組化3第三章酶組化-在線瀏覽
2025-02-23 07:20本頁面
【正文】 高溫等），酶活性喪失大部分。此外，尚有非溶酶體性 ACP。 ACP也參與脂肪代謝?？傊诩膊?、免疫反應(yīng)和細(xì)胞損傷與修復(fù)過程中 ACP均具有一定的生物學(xué)意義。 （三）光鏡顯示 ACP有鉛法和偶氮偶聯(lián)法： 鉛法： 1）孵育液的配制： , 10ml 蔗糖 g 硝酸鉛 Pb(NO3)2 10mg 3%(約 )β甘油磷酸鈉 1 ml 按上述順序加入 ,待硝酸鉛完全溶解后再逐滴 加入底物 ,邊加邊攪至溶液完全透明。 1 3）對照： 在孵育液內(nèi)加入 mol/L氟化鈉 (NaF)抑制劑后 ,ACP 反應(yīng)呈陰性。 5）說明： ACP是可溶性酶，以冷固定后結(jié)果 較滿 意 .石蠟切片制作過程易使酶 失活。－甘油磷酸 ，葡萄糖－６－磷酸 。 （二）反應(yīng)原理 ? 底物經(jīng)酶水解，用金屬離子捕捉生成的磷酸離子而形成沉淀。 （ 三 ） 光鏡顯示方法 鉛法 （ Wachs和 Meisel 1956） （ 1） 取材：新鮮組織冰凍切片 （ 2） 孵育液的配制： 腺苷－５ ˊ－磷酸鈉 4mg Tris蘋果酸緩沖液 （ Trismaleate buffer） pＨ 4ml MgSO4(%） 1ml 2%硝酸鉛 蒸餾水 （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織冰凍切片 ,或冷 10%福爾馬林 固定冰凍切片 。 ③ 入孵育液 ,恒溫 37℃ ,孵育 20~60分鐘 。 ⑤ 入 1%硫化銨 1分鐘 。 ⑦ 甘油明膠封固。 (5)對照 : 可除去底物 ,或以 223。 四 、 葡萄糖－ 6－磷酸酶 (一 )名稱 常用名 : 葡萄糖－ 6－磷酸酶（ Glucose6 phosphatase Phosphohydro lase） 葡萄糖－ 6－磷酸酶是一種催化多種磷酸化合物水解的磷酸酶 。 （ 二 ） 光鏡顯示方法 鉛法 （ Wachstei和 Meisel 1956） （ 1） 原理：葡萄糖－ 6－磷酸被釋放出磷酸后 ， 為硝酸鉛所捕獲 ， 最終反應(yīng)產(chǎn)物為顆粒狀的硫化鉛沉淀 。 （ 1）方法與步驟： ① 新鮮組織 ,冰凍切片 , ② 3%冷福爾馬林固定 5分鐘 。 ⑤ 水洗； ⑥ 入 1%硫化胺 1分鐘 。 (4)結(jié)果與評價 : 棕色硫化鉛顆粒為活性所在部位。－甘油磷酸鈉代替葡 萄糖－ 6－鈉鹽 ；③以 制劑。 ATPase水解磷酸之間的高能鍵，釋放大量的能量，而不是水解磷酸與碳之間的鍵。最適 pＨ 。 膜 ATP酶：又分為 Na+、 K+激活 ATPase 和 Mg2+激活 ATPase； 肌球蛋白 ATP酶：又稱 Ca2+激活 ATPase， 因?yàn)樗杀?Ca2+激活； 線粒體 ATP酶：由 Mg2+激活的ATPase （ 三 ） 光鏡顯示方法
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