【正文】 株生長發(fā)育過程中變化規(guī)律不多，所以，目前多數中藥的采收還是按傳統經驗結合植物生長一般規(guī)律而判定采收季節(jié)。（五）、炮制中藥炮制是我國特有的一門制藥技術，已有二千多年的歷史，對于這一豐富的民族遺產，目前尚不能用現代科學全面地加以說明，但迄今為止的化學、藥理、臨床等方面的研究已表明，炮制經驗大多是有價值的，炮制過程對化學成分含量，藥理作用確有明顯的影響。芍藥：安息香酸（苯甲酸）對胃有刺激作用，且可增加肝臟對該成分的解毒負擔。如延胡素：醋制品鎮(zhèn)痛作用強于生品。改變藥材成分的組成，加強或突出某一作用：如大黃：生大黃主要含結合型蒽苷—瀉下作用； 熟大黃經炮制后結合型蒽苷減少1/2，而抗菌成份游離型蒽苷含量增加，抗菌作用增強。如：中醫(yī)鉤藤只用其鉤，加工費時費力，現證明帶鉤的莖也有作用，可減少炮制程序。枳實、青皮水煎液口服未見有升血壓記載，但靜脈注射卻表現出明顯的升壓作用，說明近年來隨對藥物的效成分的提取及滅菌技術上的進步，不僅提高了某些古方的療效，而且出現了一些新作用，擴大了臨床應用范圍。在一定范圍內，藥物劑量的大小與其的效成分在血液中濃度的高低及其作用強度呈依賴關系；劑量過小，不出現效應；劑量過大，可能出現中毒癥狀。煎煮講究火候、時間：解表藥火力要強，時間要短；補益藥火力要溫和，時間需稍長。二、機體因素包括生理情況和病理狀態(tài)。3）精神狀態(tài)中醫(yī)認為：喜、怒、憂、思、悲、恐、驚七情對藥物作用有影響。耐受性：與上相反，對藥物敏感性低，多次應用后須加大藥量才能達到相似藥理作用強度。五苓散對正常犬或大鼠無利尿作用，但對臨床上水腫、小便不利的病人有利尿作用。三、環(huán)境因素包括：地理條件、氣候寒暖、飲食起居、家庭環(huán)境等。中醫(yī)認為：服藥要順應四時之序，一日之中因晝夜晨昏的交替對人體氣血運行、臟腑功能活動及疾病變化的影響。如雷公藤毒性以中午12時給藥小白鼠死亡率最高，20點~次晨8點最低。以達到高效低毒的目的。注冊分類：共分11類（2002年12月1日施行）新藥研制做到兩個突出，兩個基本原則：1）突出一個新字，既要有創(chuàng)新，要避免低水平重復；2）突出中藥特色，要在中醫(yī)藥理論指導下，用現代科學技術方法，在繼承基礎上不斷創(chuàng)新。如：抗癌中藥多從祛邪、扶正、增效、減毒四個方面研究，祛邪為主：即抑制或殺滅癌細胞；扶正；增強免疫功能，提高機體的抗病能力；增效：對癌癥患者化療與療效具有增效作用；減毒：對癌癥患者化療與放療具有減輕不良反應作用。2）以離體實驗為輔 離體器官包括離體心臟、離體主動脈條、離體腸管、離體子宮等。在此基礎上，進一步在組織水平、細胞水平、亞細胞水平乃至分子水平上探討試品的作用機理。參芪注射液對“氣虛證”小鼠免疫功能的影響，研究證明，在“氣虛證”動物模型上，免疫指標比正常動物普遍低下，在施以參芪注射液后，多項免疫指標明顯回升，而對正常動物則不如虛證模型動物升高明顯。觀測指標應選用特異性強、靈敏度高、重復性好、客觀、定量地反映藥效的先進指標，并進行多指標觀測。實驗動物選用具有動物飼養(yǎng)合格證的動物。還應注意：1）根據所研究試品的藥理作用，選用與人的疾病特點和機能反應近似的實驗動物。如抗AS藥研究，選用鵪鶉、鴿子、家兔，經造模后脂質斑塊易于形成，以鵪鶉優(yōu)于家兔，其易于飼養(yǎng)，經濟（2元/只），用藥量?。ㄔ炷Ｓ媚懝檀枷牧可伲?。實驗結果的處理和分析計數資料（質反應指標，是以“有”或“無”的方式出現，如死亡、睡眠、惇厥等）：常采用x2檢驗進行顯著性測定。一、二類新藥申報有此要求。中藥材中提取的單一化學成分可測定有關參數。以前兩種為常用。2）觀察試品的毒性癥狀：記錄并了解試品對器官組織損傷部位、損傷程度，反應出現時間，持續(xù)時間和恢復時間以及死亡時間。4）為藥效學及長期毒性試驗選擇劑量提供參考：藥效學劑量可選擇在 1/8~ 1/10LD50之間，在沒有任何參考資料的情況下，長毒劑量在1/3~1/15 LD50之間。如中藥制劑水溶性好的。4）觀察指標：給藥后觀察反應情況，記錄死亡時間、死亡前癥狀，各組動物的死亡數。動物的食量不僅影響體重，也影響毒性反應，要求給藥前禁食24h，以保證饑飽一致。LD50及其可信限的計算可參見實驗教材。方法：采用擬推薦的臨床給藥途徑，最大濃度，最大容積，一般擬一日內2~3次給予動物。（二）長期毒性試驗如果試品通過藥效學和LD50測定后，表明其有實用價值（有效，短期使用安全），可作長期毒性試驗。4）確定、無毒性反應的安全劑量，即無不良反應的最大劑量，為擬定人用安全劑量提供參考。2）劑量：一般設三個劑量組。3）給藥途徑和方法：選擇與推薦臨床試驗的給藥途徑相同。但三、四類中藥制劑，處方中無毒性藥材，無配伍禁忌，又未經化學處理，難以測出LD50，給藥劑量大于200g/kg，臨床用藥期1~3d者，可免做長期毒性試驗。④系統尸檢和病理組織學檢查：由眼觀察異常的器官應重點進行病理組織學檢查。第四節(jié) 中藥藥理實驗設計一、中藥藥理實驗設計的重要性 實驗設計是很重要的，中藥藥理研究首要的問題，就是對實驗研究的科學、合理、周密設計，因為實驗設計是實驗過程的依據，是實驗數據處理的前提，也是提高實驗研究質量的一個重要保證。在實驗設計時要注意重復，隨機和對照“三個基本原則”。這是藥理實驗設計必須要考慮的問題，這應按統計學的要求進行。還應考慮實驗操作的難易：復雜的實驗，即使計量實驗用大鼠，5~6只也可以。常用的隨機方法有：①按隨機數字表分組法；②分層分組法：小鼠常采用此法。所以藥效學實驗設計必須設立適當的對照組。如實驗需手術者還需設立假手術組。所用劑量參照被研究新藥臨床等倍量，如被研制新藥中劑量組相當于臨床量15倍時，陽性藥也可采用15倍臨床量給予。在同次實驗中給藥組與對照組做到“五同”：同時間、同地點、同批動物、同等數量與同等條件三、實驗設計的內容明確研究目的和意義：實驗設計，首先應考慮研究目的和意義，根據研究的中心問題，進行實驗內容設計，做到心中有數，有的放失。藥理試驗結果需經統計學處理。盡量研究各種接近中醫(yī)臨床證候的動物病理模型，按中醫(yī)藥治則，觀察中藥藥理與療效，但也不排除對正常動物或離體器官等的作用分析。 思考題：中藥藥理實驗設計的三個原則是什么？舉例：1．目的：探討降脂膠囊調血脂作用的效應。：(1)末次給藥后，禁食12小時，斷頭取血，分離血清，分別測定以下指標：①血脂類：TC、TG、LDLC、HDLC、oxLDL②氧化類：SOD、MDA③纖溶類： 6 ketoPGF1а、TXB④內皮功能類：ET、NO （2）用RTPCR法測定主動脈ETmRNA水平：SAS軟件系統四：中藥藥理實驗研究設計的特殊性 中藥藥理實驗設計應注意其特殊性。因此，有時雖為同一名稱的中藥，其實驗結果各地報導可能不同，甚至相反。目前比較成熟的方法是創(chuàng)制類似臨床各“證”的動物病理或生理模型來實驗研究中藥及其復方的藥理作用。這些應與臨床使用結合，與多學科配合才能實現。 研究的根本目的在創(chuàng)新、發(fā)展，要創(chuàng)新、要發(fā)展，就必然要揚棄一些陳舊、落后、甚至是錯誤的東西，也就是會“走樣”，和原來的有所不同。通過幾千年的臨床實踐，每種中藥從性味、歸經、功能、主治、用法、用量、配伍、宜忌等，歷代醫(yī)家都有大量論述，這是十分可貴的臨床經驗的結晶，是最樸素也是最真實的記載。！ 例1：麻黃堿的發(fā)現：麻黃為常用中藥，中醫(yī)認為麻黃有發(fā)汗解表、宣肺平喘、利水消腫等功能，臨床用于治療風寒感冒，胸悶咳喘、風水浮腫。陳自幼勤奮好學，他舅舅是當時頗有名氣的中醫(yī)，受其影響，陳氏也接觸過不少中醫(yī)藥知識，親眼目睹對某些疑難病的神奇療效，也有過在某些方面不如西藥的體驗。這是我國學者發(fā)表的第一篇具有重要影響的中藥藥理研究論文?，F已為世界衛(wèi)生組織肯定。哈維通過實驗創(chuàng)立了血液循環(huán)學說，從而使近代醫(yī)學宣告走上了實驗科學的道路，從而取得迅速發(fā)展。但整體實驗受體內神經、體液調節(jié)和各種復雜因素的干擾，較難深入了解事物的本質。中醫(yī)藥學以整體思想體系為基礎，重視宏觀控制與調節(jié)。在中藥藥理研究中，目前應用較多的動物模型主要有兩類：一類是以“病”的模型，另一類是建立中醫(yī)“證”的動物模型。建立不同證的動物模型是證藥結合研究的前提。但目前所建立的證還遠遠不能滿足中藥研究的需要。與中藥功效相關的系統藥理作用研究每一類中藥、每一味中藥的功效不是單一的，目前的研究往往存在重復和偏置現象。中藥藥理學是一門年輕的學科，僅有幾十年的歷史。中藥毒性研究中藥作用面理及物質基礎研究目的：說明藥物產生作用的靶器官或靶點，以及在靶器官和靶點上如何產生作用，引起效應。中藥復方的現代研究一、研究意義以藥探理：中藥復方的研究不在藥而在理，從中醫(yī)臨床選擇經典方進行現代藥理研究，以闡明中醫(yī)理論。開發(fā)新藥：新的組方、簡化處方（1）新的組方：此類新藥必須說明其在療效上、藥動學上、毒副反應上有什么優(yōu)越之處。中藥要發(fā)展必須：滿足患者：現代生活節(jié)奏快，人們不愿花時間去熬藥，還要分清先煎、后下。 例：治療冠心病的蘇合香丸是一大蜜丸，共16味中藥，有芳香開竅，行氣止痛之功，但不利于生產，經劃裁后為僅5味中藥的冠心蘇合丸（水丸或膠囊），繼續(xù)劃裁為蘇冰滴丸，僅兩味中藥（蘇合香、冰片）。研究內容包括兩個方面。藥物有兩種方法制備：共煎和單煎共沖，比較二者療效是否一樣，若不一樣，原因？二、研究中藥復方的方法（一）中藥現代研究方法總結中藥單味藥有效成分研究中藥復方拆方研究中藥復方全方研究中藥單味藥有效成分研究（1）什么是中藥單味藥有效成分研究：從中藥單味藥中尋找具有臨床藥理作用的有效成分。當用有效成分入藥時，可人為地加大藥用量及改變原藥材各種有效成分之間的比例來提高療效。F、解釋了一些單味中藥具有多種作用的原因（3）出現的問題A、藥材有作用，而提取出的成分無作用B、有效成分不等同于原藥材C、純化后的單體有些作用弱于粗提物，有些毒性增強D、最大的問題：中藥以單味藥形式應用于臨床非常少見，主要以復方的形式應用于臨床，不進行復方研究，無法真正揭示中藥奧秘。中藥復方拆方研究（1）什么是中藥復方拆方研究：將復方按照其組成拆開來進行研究。（1）什么是復方的全方研究：把復方作為一個不可分割的整體（一個黑箱），不對其物質成分進行研究，而只是對這一整體的藥理作用進行研究。使我們能站在一個較高的角度，對中藥復方多方面的作用產生一個較為全面的整體認識。（二）如何研究中藥復方主要是解決認識問題 進行多種有效成分研究是中藥復方現代研究的基本出發(fā)點。所以進行多種有效成分研究是中藥復方現代研究的基本出發(fā)點，不應該去從方中尋找單一、高效的有效成分。打比方：西藥的單一成分就象步槍子彈，威力大，只要命中則非死即傷，但命不中則無作用。何謂中藥復方中的有效成分？ 一個復方成分之多，足以令人望而卻步，哪些是有效成分？哪些是無用成分？是研究中的一大難點，故提出黑箱理論，但此法實際上不能揭示中藥奧秘，故應拋棄。（瀉心湯）中藥有效成分的來源A、藥材固有的化學成分B、加工炮制和煎煮過程的產物C、腸內菌代謝產物D、吸收入血進入肝臟經“首過效應”的代謝產物。血清化學分析（分析含藥血清中的化學成分）靛玉紅的發(fā)現第七節(jié) 中藥的血清藥理實驗方法一、中藥血清藥理實驗方法的由來。：①中藥粗制劑中含有大量雜質，若直接加入體外反應系統，其滲透壓、pH值、鞣質、無機鹽等許多非特異性理化因素，會嚴重干擾實驗，產生假陽性或假陰性結果，故其科學性難以得到認可。4. 產生20世紀80年代中期，日本學者嘗試采用一種新的體外實驗方法來研究中藥方劑的藥理作用，即用中藥方劑給動物口服后，取其血清作為藥物源添加到離體的實驗系統中研究其藥理作用，并提出了血清藥理學的概念。1984年田代真一在日本國第一屆和漢醫(yī)藥學會上提出這種實驗方法后，其合理性得到了其他研究者的支持。認為血清添加法可以代替?zhèn)鹘y的直接添加法，且該方法比傳統方法與體內給藥的結果更為接近。20世紀90年代起。該方法的基本操作過程包括： 確定供血清動物給藥（劑量？次數？）采血（時間？）分離血清（滅活？）加入離體反應系統中實驗觀察（加入量？）或保存（一）確定供血清動物選擇什么動物作為含藥血清的供體？用不同種屬動物和人體志愿者的血清觀察對胚鼠成纖維細胞增殖的影響，結果發(fā)現其細胞毒作用，似與種屬親緣有關。目前實際工作中用得較多的供血動物還是大鼠。如某中藥常用量為10g，供血清動物如選用大鼠，其等效劑量系數粗略地以5計，體外反應系統中血清添加量以20%計（含藥血清稀釋5倍），則給藥劑量應為：*5*5=5g/kg。也有人認為給藥劑量不必很大，作為常規(guī)，采用整體動物實驗的有效劑量即可。 量效關系的研究還發(fā)現，血清藥理實驗也與中藥整體實驗一樣，在量效關系方面不如合成藥物那樣具有良好的線性關系，劑量過大，常反使藥效減弱。它理論上取決于以下兩個因素：其一是藥物有無蓄積性。（三）采血時間與方法采血時間：動物給藥后，應在什么時間采血制備含藥血清？如何保證采血時具有較高的血藥濃度。但從現有資料分析，半數以上藥物給藥后的高峰在1—2小時，目前大多采用這一時段采血。動物麻醉后，常規(guī)皮毛消毒，采血部位一般可取腹主動脈或頸總動脈，家兔或選心臟取血。通常采用的方法是55℃30分鐘滅活。因此，進行中藥血清藥理學實驗時，血清滅活與否，應視具體實驗而定。此外，血清對培養(yǎng)細胞還可能出現其他干擾，如有報道空白血清對自由基損傷的血管內皮細胞有一定的保護作用，培養(yǎng)基中如加入血清量過多可使該細胞模型難以形成。（六）含藥血清的保存 實驗證明，保存對藥效的影響，視藥物不同、環(huán)境條件和測試指標不同而異。（七）注意事項空白血清本身的活性：含藥血清的作用必須與空白血清做嚴格對照。