【正文】 子。他們把放射性標(biāo)記的氨基酸注射到大 鼠體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后收獲其肝臟，進行 蔗糖梯度沉淀并分析各種細胞成份中的放射 性蛋白質(zhì)。 ２．如果注射后幾分鐘內(nèi)即收獲肝臟，那么，放射 性標(biāo)記只存在于含有 核糖體顆粒 的細胞質(zhì)成份中。 ? 實驗 1: 用吖啶類試劑（誘導(dǎo)核苷酸插入或丟失）處理T4噬菌體 rII位點上的兩個基因，使之發(fā)生移碼突變（ frameshift），就生成完全不同的、沒有功能的蛋白質(zhì)。 ? 實驗 3: 以 均聚物 為模板指導(dǎo)多肽的合成。 ? 實驗 4: 以特定序列的共聚物為模板指導(dǎo)多肽的合成?！璘GU GUG UGU GUG UGU GUG…3? 不管讀碼從 U開始還是從 G開始，都只能有 UGU（ Cys）及 GUG（ Val）兩種密碼子。如以多聚（ UUC）為模板，可能有 3種起讀方式： ? 5?…UUC UUC UUC UUC UUC…3? ? 或 5?…UCU UCU UCU UCU UCU…3? ? 或 539。 ? 實驗 6: 以 隨機多聚物 指導(dǎo)多肽合成。 ? 實驗 6: 如，以只含 A、 C的多聚核苷酸作模板，任意排列時可出現(xiàn) 8種三聯(lián)子，即 CCC、CCA、 CAC、 ACC、 CAA、 ACA、 AAC、AAA，獲得由 Asn、 His、 Pro、 Gln、 Thr、Lys等 6種氨基酸組成的多肽?，F(xiàn)將氨基酸活化后的產(chǎn)物稱為氨基酰 tRNA，并把催化該過程的酶稱為氨基酰合成酶。 3）氨基酸的 “ 活化 ” 與核糖體結(jié)合技術(shù) 當(dāng)體系中帶有多聚核苷酸模板時，從大腸桿菌中提取的核糖體經(jīng)常與特異性氨基酰 tRNA相結(jié)合。 遺傳密碼的性質(zhì) （ 1）起始碼與終止碼 : ? AUG是原核生物和真核生物起始密碼（第一個氨基酸是蛋氨酸），少數(shù)細菌用 GUG做為起始碼。（ 起始密碼 ： AUG、 GUG 和 CUG） ? 密碼子 UAA， UAG， UGA是肽鏈成的終止密碼 ，不代表任何氨基酸。 如果在讀框中間插入或缺失一個堿基就會造成移碼突變，引起突變位點下游氨基排列的錯誤。 （ 3）密碼的簡并性： 簡并性主要是第 ３ 個堿基發(fā)生擺動現(xiàn)象形成的，即密碼子專一性由 前２個 堿基決定。（糾錯？？） ? （ 3）密碼的簡并性： 編碼某一氨基酸的 密碼子越多 ，該氨基酸在蛋白質(zhì)中出現(xiàn)的 頻率 越高（精氨酸例外）。 專一性主要由這 ２ 個堿基對的作用造成 。 如：第１個堿基為 C或 A時 1個； U或 G時 2個即 U可以與 A或 G， G可以與 U或 C；當(dāng) Inosine（ I）能識別３個密碼子。 ? 要求至少有 32種 tRNA與 61種密碼子對應(yīng)。因此這張密碼表 是生物界通用的 。內(nèi)部甲硫氨酸密碼子有兩個，即 AUG和 AUA；而起始甲硫氨酸密碼子有四組，即 AUN。 （ 4）密碼的通用性： 如線粒體 UGA不是終止碼，而是色氨酸的密碼子， AGA， AGG不是精氨酸的密碼子，而是終止密碼子。 內(nèi)部甲硫氨酸密碼子有２個，即 AUG和 AUA；而起始甲硫氨酸密碼子有 ４ 組，即AUN。 ? 1966年， Crick根據(jù)立體化學(xué)原理提出 擺動假說 （ 變偶假說 ），解釋了反密碼子中某些稀有成分如 I以及許多有 2個以上同源密碼子的配對問題。 ② 反密碼子的 5?位的 U被修飾 可使之優(yōu)先與 密碼子的第 ３ 位的 A配對勝過與 G配對 密碼子的使用頻率與反密碼子的關(guān)系 ③ 反密碼子的 5?位的 I與密碼子的 U和 C配對 優(yōu)先于 A配對。 密碼子的使用頻率與反密碼子的關(guān)系 二． tRNA ? 序： tRNA(transfer RNA)是蛋白質(zhì)合成中的接合器分子。 二． tRNA ? 序： tRNA中含有 10%～ 20%的稀有堿基，如：mG、 mA，雙氫尿嘧啶 (DHU)、 次黃嘌呤 等等。 二． tRNA ? tRNA在蛋白質(zhì)合成中處于關(guān)鍵地位，被稱為 第二遺傳密碼 。 ? 代表相同氨基酸的 tRNA稱為 同工 tRNA。 tRNA的三葉草型二級結(jié)構(gòu) ? tRNA主要由 ２ 條手臂引起的。每個tRNA分子 至少有 2個稀有堿基 ，特別是在反密碼子 339。對維持反密碼子環(huán)的穩(wěn)定性及密碼子、反密碼子之間的配對是很重要的。 TφC臂 是根據(jù) 3個核苷酸命名的，其 φ表示擬尿嘧啶，是 tRNA分子不常見的核苷酸。 D臂 是根據(jù)它含有 二氫尿嘧啶 （ dihydrouracil）命名的。 ? tRNA的功能： ①運輸?shù)墓ぞ?，運載 aa。 4． tRNA的種類 （ 1）起始 tRNA和 延伸 tRNA 能特異地 識別 mRNA模板 上起始密碼子的 tRNA叫起始 tRNA，其他 tRNA統(tǒng)稱為延伸 tRNA。 4． tRNA的種類 ? （ 2）同工 tRNA 代表同一種氨基酸的 tRNA稱為 同工 tRNA，同工 tRNA能識別同義密碼，同時能被 AA tRNA合成酶識別。某個氨基酸的密碼子變成 終止密碼子 （ UAG、 UGA、UAA），使蛋白質(zhì)合成提前終止，合成 無功能的或無意義的多肽 ，這種突變就稱為 無義突變 。原核生物有 20種氨酰 tRNA合成酶， 每一種專一地對應(yīng)一種 AA。 tRNA受體螺旋結(jié)合域： 插入催化域中，與 tRNA接觸。 三． AA tRNA合成酶 ? AA tRNA合成酶是一類催化氨基酸與 tRNA結(jié)合的特異性酶，其反應(yīng)式如下： 第一步是氨基酸活化生成酶 氨基酰腺苷酸復(fù)合物。 EAAAMP+ tRNA→ AA tRNA +E+AMP ? 蛋白質(zhì)合成的真實性主要決定于 AA tRNA合成酶是否能使氨基酸與對應(yīng)的 tRNA相結(jié)合。 ? 不同的 tRNA有不同堿基組成和空間結(jié)構(gòu)，容易被 tRNA合成酶所識別，困難的是這些酶如何識別結(jié)構(gòu)上非常相似的氨基酸。 四．核糖體 ? 核糖體像一個能沿 mRNA模板移動的工廠，執(zhí)行著蛋白質(zhì)合成的功能。一個細菌細胞內(nèi)約有 20220個核糖體，而真核細胞內(nèi)可達 106個，在未成熟的蟾蜍卵細胞內(nèi)則高達 1012。 ? 原核生物核糖體由約 2/3的 RNA及 1/3的蛋白質(zhì)組成。 核糖體可以解離為 2個亞基 . 大腸桿菌核糖體小亞基由 21種蛋白質(zhì)組成，分別用 S1……S21表示，大亞基由36種蛋白質(zhì)組成，分別用 L1……L36表示。 （ 1） 5S rRNA：有兩個高度保守的區(qū)域， 其中 CGAAC區(qū)與 tRNA作用， GCGCCGAAUGGUAGU區(qū)與 23S中 一段序列互補。 其 3?端序列 ACCUCCUUA與 mRNA起始區(qū)序 列互補，故稱解碼位點。 rRNA （ 3） 23S rRNA：由 2904個 aa殘基組成，折疊 成部分雙螺旋結(jié)構(gòu)。 rRNA （ 4） rRNA：真核生物大亞基特有，由 160個 aa殘基組成，含有修飾堿基。 真核生物中還有 18S rRNA、 28S rRNA等 rRNA 原核生物 rRNA分為 5S、 16S、 23S三種。小亞基由 16SrRNA和 21種 rps構(gòu)成，大亞基由 5S、 23s rRNA和 31種 rpl（ 核糖核蛋白體 ）構(gòu)成。各種生物核蛋白體小亞基中的 rRNA具有相似的二級結(jié)構(gòu) (圖 )。 ? 小亞基有 mRNA結(jié)合位點，負責(zé)對起始位點的識別和密碼子與反密碼子的相互作用。 A位、 P位、轉(zhuǎn)肽酶中心等主要在大亞基上。核糖體的解離或結(jié)合取決于 Mg2+離子濃度 。 五 . 蛋白質(zhì)的生物合成 ? 蛋白質(zhì)的生物合成亦稱為翻譯（ Translation），即把 mRNA分子中堿基排列順序轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì)或多肽鏈中的氨基酸排列順序過程。 ? 20種以上 AAtRNA及合成酶、 10多種起始因子、延伸因子及終止因子， 30多種 tRNA及各種 rRNA、mRNA和 100種以上翻譯后加工酶參與蛋白質(zhì)合成和加工過程。 真核生物中已發(fā)現(xiàn) 10余種功能重要的蛋白因子 ? 已 知 功 能