生物大分子的電子顯微鏡技術(shù)-在線瀏覽
2025-03-05 06:50本頁面
【正文】 樣品展層后 ,粘取至銅網(wǎng)上 ,經(jīng)過染色和金屬投影以增強(qiáng)反差 . 染色液為 1~2%的 PTA, (用 90%乙醇配制 ,100ml染液中含 1ml的濃硫酸 )或醋酸雙氧鈾 ,染色 10~30秒后 .自然晾干 . ? 投影 使核酸細(xì)分子的直徑加粗 染色后的樣品以投影角度 5~9186。,用鉑 ~鈀合金進(jìn)行旋轉(zhuǎn)投影 ,或再加噴一薄層碳膜 ,以增加強(qiáng)度 . 電鏡觀察要求 ?染色，投影后，核酸分子的直徑從 20A增至80~100A，故在 10萬倍以下可以觀察到； 蛋白質(zhì)單分子膜展層技術(shù)的原理 ? 某些堿性蛋白質(zhì)在低鹽溶液或水的表面形成不溶性變性薄膜，單濃度和加到溶液表面的量合適，該膜就展開成為單分子層，也就是一個多肽鏈構(gòu)成的分子網(wǎng)。展層時，核酸分子隨著蛋白質(zhì)在溶液表面的展開而被拉開伸展為彎曲的二維結(jié)構(gòu)。 特點(diǎn)和應(yīng)用 ? 樣品量少；操作簡便；制備樣品時間短。 蛋白質(zhì)單分子展層操作 ? 對核酸樣品和試劑的要求： ，去除其他混雜的核酸和蛋白質(zhì)成份； ,并盡量保持其長鏈的完整性 。 。 C,電泳純 。 RNA樣品的試劑與器具須高溫烘烤 ,使 RNA酶失活 . 樣品配制 ?醋酸銨法 : 上相液組成 :醋酸銨 (終濃度 )~2Mol() 核酸樣品 ~1ug∕ml 總體積 50ul 細(xì)胞色素 C ~∕ml 下相液 :~ ?甲酰銨法 : 上相液組成 :TrisNa3EDTA() ~
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