【正文】 命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? 金霉素、土霉素和去甲基金霉素是 3 種由微生物自然產(chǎn)生的四環(huán)素類藥物，已經(jīng)被成功地從真菌中分離出來(lái)； ? 其他四環(huán)素類藥物如強(qiáng)力霉素、甲烯土霉素、二甲胺四環(huán)素、毗甲四環(huán)素及四環(huán)素則是通過(guò)半合成法制備的 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? 二、四環(huán)素類抗生素的毒性及其代謝 ? 四環(huán)素類藥物為廣譜抗生素，是相互關(guān)系密切的抑菌性抗生素，抗菌譜和毒性相似，對(duì)多種 α溶血性鏈球菌、非溶血性鏈球菌、革蘭陰性桿菌、立克次體、螺旋體、支原體屬和衣原體屬均有效。近些年來(lái)，在牛、豬、綿羊、山羊、家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的四環(huán)素類抗生素主要是 土霉素、金霉素、四環(huán)素和強(qiáng)力霉素 等。 ? 無(wú)論采用何種給藥方式，四環(huán)素類抗生素都能在體內(nèi)廣泛分布，而在 腎臟 和 肝臟 組織中含量尤高。 ? 相反，由于 四環(huán)素類抗生素對(duì)鈣具有親和性 ，能在家禽、豬、牛以及魚類的骨骼組織中蓄積。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) 三、四環(huán)素類獸藥殘留樣品前處理 ? （一）樣品提取 ? 由于四環(huán)素類抗生素的強(qiáng)極性性質(zhì)，在生物樣品中易與蛋白質(zhì)形成共軛物而提取困難。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? 多數(shù)四環(huán)素類化合物對(duì)光敏感，而且在強(qiáng)酸或堿性條件下不穩(wěn)定，在弱酸性（ pH=3 ）條件下形成差向異構(gòu)體，在強(qiáng)酸性（ pH 2 ）條件下形成脫水產(chǎn)物。 ? 在凈化步驟之前，還需采用乙酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?？刹捎们兴闄C(jī)和組織均質(zhì)器通過(guò)機(jī)械分散作用來(lái)完成這一步驟。 ? 主要困難在于這些化合物在被分離時(shí)傾向于與金屬離子形成鰲合物或與樣品基質(zhì)成分鍵合。同時(shí)需要考慮采取適當(dāng)?shù)奶崛l件以減少與蛋白質(zhì)的鍵合。 ? pH4 .0 的琥珀酸鹽緩沖液、酸性乙睛和酸性甲醇 都被成功應(yīng)用于四環(huán)素類抗生素的提取。如果樣品的最終溶液中含有共提取物，會(huì)增加檢測(cè)器的背景噪聲，難以檢測(cè)痕量濃度水平的待測(cè)物質(zhì)。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? ? SPE 由于不需要大容量的溶劑，樣品基質(zhì)中的四環(huán)素類抗生素。 ? TCs 具有苯環(huán)、多種活性官能團(tuán)，因此各種如的 SPE 都能用于 TCs 的凈化， SPE 主要包括 C18 柱、陽(yáng)離子交換柱、苯基 SPE 柱等。由于四環(huán)素類抗生素易于和金屬離子鰲合，為避免待測(cè)物在過(guò)固相萃取柱時(shí)的潛在損失，一般先采用 EDTA 對(duì)反相固相萃取柱進(jìn)行預(yù)處理。 ? 存在問(wèn)題：四環(huán)素類化合物由于極性太強(qiáng)，在任何 pH 值都不能被定量轉(zhuǎn)移入不互溶的有機(jī)相。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? （三）四環(huán)素類獸藥的分析 ? 四環(huán)素類抗生素殘留的測(cè)定方法主要包括微生物抑制法、 酶聯(lián)免疫法、分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色譜一質(zhì)譜法等。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? ? 微生物法是一種傳統(tǒng)的測(cè)定四環(huán)素類化合物和其他抗生素的分析方法。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? 蠟狀芽抱桿菌 ATCC 11778 是一種經(jīng)典的用于分析四環(huán)素類的微生物，其對(duì)金霉素的靈敏度為 / L ，對(duì)四環(huán)素和土霉素的靈敏度為 / L ，對(duì)二甲胺四環(huán)素的靈敏度為 ~ / L 。 ? 微生物抑制法的最大缺點(diǎn)是不能區(qū)分具體的四環(huán)素種類，因此也難以進(jìn)行定量檢測(cè)。 ? 四環(huán)素 牛血清白蛋白共軛物 用于抗體制備，同源的四環(huán)素 β 酪蛋白共軛物作為包埋試劑，而羊抗兔 IgG辣根過(guò)氧化物酶作為第二抗體。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? 當(dāng)采用商業(yè)化試劑盒檢測(cè)蜂蜜中的四環(huán)素、金霉素和土霉素殘留時(shí)發(fā)現(xiàn)其對(duì)金霉素具有強(qiáng)烈的交叉反應(yīng)活性。 陽(yáng)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)系 農(nóng)獸藥殘留檢測(cè) ? ? 薄層