蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法-在線瀏覽
2025-03-09 11:39本頁(yè)面
【正文】 加入 Fo1in酚試劑乙后，立即搖勻，放置 30分鐘后比色，在500nm處記下各管光密度，以 0號(hào)管為對(duì)照，以光密度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 【 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 】 根據(jù)未知樣品溶液的光密度值，在繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出樣品溶液中的蛋白質(zhì)含量。 2. 掌握紫外分光光度計(jì)的操作方法。 紫外吸收法可測(cè)定 ，此操作簡(jiǎn)便，測(cè)定迅速，不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測(cè)定。 【 實(shí)驗(yàn)材料 】 試管及試管架； 50毫升容量瓶 2只；移液管；紫外分光光度計(jì)。 (2)樣品溶液：配制約 為未知樣品溶液。 以光密度為縱座標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液濃度為橫座標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 【 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 】 根據(jù)樣品溶液的光密度值，在繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出樣品溶液的蛋白質(zhì)含量。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 凱氏定氮法用于測(cè)定有機(jī)物的含氮量 ,若蛋白質(zhì)的含氮量已知時(shí)，則可用此法測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含量。此過程通常稱為“消化”。 消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結(jié)合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)鹽酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原來的氫離子濃度為止。 蛋白質(zhì)的含氮量為 16%，即 1克蛋白質(zhì)中的氮相當(dāng)于 克蛋白質(zhì)，用凱氏定氮法測(cè)出的含氮量乘以 ,即得樣品中蛋白質(zhì)的含量。 (2) 粉末硫酸鉀 — 硫酸銅混合物： K2SO4與 CuSO4?5H2O以 3： 1配比研磨混合。 (4)樣品溶液：配制 3mg/mL的牛血清白蛋白溶液作為樣品。 ：取 4個(gè) 50ml凱氏燒瓶并標(biāo)號(hào) ,各加 1顆玻璃珠，在 1號(hào)及 2號(hào)瓶中各加樣品 1mL，催化劑 (K2SO4CuSO4?5H2O)200mg，濃硫酸 5mL。在 3號(hào)及 4號(hào)瓶中各加 1mL蒸餾水和與 2號(hào)瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對(duì)照。 在消化開始時(shí)應(yīng)控制火力，不要使液體沖到瓶頸。撤掉火力，冷卻至室溫。約 15分鐘后，在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸指示劑的錐形瓶，繼續(xù)蒸汽洗滌 2 分鐘，觀察錐形瓶?jī)?nèi)的溶液是否變色，如不變色則證明蒸餾裝置內(nèi)部已洗滌干凈。 (2)蒸餾：取下棒狀玻塞，用吸管吸取消化液，細(xì)心地插到反應(yīng)室小玻璃杯的下方，塞緊棒狀玻塞。取 30％的氫氧化鈉溶液 10ml放入小玻璃杯中， 輕提棒狀玻璃塞使之流入反應(yīng)室 (為了防止冷凝管倒吸，液體流入反應(yīng)室必須緩慢 )。再輕提玻璃塞，使一半蒸餾水慢慢流入反應(yīng)室，一半留在玻璃杯中作水封。氨氣進(jìn)入錐形瓶，瓶中的酸溶液由紫色變
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