巴戟天對大鼠骨髓基質(zhì)細胞增殖、成骨分化及cbfal基因表達影響的研究開題報告-在線瀏覽
2025-03-10 15:56本頁面
【正文】 的成骨細胞[5]、軟骨細胞[6]作為種子細胞，但這些細胞已接近成熟，體外培養(yǎng)增殖力弱，而且取材不方便，供體局部損傷大，來源有限。存在于骨髓中的含有骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在不同的誘導(dǎo)條件下，能向成骨細胞、成軟骨細胞、成纖維細胞、脂肪細胞等中胚層組織細胞分化，所以近年來又將其稱為“間充質(zhì)干細胞”或“骨源性干細胞” [9]。BMSCs是唯一含有豐富的DOPC和IOPC的組織。近年來，對各種誘導(dǎo)物的作用進行了大量研究，包括有糖皮質(zhì)激素、維生素C、β甘油磷酸鈉（βGP）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）及骨生長因子等等。Chung等[11]認為：體外成骨細胞骨化必須有β甘油磷酸鹽的參與，其可作為ALP的底物刺激鈣化，但在懸液中的濃度不能超過2mM，否則形成不了鈣的沉積；Maniatopoulos等[12]也認為βGP為細胞提供磷酸根成分，促進生理性鈣鹽沉積及鈣化。DEX是BMSCs體外成骨的必須成分，究其原因，這可能是由于骨細胞是糖皮質(zhì)激素的靶細胞[14]。Lecklin[16]等更是認為培養(yǎng)條件中必須有DEX、轉(zhuǎn)化生長因子β等因素存在,才能促使其大量向骨形成方向轉(zhuǎn)化。國內(nèi)學(xué)者易誠青等[18]的研究表明：TGFβ1基因轉(zhuǎn)染對BMSCs有明確的促成骨作用。BMPs現(xiàn)有15種以上，以BMP2的作用最強?？傊珺MSCs在骨組織工程領(lǐng)域的研究已取得很大進展，為骨組織的修復(fù)和重建拓展了全新的研究和治療思路，具有廣闊的應(yīng)用前景。它包括Cbfal、2和3，其中Cbfal僅表達于骨、胸腺和睪丸?；蚱瞥龑嶒炞C實cbfal缺陷的純合鼠無骨的形成，雜合鼠則出現(xiàn)成骨細胞功能的下降。Cbfal作為成骨分化關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄因子，能在非成骨細胞或成骨前體細胞上調(diào)成骨分化相關(guān)基因的表達，使其向成骨細胞分化[20]。Cbfal可與骨鈣素基因(Bgp)的啟動于區(qū)0B特異性的順式作用元件0SE(osteoblast—specificcisacting element)2結(jié)合，是0B分化所必需的。（3）Cbfa1表達的調(diào)節(jié)過程可成為骨形成新藥的目的靶。cbfal的生物學(xué)特征提示它的功能不僅限于發(fā)育和分化。這兩個特點使cbfal能在決定這些細胞的命運及保持它們的功能方面起作用?？傊@些涉及到cbfal表達和調(diào)節(jié)的多個環(huán)節(jié)，可能成為骨形成新藥研究的作用靶點[22]。祖國醫(yī)學(xué)理論認為:腎主骨，藏精，骨的愈合、生長有賴精血的充養(yǎng)，正如《黃帝內(nèi)經(jīng)》曰：“腎者，主蟄，封藏之本，精之處也，……，其充在骨。中醫(yī)臨床已充分證實使用中藥補腎益精能使骨愈合加快，治療骨折遲緩愈合、不愈合效果明顯。巴戟天以根部入藥，其氣味辛、甘，性微溫，《本經(jīng)》記載：“主……陽痿不起，強筋骨，安五臟，補中益氣增志”；《本草備要》載之“補腎益精……散風(fēng)濕，治風(fēng)氣腳氣水腫”。據(jù)現(xiàn)代藥理研究[23]，巴戟天的化學(xué)成分復(fù)雜，現(xiàn)已分離得到11類化學(xué)物及24種無機元素，包括有糖類（多糖、單糖等）、蒽醌類化合物（大黃素甲醚、甲基異茜草1－甲醚3－醋酸脂等）、脂類（β－谷甾醇等）、氨基酸（11種游離氨基酸、17種水解氨基酸）、黃酮類化合物、有機酸類（棕櫚酸等）、多種甙類（水晶蘭甙、四乙酰車葉草甙等）、維生素C、無機元素（24種微量元素等）等成分，其中巴戟天水提物中含有糖類、維生素C、氨基酸等[24]，巴戟天醇提物中含有β－谷甾醇、蒽醌類化合物、黃酮、水晶蘭甙等[2227]。中藥血清藥理學(xué)提供了利用現(xiàn)代化手段來研究中醫(yī)藥，從細胞、分子、基因水平研究中藥的作用與其機理的方法，并有助于中藥化學(xué)成分研究及中藥藥動學(xué)研究的深入，為中藥與西藥的研究在實驗方法上找到了結(jié)合點。本課題主要通過血清藥理學(xué)的方法來研究巴戟天對體外培養(yǎng)的SD大鼠骨髓基質(zhì)細胞的生物學(xué)性狀的影響，探討巴戟天促進成骨及骨愈合的機制以及中藥血清藥理學(xué)方法在分子生物學(xué)中的應(yīng)用。我們采用含中藥巴戟天不同成分的血清體外培養(yǎng)大鼠BMSCs，觀察巴戟天主要成分對大鼠BMSCs增殖、誘導(dǎo)BMSCs的成骨分化及Cbfal的表達的影響，以探討中藥血清體外培養(yǎng)BMSCs模型的建立，從分子生物學(xué)水平探討補腎強骨類中藥促進成骨的機制，為中藥促進骨折愈合，治療骨折遲緩愈合、不愈合以及中藥在骨組織修復(fù)工程中的應(yīng)用等提供科學(xué)依據(jù)，也為新藥開發(fā)、中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究提供科學(xué)的理論依據(jù)。25:1019—1021.[5] Beley CT, Doherty MJ,Haankey DP, et al. The culture of human osteoblasts upon bone graft substitute. Bone , 1993。(288):287—293.[7] Herbertson A, Aubin JE, Cell sorting enriches osteogenic populations in rat bone marrow strmal cell culture. Bone, 1997。 5:143147[9] Minguell JJ, Erices A, Conget P, Mesenchymal stem cells. J. Exp Biol Med,2001。313:115.[11] Chung CH, Golub EE, Forbe E, et al, Mcchanism of action of βglycerophosphate on bone . Calaif Tissue Int ,1992。256:317325[13] Kamalia N, McCulloch CA, Tenebaum HC, et al, Dexamethasone recruitment of selfrenewing osteoprogenitor cells in chick bone marrow stromal celltures. Blood,1992。134:277286[15] Jaisawl N, HaynEsworth SF, Caplan AI, et al, Osteogenic differentiation of purified,cultureexpanded human mesenchymal stem
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