高中生物課件53血紅蛋白的提取和分離-在線瀏覽
2025-02-25 13:09本頁(yè)面
【正文】 ① 電泳的概念 : 指 帶電粒子 在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。 ③ 分離方法 : 瓊脂糖凝膠電泳 、 聚丙烯酰胺凝膠電泳 等。 退出 目錄 3 .緩沖溶液 ( 1 ) 組成 : 通常由 1 ~2 種 緩沖劑 溶解于水中配制而成。 ( 2 ) 作用 : 抵制外界的酸和堿對(duì)溶液 pH 的影響 , 維持 pH 基本不變。細(xì)胞外液也有酸堿緩沖對(duì) ,你能回憶并說(shuō)出細(xì)胞外液中的酸堿緩沖對(duì)嗎 ? 提示 :細(xì)胞外液中主要的酸堿緩沖對(duì)有 : H2CO3/NaH C ONaH2PO4/Na2HP O4等。 ( 4 ) 純度鑒定 : SD S — 聚丙烯酰胺凝膠電泳 2. 凝膠色譜操作 ( 1 ) 凝膠色譜柱的制作 ( 2 ) 凝膠色譜柱的裝填 固定 : 將色譜柱 垂直 固定在支架上。 ↓ 洗脫 : 裝填完后 , 立即用緩沖液洗脫瓶 , 在約 5 0 c m 高的操作壓下 , 用3 0 0 m L 的物質(zhì)的量濃度為 2 0 m m o l/ L 的 磷酸緩沖液 ( pH 為 7 . 0 ) 充分洗滌平衡凝膠 1 2 h 。 ② 加透析樣品 調(diào)整緩沖液面 : 與凝膠面平齊。 ↓ 樣品滲入凝膠床 : 加樣后 , 打開(kāi) 下端出口 , 等樣品完全進(jìn)入凝膠層后 ,關(guān)閉下端出口 。 ↓ 收集 : 待 紅色的蛋白質(zhì) 接近色譜柱底端時(shí) , 用試管收集流出液 , 每 5 mL 收集一管 , 連續(xù)收集。 洗滌次數(shù) 過(guò)少 , 無(wú)法除去血漿蛋白 。 退出 目錄 ( 2 ) 色譜柱填料的處理 : 商品凝膠使用前需直接放在 洗脫液 中膨脹 ,可以將加入其中的 濕凝膠 用 沸水浴 加熱 , 加速膨脹。氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的 洗脫次序 , 降低 分離效果 。 退出 目錄 預(yù)習(xí)交流 2 —— 凝膠色譜柱和固定化酶的反應(yīng)柱有何區(qū)別 ? ( 1 ) 凝膠色譜柱和固定化酶的反應(yīng)柱都裝填有不能通過(guò) “ 柱 ” 下端多孔板 ( 或多孔篩板 ) 的顆粒 ,它們的顆粒功能有何不同 ? 提示 :凝膠色譜柱裝填的是凝膠顆粒 ,允許小分子進(jìn)入 ,不允許大分子進(jìn)入 ,通過(guò)延長(zhǎng)小分子的路程使大分子與小分子分離。 ( 2 ) 凝膠色譜柱和固定化酶的反應(yīng)柱都能進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)嗎 ? 提示 :不是。 退出 目錄 課堂 合作探究 問(wèn)題 導(dǎo)學(xué) 一、血紅蛋白提取和分離的原理 活動(dòng)與探究 1 1 . 分離生物大分子的基本思路是什么 ? 提示 :選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子。 3 . 凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理是什么 ? 提示 :當(dāng)相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子通過(guò)凝膠時(shí) ,相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙 ,路程短 ,流動(dòng)快 。因此可將相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分離。 提示 :電泳能使帶電分子向與其所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)。 退出 目錄 遷移與應(yīng)用 1 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí) , 相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì) ( ) 。而相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道 ,只能在凝膠外部移動(dòng) ,路程較短 ,移動(dòng)速度較快。 S DS 能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)S
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