生物分離工程第七章色譜技術親和色譜-在線瀏覽
2025-03-05 12:10本頁面
【正文】 不良影響，如抗體、染料等配基。 2．高度的親水性。 4．大量的化學基團能被有效地活化，而且容易和配體結合。 一般親和吸附劑采用的基質有纖維素、聚丙烯酰胺凝膠、交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖、交聯(lián)瓊脂糖、多孔玻璃珠等。 特異性配體一般是指只與單一或很少種類的蛋白質等生物大分子結合的配體。配體的特異性是保證親和層析高分辨率的重要因素，但尋找特異性配體一般是比較困難的，尤其對于一些性質不很了解的生物大分子，要找到合適的特異性配體通常需要大量的實驗。通用性配體對生物大分子的專一性雖然不如特異性配體，但通過選擇合適的洗脫條件也可以得到很高的分辨率。 22 配基的濃度 ? 對親和勢比較低的時候 （ KL≥104mol/L） ， 增加配基濃度有利于吸附 。 ? 配基濃度太高使吸附力太強 ， 洗脫困難 。 23 配基偶聯(lián)的位置 ? 配基固定化時 ， 其不參與親和結合的部位與載體進行偶聯(lián) 。 ? 磷酸基接到載體上 ， 對甘油醛 3磷酸脫氫酶有吸附力 。 ? 小分子物質作為配基，載體和配基間插入一個“手臂”以消除空間障礙。 在生物體內蛋白酶的抑制劑可與蛋白酶的活性部位結合，抑制酶的活性，必要時保護生物組織不受蛋白酶的損害。 （ 2）抗體 利用抗體為配基的親和層析又稱為 免疫親和層析（ Immunoaffinity chromatography）。因此，利用免疫親和層析法，特別是以單抗為配基的免疫親和層析法是高度純化蛋白質類生物大分子的有效手段。 A蛋白在確定其為蛋白質之前稱 A抗原，與動物免疫球蛋白G(immunogloblin G， IgG)具有很強的親和結合作用，結合部位 IgG分子的 Fc片斷（ Y字型 IgG分子的主干部分） A蛋白不與抗體（ IgG）的抗原結合部位結合，而且任何抗體的 Fc片斷的結構都非常相似， 因此 A蛋白可作為各種抗體的親和配基， 但不同抗體的結合常數(shù)有所不同。例如，常用做親和配基的 伴刀豆球蛋白A(concanavalin A， con A)與葡聚糖和甘露糖的親和結合作用較強，而麥芽糖凝集素（ wheat germ agglutinin，WGA）與 N乙酰葡糖胺（ Nacetylglucosamine）的親和結合作用較強。輔酶主要有輔酶 Ⅰ （煙酰胺腺嘌呤二核苷酸， nicotinamideadenine dinucleotide， NAD）、輔酶 Ⅱ （煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸， NAD phosophate， NADP）和三磷酸腺苷（ adenosine triphosphate， ATP）等。此外，磷酸腺苷（ adenosine 5’monophosphate， AMP）、二磷酸腺苷（ adenosine2’，5’diphosphate， ADP）的腺苷部分與上述輔酶的結構類似，與脫氫酶和激酶同樣具有親和結合作用，可用做這些酶的親和配基。過渡金屬離子與咪唑基的結合強弱順序是 Cu2+＞ Ni2+＞ Zn2+≥Co2+ 。因此組氨酸可與蛋白質發(fā)生親和結合作用。在鹽濃度較低和 pH約等于目標蛋白質等電點的溶液中，固定化組氨酸的親和吸附作用最強，隨著鹽濃度增大，親和吸附作用降低。 （ 8）肝素 肝素（ heparin） 是存在于哺乳動物的肝、肺、腸等臟器中的酸性多糖類物質，分子量一般為 5～ 30KD，具有抗凝血作用。肝素的親和結合作用在中性 pH和低濃度鹽溶液中較強，隨著鹽濃度的增大結合作用降低 活化 基質的活化是指通過對基質進行一定的化學處理，使基質表面上的一些化學基團轉變?yōu)橐子诤吞囟ㄅ潴w結合的活性基團。反應如下： 介質活化與耦聯(lián) 活化耦聯(lián)過程 20ml、 2mol/L碳酸氫鈉 +20g濕瓊脂糖，冰浴 45min 攪拌過程中加入溴化氰， 45℃ 10min 過濾，冷蒸餾水和緩沖
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