺乳動(dòng)物線粒體 DNA的 D環(huán)（ Dloop)復(fù)制 噬菌體 DNA的 滾環(huán)復(fù)制 ?線粒體 DNA ?環(huán)形 ?分重鏈（ H鏈） /輕鏈（ L鏈） ?復(fù)制起始位置不同 ?復(fù)制不同步 ?H鏈、 L鏈 復(fù)制起始位置不同 ?復(fù)制不同步 ?D環(huán)復(fù)制 —不對(duì)稱(chēng)復(fù)制 （ 3）線粒體和噬菌體 DNA復(fù)制 DNA復(fù)制的忠實(shí)性 ? DNA的半保留復(fù)制 ? 遵守嚴(yán)格的堿基配對(duì)規(guī)律 ? RNA引物 ? DNA聚合酶在復(fù)制延長(zhǎng)中對(duì)堿基的選擇功能 ? 復(fù)制出錯(cuò)是有即時(shí)的校讀功能 (3’ 5’外切酶功能） ? DNA損傷的修復(fù)機(jī)制 ?DNA損傷的修復(fù) ?光修復(fù) 光修復(fù)酶 ?嘧