單克隆抗體技術(shù)ppt課件-在線瀏覽
2025-04-11 00:15本頁面
【正文】 已占全球單抗市場 90%—一支獨秀。 如 :免疫血清（含多種特異性抗體）。 抗體體內(nèi)生成的理論 ? 抗原刺激前，機體具有抗體初級庫 ? 抗原刺激后，抗體生成的細胞群體被選擇，并發(fā)生克隆性增殖。 傳統(tǒng) 抗血清 抗 原 免 疫 所有抗 體 混合 1 2 3 4 B A LB / c1 2 3 4 1 2 3 4 脾 臟 淋巴結(jié) B 細胞 傳統(tǒng) 抗血清的交叉反 應(yīng) 專一性反應(yīng) 沒有反應(yīng) 交叉反應(yīng) + ? 1 2 3 Ag A x y z Ag B 1’ 2 0 Ag A’ 1 2 3 2 2 單克隆抗體 雜交瘤技術(shù)的理論基礎(chǔ) ? 淋巴細胞產(chǎn)生抗體的克隆選擇學(xué)說，即一種克隆只產(chǎn)生一種抗體 ? 細胞融合 技術(shù)產(chǎn)生的雜交瘤細胞可以保持雙方親代細胞的特性 ? 利用代謝缺陷補救機理篩選雜交瘤細胞，并克隆化，制備 McAb 可生 產(chǎn) 有用抗 體 的 淋巴細胞 若 與 癌 細 胞 融合， 則 形成 穩(wěn) 定而可培養(yǎng) 的 細 胞 株 。 ? 可溶性抗原 1015ug/100ul+等量弗氏完全佐劑注射小鼠腹腔 24周后加強免疫（量減半，改用不完全佐劑，可反復(fù)多次） 沖擊免疫（融合前 3天進行） ? 選用 612周齡 Balb/c小鼠 ? 顆粒性抗原免疫性較強，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果 ? 可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐劑 ? 目前，用于可溶性抗原 (特別是一些弱抗原 )的免疫方案也不斷有所更新，如①將可溶性抗原顆?；蚬滔嗷环矫嬖鰪娏丝乖拿庖咴?，另一方面可降低抗原的使用量。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應(yīng)答水平，促進免疫細胞對抗原反應(yīng)性。 ? 保存：防止突變、定期篩選（ 8氮鳥嘌呤） 防止支原體污染（胎牛血清） ? 融合時保證骨髓瘤細胞處于對數(shù)生長期，良好的形態(tài)，活細胞計數(shù)高于 95％ ? 融合比例 脾細胞：骨髓瘤細胞 =3： 1許多環(huán)節(jié)需要加飼養(yǎng)細胞，如：在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養(yǎng)過程中 ? 常用的飼養(yǎng)細胞有：小鼠腹腔巨噬細胞 ? 飼養(yǎng)細胞一般在融合前一天制備 ? 免疫脾細胞：處于免疫狀態(tài)脾臟中 B淋巴母細胞 漿母細胞。 ? 融合比例： ? 骨髓瘤細胞：脾細胞 =1： 5或 1： 10 ? 融合劑： 40%PEG（分子量 10002022） ? 融合 24小時后加 HAT培養(yǎng)液 2周后 改用 HT培養(yǎng)液 2周后 改用一般培養(yǎng)液 d 細 胞融合 a b c d Ag X Ag X’ ELISA HAT PEG Cell fusion Hybridoma cells 融合瘤 細 胞 （ Subcloning） (確 定只有一 種細 胞 ) d’ d a b c d a b c d’ + + + + + + + X d c b a + d NS1 骨 髓 癌 細 胞 B cell 脾 細 胞 分株培 養(yǎng)篩選 篩選 單 抗 傳統(tǒng)抗體 (抗血清 ) 試驗專 一性 對 抗 原 的 反 應(yīng) 無 法 分 辨 完 全 不 同 d 舊 有抗原 d’ 新的抗原 ? 一般在雜交瘤細胞布滿孔底 1/10時，開始檢測特異性抗體，篩選出所需雜交瘤細胞系。 ? 克隆化：指將抗體陽性孔進行克隆化。 ? 克隆化的原則：盡早進行，反復(fù) 45次 ? 克隆化方法： 有限稀釋法 、軟瓊脂平板法、顯微克隆法 ? 陽性雜交瘤細胞應(yīng)及時凍存，防染色體丟失、變異及污染 ● 一 個 B 細 胞只能生 產(chǎn) 一 種 抗體， 對 付某一 抗原決定基。 B B B Y Y Y Y 抗 原 B Y B 親 和力成熟 1 1 Y 2 2 Y 3 3 Y 4 4 抗原決定基 1 2 3 4 m m m m 1 2 3 4 Y Y Y Y Y Y Y Y Y
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