【正文】 冠以產(chǎn)地：浙貝、川黃連、廣陳皮等。成分則受地區(qū)的自然地理環(huán)境（土壤、水質(zhì)、氣候、日照、雨量）等影響，尤其是土質(zhì)成分明顯影響著中藥化學(xué)成分的質(zhì)和量，故產(chǎn)地不同，藥材的效用就有差異。吉林省七個地區(qū)所采人參莖葉樣品中，~%不等。（三）、采收季節(jié)各種植物的根、莖、葉、花、果、種子都有一定的生長和成熟時期，所以各中藥適宜的采收時間隨植物種類和入藥部位而有所不同?，F(xiàn)代研究證明：藥物采收季節(jié)大體確定一個原則，就是選擇植物有效成分含量最高時采收（因藥理作用與其有效成分含量多少一致），而有效成分含量高低隨季節(jié)及入藥部位不同植物各部分不同生長期而異。如 槐花—花蕾時蘆丁含量最高?，F(xiàn)狀（存在問題）：中藥中已搞清有效成分者不多；搞清有效成分在植株生長發(fā)育過程中變化規(guī)律不多，所以，目前多數(shù)中藥的采收還是按傳統(tǒng)經(jīng)驗結(jié)合植物生長一般規(guī)律而判定采收季節(jié)。如含揮發(fā)油藥材（冰片、樟腦）可被氧化、分解或自然揮發(fā)；苦杏仁中苦杏仁苷（止咳平喘有效成分）在貯存中受溫度、濕度等因素影響，易被苦杏仁酶等分解，苦杏仁苷含量可降低105%~%；刺五加貯存時間起過3年或在高溫（40~60℃），高濕（相對濕度74%以上），日光照射等條件下貯存6個月，其所含丁香苷幾乎消失殆盡。（五）、炮制中藥炮制是我國特有的一門制藥技術(shù)，已有二千多年的歷史，對于這一豐富的民族遺產(chǎn)，目前尚不能用現(xiàn)代科學(xué)全面地加以說明，但迄今為止的化學(xué)、藥理、臨床等方面的研究已表明，炮制經(jīng)驗大多是有價值的，炮制過程對化學(xué)成分含量，藥理作用確有明顯的影響?，F(xiàn)代研究表明，炮制對藥理作用的影響有以下三個方面：消除或降低藥物的毒性（減毒、去毒）：長期煎煮中藥成分復(fù)雜，有些藥物有效成分和毒性成分同時存在，可通過炮制中使毒性消降或降低。芍藥：安息香酸（苯甲酸）對胃有刺激作用，且可增加肝臟對該成分的解毒負(fù)擔(dān)。有效成分芍藥苷未被破壞。如延胡素：醋制品鎮(zhèn)痛作用強于生品。黃苓：蒸、煮品抗菌作用強于生品。改變藥材成分的組成，加強或突出某一作用：如大黃：生大黃主要含結(jié)合型蒽苷—瀉下作用； 熟大黃經(jīng)炮制后結(jié)合型蒽苷減少1/2，而抗菌成份游離型蒽苷含量增加，抗菌作用增強。其中人參皂苷Rh2對癌細(xì)胞增殖有抑制作用。如：中醫(yī)鉤藤只用其鉤，加工費時費力，現(xiàn)證明帶鉤的莖也有作用，可減少炮制程序。（六）、劑型和制劑同一種中藥，制成不同劑型，由于制造工藝不同，給藥途徑不同，往往影響藥物的吸收和血液中有效成分的濃度，故可直接影響藥理作用的強度和性質(zhì)。枳實、青皮水煎液口服未見有升血壓記載，但靜脈注射卻表現(xiàn)出明顯的升壓作用，說明近年來隨對藥物的效成分的提取及滅菌技術(shù)上的進步，不僅提高了某些古方的療效，而且出現(xiàn)了一些新作用，擴大了臨床應(yīng)用范圍。另一方面，同一中藥，同一劑型，不同廠家或同一廠家的不同批號產(chǎn)品影響療效與毒性，故為保證不同廠家不同批次的同名產(chǎn)品有相同療效，應(yīng)采用“生物利用度”來表示其效價，加強質(zhì)量控制，各廠家必須按《藥典》或衛(wèi)生部門規(guī)定的《藥品標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定生產(chǎn)，這對指導(dǎo)中成藥制劑和統(tǒng)一產(chǎn)品的規(guī)格起到重要作用。在一定范圍內(nèi)，藥物劑量的大小與其的效成分在血液中濃度的高低及其作用強度呈依賴關(guān)系；劑量過小，不出現(xiàn)效應(yīng)；劑量過大，可能出現(xiàn)中毒癥狀。煎煮方法和條件：中藥最習(xí)用的是水煮煎湯。煎煮講究火候、時間：解表藥火力要強，時間要短；補益藥火力要溫和，時間需稍長。如：經(jīng)典法（濾液中后下大黃）煎液中大黃酸及總蒽醌的溶出量最多，比混煎法（四味藥不分先后同時煎）分別多14%和11%，后下法（在藥渣中后下大黃）含量居中。二、機體因素包括生理情況和病理狀態(tài)。2）性別不同女性：激素水平、月經(jīng)、妊娠、分娩、哺乳等時期，對不同藥物敏感性不同。3）精神狀態(tài)中醫(yī)認(rèn)為：喜、怒、憂、思、悲、恐、驚七情對藥物作用有影響。如：安慰劑—不含活性成分，非真正藥理作用，而是由于醫(yī)生的暗示所引起對病人有利的影響。耐受性：與上相反，對藥物敏感性低，多次應(yīng)用后須加大藥量才能達到相似藥理作用強度。病理狀態(tài)的影響1）某些藥物對異常機體有效，對正常機體無影響。五苓散對正常犬或大鼠無利尿作用，但對臨床上水腫、小便不利的病人有利尿作用。當(dāng)肝、腎功能不全時，藥物消除時間延長，豐衰期延長，毒性增加，因而給藥間隔時間和劑量要相應(yīng)改變。三、環(huán)境因素包括：地理條件、氣候寒暖、飲食起居、家庭環(huán)境等。自然界存在有許多奇怪現(xiàn)象：嬰兒出生率以早晨和傍晚兩個時辰最高；醫(yī)院病人的死亡率卻總是早上6時和下午4時出現(xiàn)高峰；人的體溫早晨4時最高，下午6時最低，相差1℃；公雞佛曉前啼叫；夜來香卻總是傍晚時播香。中醫(yī)認(rèn)為：服藥要順應(yīng)四時之序，一日之中因晝夜晨昏的交替對人體氣血運行、臟腑功能活動及疾病變化的影響?，F(xiàn)代研究認(rèn)為：生物晝夜節(jié)律—生物的多種生物活動如體溫、腎上腺素、皮質(zhì)激素分泌水平在24h內(nèi)有規(guī)律地波動。如雷公藤毒性以中午12時給藥小白鼠死亡率最高，20點~次晨8點最低。機理：生物的晝夜節(jié)律影響到藥物的吸收、代謝和排泄速率，也必將影響藥物效應(yīng)。以達到高效低毒的目的。注冊分類：共分11類（2002年12月1日施行）新藥研制做到兩個突出，兩個基本原則：1）突出一個新字，既要有創(chuàng)新，要避免低水平重復(fù)；2）突出中藥特色，要在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)方法，在繼承基礎(chǔ)上不斷創(chuàng)新。二、中藥新藥藥理學(xué)研究的基本內(nèi)容（一）主要藥效學(xué)研究主要藥效的確定藥效研究應(yīng)回答被研制的新藥是否有效？為何有效和什么成分有效？選擇什么樣的實驗方法和觀察指標(biāo)呢？1）根據(jù)中藥主治、功效，針對性地選擇兩種或多種試驗方法，其中一種必須是整體正常動物或動物病理模型。如：抗癌中藥多從祛邪、扶正、增效、減毒四個方面研究，祛邪為主：即抑制或殺滅癌細(xì)胞；扶正；增強免疫功能，提高機體的抗病能力；增效：對癌癥患者化療與療效具有增效作用；減毒：對癌癥患者化療與放療具有減輕不良反應(yīng)作用。試驗方法的選擇有整體實驗與離體實驗兩大類。2）以離體實驗為輔 離體器官包括離體心臟、離體主動脈條、離體腸管、離體子宮等。但不符合臨床情況。在此基礎(chǔ)上，進一步在組織水平、細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平乃至分子水平上探討試品的作用機理。例如：根據(jù)中醫(yī)辯證莊施治原則“虛則補之”，研究補益藥最好采用適當(dāng)?shù)摹疤撟C”模型。參芪注射液對“氣虛證”小鼠免疫功能的影響，研究證明，在“氣虛證”動物模型上，免疫指標(biāo)比正常動物普遍低下，在施以參芪注射液后，多項免疫指標(biāo)明顯回升，而對正常動物則不如虛證模型動物升高明顯。如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎選擇大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎模型。觀測指標(biāo)應(yīng)選用特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好、客觀、定量地反映藥效的先進指標(biāo)，并進行多指標(biāo)觀測。一般要求兩種給藥途徑，并設(shè)兩個以上劑量組，靜脈注射給藥及離體試驗宜用水溶性高，不含干擾雜質(zhì)（如無機離子），PH值接近中性的藥液。實驗動物選用具有動物飼養(yǎng)合格證的動物。如：大鼠Wistar品系，雌雄不拘，2~3月齡，150g~180g。還應(yīng)注意：1）根據(jù)所研究試品的藥理作用，選用與人的疾病特點和機能反應(yīng)近似的實驗動物。2）選用遺傳背景明確、模型和指標(biāo)顯著且穩(wěn)定，解剖生理特點符合試驗?zāi)康膶嶒瀯游?。如抗AS藥研究，選用鵪鶉、鴿子、家兔，經(jīng)造模后脂質(zhì)斑塊易于形成，以鵪鶉優(yōu)于家兔，其易于飼養(yǎng)，經(jīng)濟（2元/只），用藥量小（造模用膽固醇消耗量少）。小鼠可10~15倍。實驗結(jié)果的處理和分析計數(shù)資料（質(zhì)反應(yīng)指標(biāo)，是以“有”或“無”的方式出現(xiàn)，如死亡、睡眠、惇厥等）：常采用x2檢驗進行顯著性測定。實驗結(jié)果分析，最好以圖表形式表達，圖或表的內(nèi)容通常包括組別，每組動物數(shù)，給藥劑量及所測指標(biāo)的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差（），顯著性測定結(jié)果（P值）。一、二類新藥申報有此要求。呼吸系統(tǒng)：觀察給藥后的對呼吸頻率、節(jié)律及深度的影響。中藥材中提取的單一化學(xué)成分可測定有關(guān)參數(shù)。這是新藥審批不可缺少的環(huán)節(jié)。以前兩種為常用。根據(jù)量效曲線的斜率最大，劑量稍有變化，死亡率變化較大，此點反應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、嚴(yán)重性好，因此常以動物半數(shù)致死量LD50作為衡量毒性程度的主要指標(biāo)。2）觀察試品的毒性癥狀：記錄并了解試品對器官組織損傷部位、損傷程度，反應(yīng)出現(xiàn)時間，持續(xù)時間和恢復(fù)時間以及死亡時間。TI可提供新藥粗略的安全范圍。4）為藥效學(xué)及長期毒性試驗選擇劑量提供參考：藥效學(xué)劑量可選擇在 1/8~ 1/10LD50之間，在沒有任何參考資料的情況下，長毒劑量在1/3~1/15 LD50之間。2）給藥方法：采用兩種以上途徑，其中包括推薦臨床用藥的給藥途徑。如中藥制劑水溶性好的。給藥容積：；。4）觀察指標(biāo)：給藥后觀察反應(yīng)情況，記錄死亡時間、死亡前癥狀，各組動物的死亡數(shù)。5）環(huán)境條件的控制：室溫過涼、過熱都會影響藥物吸收，從而影響藥物的毒性反應(yīng)。動物的食量不僅影響體重，也影響毒性反應(yīng)，要求給藥前禁食24h，以保證饑飽一致。申報新藥推薦Bliss法。LD50及其可信限的計算可參見實驗教材。實驗報告需注明日期，動物品種、規(guī)格、數(shù)量、受試物來源及含量，各且動物死亡率，動物中毒表現(xiàn)及致死癥狀等。方法：采用擬推薦的臨床給藥途徑，最大濃度，最大容積，一般擬一日內(nèi)2~3次給予動物。以不引起死亡的最大累計劑量作為最大耐受量（含生藥量g/kg表示），推算相當(dāng)于臨床用量的倍數(shù)。（二）長期毒性試驗如果試品通過藥效學(xué)和LD50測定后，表明其有實用價值（有效，短期使用安全），可作長期毒性試驗。2）確定試品產(chǎn)生主要毒副作用的靶器官，明確毒副作用敏感的指標(biāo)，供臨床應(yīng)用時監(jiān)測。4）確定、無毒性反應(yīng)的安全劑量，即無不良反應(yīng)的最大劑量，為擬定人用安全劑量提供參考。嚙齒類常用大鼠，6周齡，體重100g左右，動物體重差別應(yīng)控制在平均體重20%范圍內(nèi)，每組不少于20只，♂♀各半，如試驗周期多于90day，每組增加至♂♀各20只（40只），試驗前至少觀察一周，記錄食量和體重等。2）劑量：一般設(shè)三個劑量組。各劑量差以等片級數(shù)3~5倍，對照組用常水或溶媒。3）給藥途徑和方法：選擇與推薦臨床試驗的給藥途徑相同。給藥期長于90day者，可把藥品摻入水瓶中的飼料中，但摻入藥量不得超過動物每日進食量的10%，以免影響動物的正常營養(yǎng)，而干擾毒性反應(yīng)的判斷，同時應(yīng)保證攝入藥量準(zhǔn)確。但三、四類中藥制劑，處方中無毒性藥材，無配伍禁忌，又未經(jīng)化學(xué)處理，難以測出LD50，給藥劑量大于200g/kg，臨床用藥期1~3d者，可免做長期毒性試驗。5）觀察指標(biāo)①一般體征、體重、外觀、行為、進食量、糞便等。④系統(tǒng)尸檢和病理組織學(xué)檢查：由眼觀察異常的器官應(yīng)重點進行病理組織學(xué)檢查。高劑量組發(fā)現(xiàn)有異常病變時進行病理組織學(xué)檢查（上述臟器及胃、胸腺和可能的靶器官）。第四節(jié) 中藥藥理實驗設(shè)計一、中藥藥理實驗設(shè)計的重要性 實驗設(shè)計是很重要的，中藥藥理研究首要的問題，就是對實驗研究的科學(xué)、合理、周密設(shè)計，因為實驗設(shè)計是實驗過程的依據(jù)，是實驗數(shù)據(jù)處理的前提，也是提高實驗研究質(zhì)量的一個重要保證。因此，實驗研究設(shè)計，從中藥藥理實驗研究過程來看，具有非常重要的意義。在實驗設(shè)計時要注意重復(fù)，隨機和對照“三個基本原則”。但重復(fù)次數(shù)越多，所消耗人力物力越大。這是藥理實驗設(shè)計必須要考慮的問題，這應(yīng)按統(tǒng)計學(xué)的要求進行。如計量研究（以反應(yīng)量作為實驗指標(biāo)）所用動物：小鼠或大鼠每組應(yīng)不少于10只，豚鼠或家兔每組不少于6只，貓或犬每組不少于4~5只。還應(yīng)考慮實驗操作的難易：復(fù)雜的實驗，即使計量實驗用大鼠，5~6只也可以。2）隨機：中藥藥理實驗對象為生物樣本，個體差異較大，動物分組必須按隨機原則處理。常用的隨機方法有：①按隨機數(shù)字表分組法；②分層分組法：小鼠常采用此法。按此分組的結(jié)果，各實驗組小鼠平均體重基本相同。所以藥效學(xué)實驗設(shè)計必須設(shè)立適當(dāng)?shù)膶φ战M。①正常對照組：即空白對照組，不加任何處理的正常條件下進行觀察的對照。如實驗需手術(shù)者還需設(shè)立假手術(shù)組。③陽性對照組：所用藥物是已知藥效確切、藥典收載、部頒標(biāo)準(zhǔn)或正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的（市場化）同類中藥的西藥。所用劑量參照被研究新藥臨床等倍量，如被研制新藥中劑量組相當(dāng)于臨床量15倍時，陽性藥也可采用15倍臨床量給予。如：研究某一中藥降血糖作用，觀察對四氧嘧啶致糖尿病小鼠的降糖作用，可設(shè)立空白對照組：灌胃NS；模型對照組：靜注四氧嘧啶；陽性對照組：灌胃消渴丸，同時靜注四氧嘧啶；給藥組：灌胃被試中藥，同時靜注四氧嘧啶。在同次實驗中給藥組與對照組做到“五同”：同時間、同地點、同批動物、同等數(shù)量與同等條件三、實驗設(shè)計的內(nèi)容明確研究目的和意義：實驗設(shè)計，首先應(yīng)考慮研究目的和意義，根據(jù)研究的中心問題，進行實驗內(nèi)容設(shè)計，做到心中有數(shù)，有的放失。保持實驗可比性的原則。藥理試驗結(jié)果需經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理。藥理作用及其機理能用客觀方法定性地加以測量，取得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)。盡量研究各種接近中醫(yī)臨床證候的動物病理模型，按中醫(yī)藥治則，觀察中藥藥理與療效，但也不排除對正常動物或離體器官等的作用分析。要根據(jù)實驗?zāi)康摹⒎椒ǖ闹笜?biāo)的要求決定實驗動物、樣本及數(shù)量、計量資料，一般小動物（大、小鼠）每組8—12只，較大動物（兔、狗）每組5—8只是基本的，總量應(yīng)符合統(tǒng)計要求。 思考題：中藥藥理實驗設(shè)計的三個原則是什么？舉例：1．目的：探討降脂膠囊調(diào)血脂作用的效應(yīng)。給藥6周。：(1)末次給藥后，禁食12小時，斷頭取血，分離血清，分別測定以下指標(biāo)：①血脂類：TC、TG、LDLC、HDLC、oxLDL②氧化類：SOD、MDA③纖溶類： 6 ketoPGF1а、TXB④內(nèi)皮功能類：ET、NO （2）用RTPCR法測定主動脈ETmRNA水平：SAS軟件系統(tǒng)四：中藥藥理實驗研究設(shè)計的特殊性 中藥藥理實驗設(shè)計應(yīng)注意其特殊性。在設(shè)計中需考慮以下幾點：中藥質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化，避免各種影響因素：中藥生藥品種復(fù)雜，如不經(jīng)品種鑒定，其實驗研究結(jié)果就很不可靠。因此，有時雖為同一名稱的中藥，其實驗結(jié)果各地報導(dǎo)可能不同，甚至相反。結(jié)合中醫(yī)藥基本理論，注意中醫(yī)藥特色：中藥藥理的實驗研究，目前尚未形成獨立