巴戟天對大鼠骨髓基質(zhì)細胞增殖、成骨分化及cbfal基因表達影響的研究開題報告(已修改)
2025-02-02 15:56 本頁面
【正文】 福 建 中 醫(yī) 學 院攻讀博士學位研究生課題研究計劃系（院、部）：骨傷系 教 研 室：骨傷教研室 專 業(yè)：中醫(yī)骨傷科學研 究 方 向：骨折愈合 導 師 姓 名：王和鳴 教授 課題研究起止時間：2003年9月1日至2005年5月1日 研究生簽名：王力 填表時間：2003年12月1日說明一、本計劃由研究生本人在向?qū)熜〗M作過開題報告后填寫，一式二份，最后經(jīng)系（院、部）批準后，一份留系（院、部）一份送研究生部存檔。二、開題報告一般要求在第三學期進行，最遲不得超過第四學期。三、計劃批準后非經(jīng)同樣手續(xù)不得隨意更改。四、在課題執(zhí)行過程中導師檢查兩次。檢查情況及變動情況應(yīng)記錄在表內(nèi)。研究課題名稱：巴戟天對大鼠骨髓基質(zhì)細胞增殖、成骨分化及Cbfal基因表達影響的研究研究課題的目的，課題的理論與實際意義，國內(nèi)外研究情況介紹課題研究目的：通過巴戟天水提物、巴戟天醇提物的含藥血清對體外培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細胞增殖、誘導骨髓基質(zhì)細胞向成骨分化及Cbfal mRNA的表達的影響的研究，探討巴戟天促進成骨的有效部位，從分子生物學水平研究巴戟天促進成骨作用的機制，同時建立中藥血清藥理學方法培養(yǎng)骨髓基質(zhì)細胞的模型，闡明補腎強骨類中藥療效作用機制，為中藥促進骨折愈合，治療骨折遲緩愈合、不愈合以及中醫(yī)藥在骨組織修復(fù)工程中的應(yīng)用等提供科學依據(jù)，也為新藥開發(fā)、中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究提供科學的理論依據(jù)。課題的理論、實際意義及國內(nèi)外研究介紹：骨折延遲愈合、不愈合和骨缺損患者臨床并不少見，且治療起來非常棘手，均屬于骨傷科疑難病癥，從目前的臨床和研究來看，骨組織工程和中醫(yī)藥是最有希望取得突破的方法。由于某種因素如外傷、感染、腫瘤等而使骨喪失一些骨質(zhì)，形成較大的間隙，稱為骨缺損。絕大多數(shù)骨缺損都難以愈合，最后形成骨不連。由于缺損間隙大，成骨細胞難以爬過間隙而不能發(fā)生正常的愈合過程，僅由纖維組織填充。而通過組織工程學方法來治療骨缺損是目前研究的熱點之一。它不僅可以免除自身骨移植的供區(qū)損傷，也可避免同種異體移植供體來源有限和不可避免的免疫排斥反應(yīng)。骨折愈合是復(fù)雜的組織學，生物學，內(nèi)分泌學及生物力學的動態(tài)過程。骨折的生物學過程及其伴隨的組織學變化已得到公認。雖然學者們對此過程的分期不盡相同，但并無實質(zhì)上的差異。綜合各種分期方法,骨折愈合從組織學上可概括為血腫和炎癥期、原始骨痂反應(yīng)期、軟骨形成期和骨形成改建期等4個階段[1,2]。骨折修復(fù)過程包括以下三個方面[1]：(1)骨折部位骨祖細胞的募集；骨折后，骨折端內(nèi)外膜成骨細胞出現(xiàn)增殖，但它們并不直接參與骨端的連接。骨折間隙內(nèi)來自髓腔的多潛能細胞及來自鄰近軟組織的原始成纖維細胞的聚集和增殖，在適當刺激后即變成具有成骨能力的骨祖細胞，積極參與骨聯(lián)接。因此骨折后的炎癥反映，骨折端及其鄰近軟組織的良好血供，對骨折愈合是十分重要的。(2)調(diào)控誘骨：人們已能在骨折修復(fù)過程中的不同時期和不同部位檢測到多種具有誘導成骨作用的生長因子。它們能促進細胞增殖，分化及基質(zhì)合成，對骨折的啟動，發(fā)育調(diào)控及塑形均起重要作用。骨折血腫內(nèi)炎癥細胞，巨噬細胞及血小板均可釋放不同的生長因子；血管內(nèi)皮細胞，成纖維細胞，成軟骨細胞，成骨細胞，以及它們的基質(zhì)均為各種生長因子的來源[3]。（3）骨傳導：選用合適材料橋接于骨端。上述任何一個環(huán)節(jié)存在缺陷，有可能出現(xiàn)骨折的延遲愈合和不愈合. 骨愈合的機理非常復(fù)雜，它不同于其他組織器官的愈合．主要在于參與骨愈合的細胞較其他組織器官多．不同愈合階段有不同的細胞參與．同時細胞外多種蛋白在此過程中也起重要作用。近年來，分子生物學作為從分子水平闡明生命本質(zhì)的新興邊緣學科．在骨科基礎(chǔ)研究領(lǐng)域日益得到重視并受到廣泛應(yīng)用。種子細胞的選擇一直是困擾骨組織工程進展的難題之一，雖然已有研究利用骨外膜成骨細胞[5]、松質(zhì)骨來源的成骨細胞[5]、軟骨細胞[6]作為種子細胞，但這些細胞已接近成熟，體外培養(yǎng)增殖力弱，而且取材不方便，供體局部損傷大，來源有限?？墒莵碓从诠撬璧腂MSCs在體外培養(yǎng)、擴增并誘導后有很強的成骨能力，且容易分離，來源廣泛，應(yīng)用安全方便，所以其正作為骨組織工程中首選的種子細胞日益受到重視[8]。存在于骨髓中的含有骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在不同的誘導條件下，能向成骨細胞、成軟骨細胞、成纖維細胞、脂肪細胞等中胚層組織細胞分化，所以近年來又將其稱為“間充質(zhì)干細胞”或“骨源性干細胞” [9]。Reddi等[10]研究證實：成骨細胞前體―――骨祖細胞有兩種類型，一是定向骨祖細胞(Determined Osteogenic Precursor Cell,DOPC),其具有干細胞特性，不需要外源性誘導物就能自動分化成骨，它僅在骨髓中及骨表面發(fā)現(xiàn)，由BMSCs轉(zhuǎn)化而成；二是誘導性骨祖細胞(Inducible Osteogenic Precursor Cell,IOPC),其是一種未分化的間葉細胞，存在于所有的結(jié)締組織中，也存在于骨髓中，此類細胞不能自發(fā)地形成骨組織，必須在骨形態(tài)蛋白（BMP）等誘導物作用下才能轉(zhuǎn)化為成骨細胞。BMSCs是唯一含有豐富的DOPC和IOPC的組織?？梢钥闯?，誘導物是促進BMSCs成骨分化及提高BMSCs成骨能力的重要影響因素。近年來，對各種誘導物的作用進行了大量研究，包括有糖皮質(zhì)激素、維生素C、β甘油磷酸鈉（βGP）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）及骨生長因子等等。維生素C能促進體外培養(yǎng)細胞合成膠原，形成鈣化，也能調(diào)節(jié)ATP及ALP活性，并影響其合成。Chung等[11]認為：體外成骨細胞骨化必須有β甘油磷酸鹽的參與，其可作為ALP的底物刺激鈣化，但在懸液中的濃度不能超過2mM，否則形成不了鈣的沉積；Maniatopoulos等[12]也認為βGP為細胞提供磷酸根成分，促進生理性鈣鹽沉積及鈣化。地塞米松（DEX）能促進BMSCs向
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