血紅蛋白的提取和分離-在線瀏覽
2024-11-04 07:01本頁(yè)面
【正文】 量。,2. SDS作用機(jī)理:,第十二頁(yè)，共三十九頁(yè)。d236。n yǒnɡ)，根據(jù)分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。,第十三頁(yè)，共三十九頁(yè)。,二、實(shí)驗(yàn)(sh237。n)操作,樣品處理→粗別離→純化→純度(ch)鑒定,蛋白質(zhì)提取和別離(fēnl237。,每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子(fēnzǐ)氧或一分子(fēnzǐ)二氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色。h243。nb225。,用雞的紅細(xì)胞提取DNA，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白(xu232。ng d224。i)的原因是什么？,雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有DNA，便于進(jìn)行DNA的提??；人的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單(jiǎndān)，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。,(1)紅細(xì)胞的洗滌(xǐd237。)目的:,去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 別離(fēnl237。,②洗滌操作：,采集血樣。 鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％的氯化鈉溶液洗滌。,1.樣品處理及粗別離,〔二〕操作過(guò)程,第十八頁(yè)，共三十九頁(yè)。,(3)別離血紅蛋白(xu232。ng d224。i)溶液：,①過(guò)程：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min。ngc236。 ③別離：用濾紙過(guò)濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。,(4)透 析：,①過(guò)程(gu242。ng)：取1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的物質(zhì)的量濃度為20mmol/l的磷酸緩沖液中〔pH為7.0〕，透析12小時(shí)。,第二十頁(yè)，共三十九頁(yè)。 pǔ)操作:,〔1〕凝膠色譜(s232。②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安裝移液管頭部→覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好，插到玻璃管的一端。③頂塞的制作：打孔→安裝玻璃管。⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。,〔2〕凝膠色譜(s232。 B、代表意義：“G〞表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及別離范圍。 ②凝膠的前處理(chǔlǐ)：配置凝膠懸浮液：計(jì)算并稱(chēng)取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。,③凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。 注意： 凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。i)氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低別離效果。 pǔ)柱的裝填,第二十三頁(yè)，共三十九頁(yè)。)壓下，用300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液〔pH為7.0〕充分洗滌平衡12小時(shí)。不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。 pǔ)柱的裝填,第二十四頁(yè)，共三十九頁(yè)。ngpǐn)參加與洗脫,①調(diào)節(jié)(ti225。)緩沖液面：翻開(kāi)下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。,第二十五頁(yè)，共三十九頁(yè)。)是：不要觸及并破壞凝膠面。使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)。,③樣品滲入凝膠床：加樣后翻開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全(w225。n)進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口 ④洗脫：小心參加pH=7.0 的20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連
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